發(fā)布時間：2017-12-23 02:09

  本文關(guān)鍵詞：脊髓鉀氯共同轉(zhuǎn)運體亞型2在腸易激綜合征內(nèi)臟高敏的機制研究　出處：《上海交通大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景與目的:腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是臨床上常見的功能性胃腸病。內(nèi)臟敏感性增高(visceral hypersensitivity)作為IBS重要的病理生理特征之一,其具體機制仍不明了。鉀氯共同轉(zhuǎn)運體亞型2(K+-Cl-cotransporter isoform2,KCC2)是維持神經(jīng)元氯離子穩(wěn)態(tài)(chloride homeostasis)的一種重要膜蛋白,可通過影響脊髓水平GABA/甘氨酸能突觸抑制效率而控制內(nèi)臟痛覺信息的傳遞效能。本研究對脊髓KCC2與IBS內(nèi)臟高敏感之間的關(guān)系進行初步的探討,以進一步了解IBS內(nèi)臟高敏感的發(fā)生機制,為IBS等功能性胃腸病的臨床防治提供新的靶點和策略。方法:⑴通過對雄性Wistar大鼠每天1小時、連續(xù)10天的避水應(yīng)激(water avoidance stress,WAS)干預(yù)建立慢性內(nèi)臟高敏感模型。采用結(jié)直腸擴張(colorectal distension,CRD)引起的腹部收縮反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)評分及腹外斜肌肌電記錄(electromyography,EMG)來檢測大鼠內(nèi)臟敏感性;結(jié)腸病理組織學(xué)檢測腸道的炎癥反應(yīng)。⑵實時定量PCR、Western免疫印記和免疫熒光用于檢測腰骶段及胸腰段脊髓背角氯離子穩(wěn)態(tài)相關(guān)蛋白的表達及細(xì)胞定位。⑶制備成年大鼠的脊髓薄片,利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)評估慢性應(yīng)激狀態(tài)下脊髓Ⅰ板層神經(jīng)元的氯離子穩(wěn)態(tài)及排氯能力的改變。⑷通過鞘內(nèi)注射的方式給予KCC2抑制劑R-(+)-丁基吲哚酮(R-(+)-butylindazone,DIOA)觀察其對內(nèi)臟敏感性的影響。結(jié)果:⑴連續(xù)10天的避水應(yīng)激刺激可誘導(dǎo)大鼠內(nèi)臟敏感性的增高,表現(xiàn)為大鼠對CRD的反應(yīng)閾值明顯下降(假應(yīng)激組,35.8±1.8 mm Hg;避水應(yīng)激組,25.8±2.4mm Hg;p0.01),且AWR評分及EMG幅度顯著增加,而內(nèi)臟高敏感大鼠的結(jié)腸組織無明顯炎癥損傷。⑵與對照組相比,內(nèi)臟高敏感大鼠腰骶段脊髓背角的KCC2總蛋白(約降至對照組的65%;p=0.01)、蛋白單體(約降至對照組的74%,p0.01)及多聚體表達(約降至對照組的57%,p0.01)均顯著下降,且發(fā)生這種變化的細(xì)胞部位主要集中在神經(jīng)元。而作為調(diào)控氯離子穩(wěn)態(tài)的另一種膜蛋白鈉鉀氯共同轉(zhuǎn)運體亞型1(Na+-K+-Cl-cotransporter isoform 1,NKCC1)的表達沒有明顯改變(p0.05)。⑶避水應(yīng)激內(nèi)臟高敏感模型KCC2的下降可導(dǎo)致脊髓背角氯離子穩(wěn)態(tài)被破壞,主要表現(xiàn)為Ⅰ板層神經(jīng)元的氯離子平衡電位(equilibrium potential,ECl)向去極化方向產(chǎn)生了約11 m V的偏移(假應(yīng)激組,-62.4±0.9 m V;慢性避水應(yīng)激組,-51±1.7 m V;p0.01),神經(jīng)元排氯能力顯著下降。⑷鞘內(nèi)給予KCC2抑制劑DIOA(30μg)可快速并可逆地增強正常大鼠的內(nèi)臟痛覺敏感性,表現(xiàn)為40和60 mm Hg擴張壓力下的EMG幅度在給藥20分鐘后分別增加了30%(p0.05)和36%(p0.01),這種內(nèi)臟高敏狀態(tài)至給藥后2小時逐漸恢復(fù)到正常對照水平。而DIOA對已存在內(nèi)臟高敏感狀態(tài)的模型組大鼠沒有明顯致敏效果(p0.05)。結(jié)論:脊髓背角KCC2下調(diào)所介導(dǎo)的氯離子穩(wěn)態(tài)失衡可能是慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)臟高敏感的重要機制。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.4

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本文編號：1321972