本文關(guān)鍵詞：1. MiR-133a，miR-1，miR-206誘導(dǎo)C2C12細(xì)胞成肌前體細(xì)胞及miR-133a靶基因Fox12鑒定的研究 2. IL-28B多態(tài)性位點(diǎn)及血清維生素D水平在HCV感染病人中的相關(guān)性分析研究　出處：《浙江大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景 microRNA(miRNAs)是一種廣泛存在于真核生物中小的內(nèi)源性非編碼RNA分子,大小約由22個核苷酸組成,這些小的miRNA通常靶向一個或者多個mRNA,通過翻譯水平的抑制或斷裂靶標(biāo)mRNA,從而調(diào)節(jié)基因的表達(dá),在基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)中起著重要作用。已有的研究表明miRNA在基因表達(dá)調(diào)控方面具有廣泛的作用,它們參與了生物體發(fā)生、發(fā)育、細(xì)胞死亡、細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移,細(xì)胞分化,細(xì)胞轉(zhuǎn)分化,代謝調(diào)控,凋亡,腫瘤和疾病等重要生物學(xué)過程。miRNA還廣泛參與了癌癥的免疫過程。最近有研究發(fā)現(xiàn)許多的miRNA特異表達(dá)在骨骼肌或心肌,也有一些miRNA在骨骼肌或心肌表達(dá)比其它組織豐富,這些1niRNA被稱為不同的肌肉miRNA組。MiR-133a及miR-1/miR-206家族是研究最多的肌相關(guān)miRNA家族。這些miRNA在肌發(fā)育中表達(dá)上調(diào)或下調(diào),然而還沒有研究表明這些成熟的小miRNA能否促進(jìn)肌細(xì)胞的分化。 方法 qRT-PCR驗(yàn)證成熟的miRNA-1, miRNA-133a, miRNA-206, miR-1-206, miR-1-133a, miR-133a-206轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞48小時后,肌相關(guān)基因表達(dá)變化。miRNA-1, miRNA-133a, miRNA-206, miR-1-206,miR-1-133a, miR-133a-206轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞5天后,觀察肌管融合,并計算融合率,免疫熒光檢測MyHC蛋白表達(dá)。 miR-133a靶基因預(yù)測及驗(yàn)證：利用靶基因預(yù)測軟件Target scan, MICRORNA及PicTar預(yù)測miR-133a靶基因,并構(gòu)建pMIR-REPORT熒光報告載體驗(yàn)證靶基因。 qRT-PCR驗(yàn)證C2C12經(jīng)2%馬血清分化五天后,miRNAs及Fox12基因表達(dá)變化。Fox12經(jīng)siRNA抑制后,C2C12分化情況觀察。 結(jié)果 轉(zhuǎn)染成熟的miR-133a, miR-1/206,及這三個miRNA之間的兩兩組合miR-1-133a, miR-1-206和miR-133a-206可以分化C2C12細(xì)胞成肌前體細(xì)胞。其中miR-133a-206可極大提高C2C12細(xì)胞分化過程中多核肌管的形成。并且Fox12的3'UTR是miR-133a的靶向作用位點(diǎn)。這些結(jié)果表明miRNA在治療肌相關(guān)疾病中的潛在治療應(yīng)用價值,新發(fā)現(xiàn)的Fox12基因也可能是治療肌相關(guān)疾病中的新靶點(diǎn)。由于這種分化方法不需要基因轉(zhuǎn)移載體或病毒載體,沒有在細(xì)胞中留下殘余載體,其在生物醫(yī)學(xué)研究和再生醫(yī)學(xué)中將發(fā)揮巨大作用。 結(jié)論 成熟的miR-133a, miR-1/206,及這三個miRNA之間的兩兩組合miR-1-133a,miR-1-206和miR-133a-206可以分化C2C12細(xì)胞成肌前體細(xì)胞。其中miR-133a-206可極大提高C2C12細(xì)胞分化過程中多核肌管的形成。Fox12的3'UTR是miR-133a的靶向作用位點(diǎn)。 最近,全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)研究發(fā)現(xiàn),慢性HCV-1型感染患者的IL-28B單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs12979860的基因型CC和rs8099917的基因型TT與PEG-IFN/RBV治療獲得SVR有相關(guān)性。但各個研究機(jī)構(gòu)之間獲得的結(jié)果并不一致,所以,我們進(jìn)行meta分析估計rs12979860和rs8099917與HCV-1型感染患者經(jīng)PEG-IFN/RBV治療后獲得SVR的整體關(guān)系。通過檢索數(shù)據(jù)庫PubMed, EMBASE, Google scholar, CNKI在2012年7月30日之前發(fā)表的所有相關(guān)研究,提取合格研究,計算比值比(OR)及相應(yīng)的95%可信區(qū)間(CI)用來評估總體的相關(guān)性。各個研究之間的異質(zhì)性用I2進(jìn)行評估。Begg's及Egger's回歸分析出版偏移。最終,合格的入選研究文獻(xiàn)有20篇,慢性HCV-1型患者IL-28B多態(tài)性位點(diǎn)rs8099917基因型CC和rs12979860基因型TT與PEG-IFN/RBV治療后獲得SVR有顯著相關(guān)性(OR=4.473,95%CI=3.814-5.246; OR=5.171,95%CI=4.372-6.117)。結(jié)果表明HCV-1感染患者多態(tài)性位點(diǎn)rs12979860基因型CC和rs8099917基因型TT可作為PEG-IFN/RBV治療后獲得SVR獨(dú)立的預(yù)測因素。 同時我們還進(jìn)行了HCV慢性感染患者血清維生素D水平與肝纖維化嚴(yán)重程度相關(guān)性的系統(tǒng)評價。通過檢索PubMed, EMBASE數(shù)據(jù)庫進(jìn)行相關(guān)的文獻(xiàn)檢索,時間為2013年10月前發(fā)表的所有研究文獻(xiàn)。計算比值比(OR)及95%可信區(qū)間估計(CI)或標(biāo)準(zhǔn)偏差的平均(SD)及可信區(qū)間作為血清維生素D濃度與慢性丙型肝炎患者的肝纖維化嚴(yán)重程度相關(guān)性的總體評價指標(biāo)。最終,分析包含了來自不同國家的8321名患者。四項(xiàng)研究匯總的OR值及95%可信區(qū)間為0.866(95%CI,0.649-1.157)。三項(xiàng)研究匯總的平均值及可信區(qū)間為-0.487(95%CI,-0.659--0.315)。其中提取平均值的各項(xiàng)研究之間有異質(zhì)性(P=0.029；I2=71.8%),提取OR值的各項(xiàng)研究之間沒有異質(zhì)性(P=0.061；I2=55.6%)。雖然提取平均值的研究匯總結(jié)果表明低濃度血清維生素D是慢性丙型肝炎患者的肝纖維化嚴(yán)重程度的一個危險因素,但提取OR值的研究匯總結(jié)果表明兩者之間沒有相關(guān)性,所以闡明血清維生素D濃度與慢性丙型肝炎患者的肝纖維化嚴(yán)重程度相關(guān)性還需要進(jìn)行更多的臨床相關(guān)研究。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：1329641