本文關(guān)鍵詞：以支架為載體的TRADD基因慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)食管良性狹窄的抑制作用　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景食管良性狹窄引起的吞咽困難臨床較難解決,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量,并且引起嚴(yán)重并發(fā)癥。其治療常采用探條擴(kuò)張或球囊擴(kuò)張,但其復(fù)發(fā)率較高。目前對(duì)難治性良性食管狹窄治療主要是安裝食管支架。食管支架可顯著改善患者吞咽困難等癥狀。但是各食管支架仍有缺點(diǎn):自擴(kuò)張金屬支架(self-expandable metal stents,SEMS)兩端因金屬成分對(duì)食管黏膜的刺激作用,常導(dǎo)致肉芽組織增生而引起再狹窄,肉芽組織常將支架包埋,當(dāng)要移除金屬支架時(shí),可導(dǎo)致食管破裂。自擴(kuò)張塑料支架(self-expandable plastic stents,SEPS)能減少反應(yīng)性組織增生及增強(qiáng)支架移除安全性,但是其具有較高的支架移位率(62%)及緩解吞咽困難的時(shí)間較短]�？晌罩Ъ�(biodegrdable stents BDS)允許支架被組織包埋及不需要取出,但是其在食管內(nèi)一般只能發(fā)揮作用6周,不能有效支撐到8-12周以上,再狹窄發(fā)生率仍較高。因此,目前對(duì)難治性良性食管狹窄還缺乏滿意的治療手段]。食管良性狹窄主要是由于增生性瘢痕引起。目前的研究顯示,細(xì)胞凋亡與瘢痕增生、瘢痕疙瘩的形成密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡表現(xiàn)為凋亡信號(hào)通路的基因表達(dá),其最主要的傳導(dǎo)途徑為死亡受體(Death-receptor,DR)介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前已研究的死亡受體包括TNFR1,FAS,DR3,DR4,DR5,DR6,NGFR和EDAR,其中研究最徹底的是TNFR1,其與配體,即腫瘤壞死因子死亡受體相關(guān)死亡域蛋白(Tumor Necrosis Factor Receptor Associated Death Domain Protein,TRADD)結(jié)合,通過(guò)腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor alpha,TNF-α)介導(dǎo)的信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞的凋亡過(guò)程。在瘢痕組織中,因?yàn)門RADD的表達(dá)較低,從而抑制了腫瘤壞死因子介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑,進(jìn)而導(dǎo)致了增生性瘢痕成纖維細(xì)胞(Hypertrophic Scar Fibroblast,HSFB)的增殖失去調(diào)控而過(guò)度增殖,從而導(dǎo)致病理性瘢痕的形成。我們前期使用慢病毒載體系統(tǒng)成功構(gòu)建了人TRADD基因過(guò)表達(dá)慢病毒,將其轉(zhuǎn)染入HSFb后,該重組病毒可恢復(fù)HSFb中TRADD蛋白正常表達(dá),抑制HSFb細(xì)胞增殖,影響細(xì)胞分裂,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,降低I型膠原蛋白的分泌,從而減少hs的形成。因此,我們擬以氬離子凝固術(shù)構(gòu)建實(shí)驗(yàn)犬食管狹窄模型,以全覆膜食管支架作為載體,將tradd基因慢病毒轉(zhuǎn)染入食管狹窄段組織,觀察其抑制組織增生及防止再狹窄的效果。目的本實(shí)驗(yàn)觀察tradd基因慢病毒涂層食管支架置入后,tradd基因?qū)θ彻芰夹元M窄粘膜的轉(zhuǎn)染效果及對(duì)食管狹窄的抑制作用。方法1、將15只實(shí)驗(yàn)犬隨機(jī)平均分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及空白組,采用氬離子凝固器制作良性食管狹窄模型,分別置入gfp-tradd基因慢病毒涂層帶膜食管支架、gfp-慢病毒涂層食管支架、普通帶膜食管支架,1周后觀察支架脫落情況,并取出支架,2、3、4周胃鏡下觀察狹窄程度。2、4周后處死實(shí)驗(yàn)犬,對(duì)狹窄食管組織行病理、masson三色染色法、免疫熒光檢查。3、分別采用western-blot方法檢測(cè)tradd蛋白在三組食管組織中的表達(dá),同時(shí)檢測(cè)collagenⅠ、collagenⅢ、α-sma三種蛋白在食管組織中表達(dá)情況。結(jié)果1、置入食管支架1周后,胃鏡檢查見實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)犬帶膜支架全部移位進(jìn)入胃,對(duì)照組和空白組實(shí)驗(yàn)犬分別有2只、3只實(shí)驗(yàn)犬其帶膜支架移位進(jìn)入胃中,胃鏡取出所有實(shí)驗(yàn)犬未移位食管支架。此后每周測(cè)量其食管狹窄處直徑,可見對(duì)照組及空白組實(shí)驗(yàn)犬再次出現(xiàn)食管明顯狹窄,而實(shí)驗(yàn)組再狹窄較輕。采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的多因素方差分析,p〈0.01,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、食管狹窄組織he染色切片表明空白組和對(duì)照組的肉芽組織及纖維組織增生,而實(shí)驗(yàn)組肉芽組織及纖維組織增生較不明顯。masson三色染色法顯示實(shí)驗(yàn)組中,膠原纖維含量較空白組、對(duì)照組減少。免疫熒光鏡檢查可見實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)犬食管瘢痕中綠色熒光蛋白在黏膜下組織中有表達(dá),表明tradd基因慢病毒及慢病毒均在食管黏膜下生長(zhǎng)。3、western-blot檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)組gfp-tradd-flag蛋白,而空白組和對(duì)照組未檢測(cè)出該蛋白,表明tradd基因慢病毒成功轉(zhuǎn)染至食管黏膜下組織。western-blot顯示實(shí)驗(yàn)組collagenⅠ、collagenⅢ、α-SMA三種蛋白較其他兩組顯著降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論以支架作為載體可成功將TRADD慢病毒轉(zhuǎn)入食管粘膜組織中,可抑制狹窄部位組織增生,減少食管狹窄部位再狹窄發(fā)生。
[Abstract]:It is difficult to solve the difficulty of swallowing difficulty caused by benign esophageal stenosis , which seriously affects the quality of life of patients and causes serious complications . Objective To investigate the effect of tradd gene on the expression of TRADD protein in esophageal tissues and to observe the effect of tradd gene on esophageal stricture .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R571

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2 袁月;TRADD基因過(guò)表達(dá)慢病毒的構(gòu)建及其對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞選擇性抑制的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

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本文編號(hào)：1407796