本文關(guān)鍵詞：單核苷酸多態(tài)性與丙肝患者臨床表現(xiàn)及抗病毒治療應(yīng)答的相關(guān)性研究　出處：《吉林大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：作為導(dǎo)致肝硬化和原發(fā)性肝癌的一項(xiàng)重要因素,丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)目前在世界范圍內(nèi)導(dǎo)致1.3-1.5億人慢性感染,并每年造成35-50萬(wàn)人死亡。HCV感染可分為急性感染與持續(xù)性感染,約有70-80%的患者最終發(fā)展為慢性感染(chronic hepatitis C,CHC)。盡管直接作用抗病毒藥物(direct acting antivirals,DAAs)的普及大大提高了抗HCV治療的治愈率及減少了治療相關(guān)不良反應(yīng)的發(fā)生,但由于高額治療費(fèi)用、藥物的不易獲得等因素,聚乙二醇干擾素α聯(lián)合利巴韋林(peg-interferon-alpha/ribavirin,peg-IFN-α/RBV)的二聯(lián)療法在不少國(guó)家地區(qū)仍然占據(jù)重要地位。通過(guò)抗病毒治療,可以延緩甚至逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程,減少丙型肝炎相關(guān)并發(fā)癥,并提高生存率。獲得持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(sustained viral response,SVR)是HCV抗病毒治療成功的標(biāo)志。除去病毒學(xué)因素(病毒載量、HCV基因型及合并感染)和宿主因素(年齡偏大、男性、種族、胰島素抵抗、肝硬化及IL28B rs12979860 CC基因型等),二聯(lián)療法治療進(jìn)程還會(huì)因利巴韋林導(dǎo)致的溶血性貧血以及干擾素引起的血小板減少癥造成服藥依從性不佳,甚至中斷治療。因此,在抗病毒治療前,通過(guò)一些生物學(xué)標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)CHC患者的臨床表現(xiàn)(肝纖維化程度、貧血程度、血小板減少癥等)以及抗病毒治療應(yīng)答反應(yīng),可以及時(shí)調(diào)整以制定最佳治療方案,最終提高HCV病毒學(xué)清除率。本研究所涉及的遺傳學(xué)標(biāo)志物包括溶質(zhì)載體家族(solute carriers,SLCs)、Kruppel樣因子12(Kruppel-like factor,KLF12)、大麻素受體2(cannabinoid receptor 2,CNR2)及維生素D相關(guān)基因多態(tài)性。有研究表明,部分溶質(zhì)載體家族相關(guān)基因可編碼利巴韋林胞內(nèi)吸收的主要轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,從而影響體內(nèi)利巴韋林藥物濃度及抗病毒治療預(yù)后。Kruppel樣因子12可能通過(guò)改變血紅蛋白的β鏈結(jié)構(gòu)從而導(dǎo)致溶血性貧血。此外,維生素D缺乏已被證明與CHC患者聯(lián)合抗病毒治療預(yù)后較差及嚴(yán)重肝纖維化密切相關(guān)。而維生素D相關(guān)基因編碼的一系列產(chǎn)物在維生素D代謝通路中表現(xiàn)活躍,因此這些多態(tài)性位點(diǎn)可預(yù)測(cè)CHC患者聯(lián)合治療預(yù)后及肝纖維化程度。最后,由CNR2基因編碼的大麻素受體2在酒精性與非酒精性脂肪肝病中具有重要的肝保護(hù)作用,而發(fā)生在rs35761398位點(diǎn)的突變通過(guò)將編碼產(chǎn)物上63位點(diǎn)的谷氨酰胺(Q)替換為精氨酸(R)來(lái)削弱大麻素受體2的功能。目前有研究發(fā)現(xiàn)此位點(diǎn)可影響CHC患者與慢性乙型肝炎患者的肝臟組織病理學(xué)炎癥程度,而抗HCV治療預(yù)后方面則尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。因此,我們根據(jù)這些基因多態(tài)性位點(diǎn)不同的作用機(jī)制與影響區(qū)域,將研究分為3部分來(lái)分別探索它們對(duì)慢性丙型肝炎的可能的影響作用。1.SLC家族與KLF12相關(guān)基因多態(tài)性與抗病毒治療預(yù)后及治療相關(guān)不良反應(yīng)的關(guān)系:本組研究主要著力于探索SLC4A11 rs3810560,SLC16A9 rs12356193,SLC29A1rs760370及KLF12 rs9543524單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)在CHC患者HCV病毒清除(自發(fā)性與治療導(dǎo)致)及治療相關(guān)不良反應(yīng)方面潛在的影響。選用基質(zhì)輔助激光解吸電離化飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)來(lái)分析525名中國(guó)北方CHC患者、137名HCV自發(fā)清除者(spontaneous clearance,SHC)以及207名健康對(duì)照者(healthy controls,HCs)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)信息。所有研究對(duì)象在治療前行橫斷面研究,主要觀察這些SNP位點(diǎn)基因型分布在三組人群之間是否存在明顯差異,從而判斷其與HCV自發(fā)清除及HCV感染風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。357例符合抗病毒治療納入標(biāo)準(zhǔn)以及愿意接受治療的CHC患者接受了為期48周的重組普通IFN-α2b(5MU每日3次皮下注射)/RBV(口服,體重60kg者800mg/日,體重介于60-75kg之間者1000mg/日,體重75kg者1200mg/日)抗病毒治療,治療結(jié)束后持續(xù)隨訪24周,最后服藥依從性80%的患者被納入預(yù)后分析。175例接受抗病毒治療的患者被納入治療導(dǎo)致的相關(guān)不良反應(yīng)方面的研究,主要觀察血紅蛋白與血小板下降程度。我們?cè)诨�、治療第2、4、12、24、36、48周以及治療結(jié)束后第24周時(shí)進(jìn)行縱向隨訪研究,包括調(diào)查問(wèn)卷(服藥依從性)、收集血樣(血常規(guī)、肝功能檢查、生化學(xué)指標(biāo)及病毒學(xué)指標(biāo))以及肝纖維化超聲檢查(Fibro Scan)。有關(guān)單核苷酸多態(tài)性的皮爾森卡方檢驗(yàn)的原始P值,在進(jìn)行多因素logistic回歸分析前需用Bonferroni法進(jìn)行多重比較。本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:攜帶SLC4A11 rs3810560 CC型的患者獲得SVR的比率要明顯高于攜帶TT或TC型的患者,經(jīng)多因素回歸分析校正后,SLC4A11-CC基因型可獨(dú)立預(yù)測(cè)CHC患者聯(lián)合治療后的SVR率(OR,2.42;95%CI,1.06-5.56,P=0.037)。這種預(yù)測(cè)作用在不同HCV基因型的患者組中被削弱,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SLC29A1-AA基因型(OR,2.90;95%CI,1.29-6.54,P=0.010,全HCV基因型組;OR,4.22;95%CI,1.04-17.24;P=0.043,HCV-2a型組)為CHC患者(所有HCV基因型)聯(lián)合治療所致的溶血性貧血的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,在HCV-1b型患者組中無(wú)預(yù)測(cè)作用。與此同時(shí),SLC29A1-GG型(OR,4.98;95%CI,1.27-19.61;P=0.021)被視為與治療第4周出現(xiàn)嚴(yán)重血小板水平下降(20×109/L)獨(dú)立相關(guān),這種相關(guān)性同樣發(fā)生在HCV-2a型患者組(OR,6.99;95%CI,1.42-34.48,P=0.013)。在聯(lián)合抗病毒治療第3、4周期間,KLF12-TG或GG基因型是有效防止血小板下降的獨(dú)立保護(hù)因素(OR,4.44;95%CI,1.45-13.70,P=0.009)。2.維生素D相關(guān)基因多態(tài)性與抗病毒治療預(yù)后及肝纖維化程度的相關(guān)性分析:本組研究主要觀察GC rs7041及rs222020,CYP2R1 rs10741657與DHCR7rs12785878單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與CHC患者HCV病毒清除(自發(fā)性與治療導(dǎo)致)及肝纖維化程度之間是否存在相關(guān)性。本研究共納入869名研究人群,包括522例CHC患者(354名接受抗病毒治療的患者被納入預(yù)后分析,321名被納入肝纖維化分析)、137名SHC者以及210名健康對(duì)照。所有869名研究對(duì)象在治療前行橫斷面研究,主要觀察這些SNP位點(diǎn)基因型分布在三組人群之間是否存在明顯差異,從而判斷其與HCV自發(fā)清除及HCV感染風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。治療方案、隨訪內(nèi)容以及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法同第一部分研究。本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:攜帶GC rs222020位點(diǎn)TC基因型的患者獲得治療結(jié)束時(shí)應(yīng)答(end of treatment viral response,ETVR)的概率明顯高于TT型或CC型患者(TT vs.TC vs.CC,72.1%vs.86.2%vs.64.5%,P=0.004)。多因素回歸分析后,GC rs222020 TC基因型在獲得ETVR的患者中更常見(jiàn)(TC vs.TT,OR,2.94;95%CI,1.43-5.88,P=0.003;TC vs.TT/CC,OR,3.13;95%CI,1.56-6.25;P=0.001),并且年齡、基線時(shí)HCV RNA載量偏高、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及基線Fibro Scan指數(shù)是ETVR的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。此外,TC基因型對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)作用同樣適用于感染HCV-1b型的患者(TC vs.TT,OR,5.26;95%CI,1.85-14.29,P=0.002;TC vs.CC,OR,33.33;95%CI,3.70-500,P=0.002;TC vs.TT/CC,OR,5.88;95%CI,2.17-16.67;P0.001),且預(yù)測(cè)效能更高。攜帶GC rs222020 TC基因型的患者中重度肝纖維化概率明顯高于其他患者。隨后,在校正了年齡、性別、體重指數(shù)、HCV RNA載量、ALT水平、血小板比值、Fib-4指數(shù)等因素,GC rs222020 TC基因型是CHC患者中重度肝纖維化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR,2.05;95%CI,1.14-3.69,P=0.016,全HCV基因型組;OR,3.54;95%CI,1.48-8.46;P=0.004,HCV-1b型組)。3.CB2-63位點(diǎn)與抗病毒治療預(yù)后及肝纖維化程度的關(guān)系:本部分主要研究了CNR2 rs35761398(CB2-63)位點(diǎn)在CHC患者疾病進(jìn)展(臨床檢驗(yàn)指標(biāo)及肝纖維化程度)與抗病毒治療反應(yīng)方面的作用。本組研究只納入了接受了聯(lián)合抗病毒治療的CHC患者,其中359名患者被納入治療期間臨床檢驗(yàn)指標(biāo)變化趨勢(shì)分析與療效分析,212例在治療前與治療48周結(jié)束時(shí)行Fibro Scan檢查的患者被納入肝纖維化分析。治療方案、隨訪內(nèi)容以及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法同第一部分研究。本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:與其他患者相比,攜帶CB2-63 QQ基因型的患者更易獲得快速病毒學(xué)應(yīng)答(rapid viral response,RVR),多因素回歸分析后證實(shí)該位點(diǎn)可獨(dú)立預(yù)測(cè)抗HCV治療預(yù)后(OR,2.42;95%CI,1.13-5.18,P=0.023,全HCV基因型組;OR,4.41;95%CI,1.02-18.87,P=0.047,HCV-2a組)。我們還觀察到,攜帶CB2-63 QQ型的患者血小板水平(基線時(shí),治療第4、12、24周)與甘油三酯水平(基線、治療第12周及第36周時(shí))明顯高于攜帶QR或RR型的患者(P0.05),并且在HCV-1b型患者組中出現(xiàn)相似的分布趨勢(shì)。另一方面,攜帶CB2-63 QQ/QR基因型的CHC患者在抗病毒治療48周結(jié)束時(shí)發(fā)生中重度肝纖維化(≥F2,≥7.3k Pa)的概率明顯偏低(OR,5.94;95%CI,1.61-21.85;P=0.007,全HCV基因型組;OR,3.97;95%CI,1.71-9.24;P=0.001,HCV-1b型組)。綜上,我們的結(jié)論是:(1)研究所涉及到的基因多態(tài)性位點(diǎn)與HCV自發(fā)清除、HCV感染風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性。(2)SLC4A11 rs3810560基因多態(tài)性是慢性丙型肝炎聯(lián)合治療預(yù)后、利巴韋林相關(guān)性溶血性貧血與干擾素相關(guān)性血小板減少癥的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素;KLF12 rs9543524位點(diǎn)是早期抗HCV治療期間有效防止血小板下降的獨(dú)立性保護(hù)因素。(3)GC rs222020位點(diǎn)可獨(dú)立預(yù)測(cè)CHC患者聯(lián)合抗病毒治療后獲得ETVR,并且是患者治療前發(fā)生中重度肝纖維化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。(4)CB2-63基因多態(tài)性可獨(dú)立預(yù)測(cè)聯(lián)合治療RVR的獲得,并且與接受抗病毒治療的患者發(fā)生發(fā)展中重度肝纖維化的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
[Abstract]:As an important factor leading to cirrhosis and primary liver cancer , hepatitis C virus ( HCV ) currently leads to chronic infection of 1.3 - 150 million people worldwide and 35 - 500,000 people per year . HCV infection can be divided into acute infection and persistent infection , with about 70 - 80 % of patients eventually developing chronic hepatitis C , chc . 灝界鐩存帴浣滅敤鎶楃梾姣掕嵂鐗，

本文編號(hào)：1390085