本文關鍵詞：大鼠胰腺星狀細胞系的建立及其介導胰腺纖維化、炎癥、免疫功能的評價　出處：《吉林大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景和目的：胰腺星狀細胞（PSC）在胰腺纖維化的發(fā)病機制中起到至關重要的作用，近來的研究顯示：PSC具有胰腺外分泌功能，且具有祖細胞、免疫細胞和中介細胞的功能。由于缺乏穩(wěn)定的可在體外進行研究其多種功能的PSC系，PSC的廣泛、深入研究受到限制。越來越多的證據(jù)表明結蛋白（desmin）作為PSC的一種特異性細胞骨架蛋白，只在部分PSC中表達。本研究的目的是建立一種desmin表達陽性的永生化大鼠PSC系，并且評價其在介導胰腺纖維化、炎癥及免疫功能的作用。 方法：通過采用Rous肉瘤病毒啟動子和增強子驅動SV40大T抗原在大鼠原代PSC的表達建立永生化大鼠PSC系（RP-2）。采用免疫化學方法檢測細胞骨架蛋白desmin、整合素α5β1或TLR4的表達；采用Western blot方法檢測desmin、Collagen I、MMP-1、MMP-2、TIMP-2以及CD14的表達。采用實時定量PCR（qRT-PCR）法檢測desmin、Collagen I、IL-1和IL-6mRNA的轉錄水平。ELISA法檢測細胞因子分泌水平。通過細胞黏附、遷移和增殖實驗評價細胞功能。 結果：通過應用RSV啟動子和增強子驅動SV40大T抗原的表達建立了一個穩(wěn)定的永生化大鼠PSC系（RP-2）。這個細胞系已經(jīng)在體外穩(wěn)定培養(yǎng)傳代超過一年，RP-2細胞保留了原代激活PSC的形態(tài)和基因表達特征，，該細胞系呈纖維母細胞樣表型，且持續(xù)表達desmin。RP-2細胞可表達調(diào)節(jié)胰腺纖維化的主要基因，包括TGF-β1，PDGF，CTGF，Collagen I，F(xiàn)N以及參與基質(zhì)重構的蛋白質(zhì): MMP-1、MMP-2或TIMP-2。在TGF-β1作用下，這種細胞的1型膠原、CTGF和TIMP-2的表達增加，而MMP-1、MMP-2的表達減少。RP-2細胞具有PSC典型的功能，包括增殖、黏附和遷移，其中對FN的黏附和遷移是通過整合素α5β1介導。TLR4和其應答基因包括促炎因子（IL-1, IL-6, TNF-α）和趨化因子（MCP-1, MIP-1α, Rantes）由RP-2細胞產(chǎn)生并且在LPS作用下表達增強。LPS可誘導RP-2細胞IL-1和IL-6mRNA的表達并且可被MyD88抑制劑阻斷。 結論：本研究成功建立了穩(wěn)定的大鼠PSC系RP-2細胞。RP-2細胞為研究PSC在胰腺纖維化、炎癥和胰腺免疫發(fā)病機制方面提供了一個新的工具。
[Abstract]:Background and purpose: pancreatic stellate cells (PSC) play a crucial role in the pathogenesis of pancreatic fibrosis. Recent studies have shown that PSC has the function of pancreatic exocrine and has functions of progenitor cells, immune cells and intermediary cells. Because of the lack of stable PSC lines that can be used to study its various functions in vitro, the extensive and in-depth study of PSC is limited. More and more evidence shows that desmin is a specific cytoskeleton protein of PSC, which is only expressed in some PSC. The aim of this study is to establish an immortalized PSC rat with positive expression of desmin and evaluate its role in mediating pancreatic fibrosis, inflammation and immune function.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R576

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 ;Roles of Smad3 and Smad7 in rat pancreatic stellate cells activated by transforming growth factor-beta 1[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年05期

2 ;The expression of toll-like receptor 2, 4 of livers in mice with systemic inflammatory response syndrome[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2006年01期

3 ;Hyaluronic acid fragments evoke Kupffer cells via TLR4 signaling pathway[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年02期

本文編號：1339150