本文關(guān)鍵詞： 微小RNA-21 腸道屏障功能 潰瘍性結(jié)腸炎 炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌 腫瘤相關(guān)性炎癥因子　出處：《上海交通大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： 檢測微小RNA-21（miR-21）在慢性潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）及結(jié)腸癌（colon cancer）組織中的表達(dá)水平，明確miR-21基因敲除（miRNA-21knockout, miR-21KO）小鼠與對(duì)照鼠（wild type,WT）對(duì)腸道損傷與結(jié)腸腫瘤誘導(dǎo)的差異反應(yīng)，探討miR-21調(diào)控腸道屏障功能與炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌（colitis-associated colon cancer,CAC）的作用機(jī)制。 方法： （1）利用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time quantitative polymerasechain reaction，qRT-PCR）技術(shù)，檢測UC患者、結(jié)腸癌患者結(jié)腸組織病理標(biāo)本與對(duì)照的正常結(jié)腸粘膜組織中miR-21的表達(dá)水平；利用蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）及免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）技術(shù)檢測miR-21KO小鼠與對(duì)照WT組小鼠炎癥相關(guān)性結(jié)腸腫瘤組織中調(diào)控炎癥與腫瘤發(fā)生發(fā)展的細(xì)胞信號(hào)通路關(guān)鍵分子及炎癥性腫瘤的相關(guān)指標(biāo)分子的表達(dá)水平。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測結(jié)腸癌患者血清與小鼠血清及小鼠結(jié)腸損傷組織培養(yǎng)上清中各種炎癥及腫瘤相關(guān)因子的含量，應(yīng)用線性回歸法統(tǒng)計(jì)37例結(jié)腸癌患者腫瘤組織中miR-21的表達(dá)量與對(duì)應(yīng)促腫瘤性炎性細(xì)胞因子mRNA（TNF-α、IL-6、IL-21）的表達(dá)量的相關(guān)性并計(jì)算腫瘤組織中miR-21的表達(dá)量與對(duì)應(yīng)結(jié)腸癌患者血清中促腫瘤性炎性細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6、IL-17A）的蛋白含量的相關(guān)性。 （2）利用miR-21flox/flox小鼠與E2α-Cre (Strain Name: B6.FVB-Tg (EIIa-cre) C5379L mgd/J, The Jackson Laboratory, USA)小鼠雜交構(gòu)建miR-21KO小鼠模型。應(yīng)用3.5%（w/v）葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfatesodium, DSS）誘導(dǎo)小鼠的腸道炎癥損傷模型，應(yīng)用氧化偶氮甲烷12.5mg/kg體重（azoxymethane,AOM）腹腔注射加2.0%DSS（w/v）經(jīng)飲水途徑攝入誘導(dǎo)小鼠的CAC模型。 （3）應(yīng)用熒光素異硫氰酸酯（fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-Dextran)胃飼檢測小鼠活體腸道通透性，評(píng)估腸道屏障功能。應(yīng)用Ki-67染色及TUNEL檢測結(jié)腸上皮細(xì)胞及腸道腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞的增殖凋亡情況，評(píng)估腸道的屏障功能及腸道腫瘤的發(fā)生發(fā)展情況。 （4）應(yīng)用疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index, DAI）評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估DSS及AOM/DSS誘導(dǎo)的腸道炎癥損傷的miR-21KO小鼠及對(duì)照WT小鼠的疾病狀態(tài)的差異。應(yīng)用組織病理學(xué)評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估DSS及AOM/DSS誘導(dǎo)的miR-21KO小鼠及對(duì)照WT小鼠腸道炎癥與損傷的程度。檢測腸道炎癥損傷誘導(dǎo)小鼠的血液學(xué)指標(biāo)（白細(xì)胞，紅細(xì)胞，血細(xì)胞比容等）差異情況，測量小鼠結(jié)腸長度及重量以評(píng)估m(xù)iR-21KO小鼠及對(duì)照WT小鼠對(duì)DSS及AOM/DSS誘導(dǎo)的腸道炎癥損傷的易感程度，應(yīng)用小鼠腸道腫瘤數(shù)量計(jì)數(shù)及腫瘤大小檢測評(píng)估m(xù)iR-21KO小鼠及對(duì)照WT小鼠對(duì)AOM/DSS誘導(dǎo)炎癥相關(guān)性結(jié)腸腫瘤的易感情況。 結(jié)果： （1）miR-21在炎癥損傷性腸道組織及結(jié)腸腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)照的正常腸道組織，結(jié)腸癌患者結(jié)腸腫瘤組織中miR-21的表達(dá)與對(duì)應(yīng)促腫瘤性炎性細(xì)胞因子mRNA（TNF-α、IL-6、IL-21）的表達(dá)量呈明顯的正相關(guān)，其與結(jié)腸癌患者血清中腫瘤相關(guān)性炎癥因子（TNF-α、IL-6、IL-17A）的含量也呈明顯的正相關(guān)。 （2）DSS誘導(dǎo)的miR-21KO小鼠腸道炎癥損傷程度明顯低于相同誘導(dǎo)情況下的對(duì)照組WT小鼠，經(jīng)DSS誘導(dǎo)腸道炎癥損傷后miR-21KO小鼠DAI評(píng)分明顯低于對(duì)照組WT小鼠，腸道炎癥損傷過程中血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果（血白細(xì)胞）明顯好于對(duì)照組WT小鼠，活體腸道通透性增加幅度也明顯低于對(duì)照組WT小鼠，死亡率明顯降低，結(jié)腸長度及重量減少程度也明顯小于對(duì)照組WT小鼠，血清及炎癥損傷腸道組織培養(yǎng)上清中炎癥因子含量升高幅度也明顯低于對(duì)照組WT小鼠，腸上皮細(xì)胞凋亡率、組織學(xué)病理評(píng)分均明顯低于對(duì)照組WT小鼠。 （3）AOM/DSS誘導(dǎo)的miR-21KO小鼠炎癥相關(guān)性結(jié)腸腫瘤成瘤數(shù)量明顯低于相同誘導(dǎo)情況下的對(duì)照組WT小鼠，miR-21KO小鼠炎癥相關(guān)性結(jié)腸腫瘤誘導(dǎo)過程中體重減輕程度明顯小于對(duì)照組WT小鼠，整個(gè)AOM/DSS干預(yù)過程中DAI評(píng)分低于對(duì)照組WT小鼠，miR-21KO小鼠炎癥相關(guān)性結(jié)腸腫瘤誘導(dǎo)的成瘤率、腫瘤數(shù)量及腫瘤大小均明顯低于對(duì)照組WT小鼠，組織病理學(xué)評(píng)分、組織炎癥因子與血清炎癥因子含量、腫瘤細(xì)胞的增殖率均明顯低于對(duì)照組WT小鼠，相關(guān)促腫瘤發(fā)生發(fā)展的基因及抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的基因的表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組WT小鼠均顯示出明顯的差異表達(dá)，，比如miR-21KO腸道腫瘤組織中較高的E-cadherin表達(dá)，較低的β-catenin、SOX-9表達(dá)，而炎癥相關(guān)性腫瘤細(xì)胞信號(hào)通路活性相對(duì)于對(duì)照組WT小鼠均明顯受到抑制，比如NF-κB-IL-6-STAT3炎癥相關(guān)性腫瘤細(xì)胞信號(hào)通路活化程度明顯低于對(duì)照組WT小鼠。此外miR-21KO結(jié)腸腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組小鼠。 結(jié)論： （1）miR-21在炎癥損傷性腸道組織中呈明顯的高表達(dá)，miR-21KO能明顯改善DSS誘導(dǎo)的腸道炎癥損傷性小鼠的生存時(shí)間，miR-21KO能夠有效的減弱腸道炎癥及組織損傷的發(fā)生。因此，在腸道組織中降低miR-21的表達(dá)可抑制炎癥性腸病患者疾病的發(fā)生與發(fā)展。 （2）腸道組織中miR-21的過表達(dá)能促進(jìn)腸道炎癥的發(fā)生，引發(fā)腸道免疫功能的紊亂，并在AOM/DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎癥相關(guān)性腫瘤發(fā)生的情況下促進(jìn)炎癥相關(guān)性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，因此，降低miR-21在腸粘膜中的表達(dá)能夠有效的降低炎癥性腸病患者罹患CAC的風(fēng)險(xiǎn)。
[Abstract]:Objective:
Detection of micro RNA-21 (miR-21) in chronic ulcerative colitis (ulcerative colitis, UC) and colon cancer (colon cancer) expression level in the organization, a clear miR-21 gene knockout mice (miRNA-21knockout, miR-21KO) and control group (wild, type, WT) in response to differences in intestinal injury and induced colon tumors, to investigate the regulation of miR-21 the intestinal barrier function and inflammation associated colon cancer (colitis-associated colon, cancer, CAC) mechanism.
Method錛

本文編號(hào)：1494812