本文關(guān)鍵詞：乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活及其與TLR9關(guān)系的研究　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌 病毒激活 漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞 Toll樣受體9 癌旁組織

【摘要】：肝細(xì)胞肝癌是全球發(fā)病率排前十、致死率排第二的惡性腫瘤。在我國(guó),60%肝癌患者是由慢性乙型肝炎發(fā)展而來,稱為乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌。乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)存在兩種狀態(tài),即惡性腫瘤狀態(tài)和乙型肝炎病毒感染狀態(tài)。針對(duì)肝細(xì)胞癌,目前公認(rèn)的治療措施有肝切除、肝移植、肝動(dòng)脈化療栓塞和局部消融等。乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者在接受抗腫瘤治療過程中會(huì)出現(xiàn)病毒激活,病毒激活引起的機(jī)體免疫損傷會(huì)加重肝臟的炎癥反應(yīng),加快肝硬化進(jìn)程,進(jìn)而使患者失去抗腫瘤治療的肝功能基礎(chǔ),甚至使治療中斷,最終影響患者的預(yù)后。Toll樣受體9(TLR9)是一類介導(dǎo)天然免疫反應(yīng)的跨膜信號(hào)傳遞受體,是模式識(shí)別受體家族中的一員,高表達(dá)于漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞和B細(xì)胞上,弱表達(dá)于肝細(xì)胞、枯否細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面。乙型肝炎病毒是一種嗜肝性、非致細(xì)胞病變的DNA病毒,主要與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞表面的TLR9結(jié)合,激活依賴髓樣分化因子(MyD88)信號(hào)通路,啟動(dòng)機(jī)體免疫反應(yīng)。已有研究證實(shí)樹突狀細(xì)胞及TLR9信號(hào)通路分子障礙會(huì)引起病毒持續(xù)性感染,同時(shí)激活TLR9信號(hào)通路相關(guān)分子可以在一定程度上抑制病毒復(fù)制。但目前關(guān)于TLR9在病毒激活中的作用尚無相關(guān)報(bào)道。因此分析乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活的危險(xiǎn)因素,并深入探討TLR9與病毒激活的關(guān)系,能夠?yàn)閷ふ铱共《炯せ钪委熜掳悬c(diǎn)提供理論依據(jù)。本課題是以乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者為對(duì)象開展的臨床與基礎(chǔ)相結(jié)合的研究,共納入了2015年3月至2015年12月于我科行手術(shù)治療的34例乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者。第一部分收集患者臨床資料,并進(jìn)行隨訪,分析乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活的臨床危險(xiǎn)因素;第二部分收集了患者術(shù)前和術(shù)后外周血,分離漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞和外周血血漿,探討TLR9信號(hào)通路分子(TLR9、MyD88、IRAK1、TRAF6、TAK1、IRF7)mRNA表達(dá)水平、細(xì)胞因子(IFN-α、IL-6、IL-12、TNF-α)分泌量與病毒激活的關(guān)系;第三部分收集了入組患者手術(shù)切除標(biāo)本(腫瘤組織和癌旁組織),研究組織中TLR9分子是否也參與了病毒激活過程,并探討其發(fā)揮作用的下游分子。第一部分:收集患者臨床數(shù)據(jù),如人口學(xué)信息(性別、年齡)、肝炎背景、血常規(guī)(白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù))、肝功能(總膽紅素、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、白蛋白、前白蛋白)、腎功能(肌酐、尿素氮)、腫瘤指標(biāo)(甲胎蛋白)、乙肝兩對(duì)半、術(shù)前術(shù)后HBV DNA載量以及一些其他相關(guān)指標(biāo)如腫瘤部位、腫瘤大小、癌栓、子灶、術(shù)中肝門阻斷時(shí)間、出血量等。術(shù)后隨訪患者HBV DNA載量及臨床指標(biāo)變化,后按病毒激活標(biāo)準(zhǔn)將患者分為激活組和未激活組。其中激活組10例,未激活組24例。采用SPSS 20.0(Chicago,IL,United States)軟件對(duì)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活進(jìn)行單因素和多因素非條件logistic回歸分析。單因素分析提示:1)術(shù)前丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶明顯升高者(100u/l)術(shù)后病毒激活發(fā)生率顯著高于術(shù)前轉(zhuǎn)氨酶正常者(100.0%vs20.0%,p=0.001)。2)術(shù)前長(zhǎng)期行抗病毒治療的患者術(shù)后病毒激活發(fā)生率明顯低于未行抗病毒治療者(56.3%vs5.6%,p=0.001)。3)術(shù)后第七天天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶仍然較高者(100u/l)病毒激活率顯著高于術(shù)后轉(zhuǎn)氨酶正常者(66.7%vs21.4%,p=0.027)。多因素logistic回歸分析提示:術(shù)前未長(zhǎng)期行抗病毒治療是乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(hr=13.908;95%ci,1.137—170.067,p=0.039)。第二部分:為進(jìn)一步從免疫學(xué)和分子生物學(xué)基礎(chǔ)上分析乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活機(jī)制,本課題收集了患者術(shù)前和術(shù)后第七天的外周血,分離漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞,定量檢測(cè)tlr9信號(hào)通路分子(tlr9、myd88、irak1、traf6、tak1、irf7)mrna表達(dá)水平,并采用酶聯(lián)免疫試劑盒(elisa)檢測(cè)血漿中細(xì)胞因子(ifn-α、il-6、il-12、tnf-α)含量。最后采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較兩組患者術(shù)前術(shù)后上述分子及細(xì)胞因子表達(dá)差異。結(jié)果提示:1)病毒激活與患者術(shù)前和術(shù)后外周血中樹突狀細(xì)胞數(shù)目無明顯相關(guān)性。2)激活組患者術(shù)前和術(shù)后tlr9信號(hào)通路相關(guān)分子(tlr9、myd88、irak1、traf6、tak1、irf7)mrna相對(duì)表達(dá)水平均較未激活組減少。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示:激活組術(shù)前myd88mrna含量較未激活組減少(0.39,0.26-2.59vs1.03,0.64-2.62,p=0.042);激活組術(shù)前irf7mrna相對(duì)表達(dá)量為(0.67,0.28-1.00),未激活組為(2.42,1.19-5.46)(p=0.008);激活組術(shù)后tlr9mrna相對(duì)表達(dá)量為(0.27,0.12-0.32)較未激活組(0.63,0.28-1.09)明顯減少(p=0.009);術(shù)后traf6mrna相對(duì)表達(dá)量為(0.69,0.49-0.98)顯著低于未激活組(1.02,0.80-1.79)(p=0.025);術(shù)后tak1mrna激活組相對(duì)表達(dá)量為(0.22,0.14-0.62)低于未激活組為(0.54,0.29-1.04)(p=0.038);術(shù)后irf7mrna激活組表達(dá)量為(0.26,0.18-0.52)較未激活組(0.66,0.32-1.02)明顯減少(p=0.020)。3)elisa檢測(cè)提示激活組患者術(shù)后外周血漿中腫瘤壞死因子(tnf-α)分泌量較未激活組顯著減少(11.44±2.04pg/mlvs14.78±3.55pg/ml,p=0.002)。第三部分:收集患者術(shù)中腫瘤組織和癌旁組織,抽提rna和蛋白,通過定量pcr、免疫組化和蛋白免疫印跡等方法分析tlr9、myd88、irak1、traf6、tak1、irf7分子表達(dá)差異與病毒激活的關(guān)系。結(jié)果顯示:1)激活組和未激活組患者腫瘤組織中上述分子mrna表達(dá)水平無明顯差異。2)激活組患者癌旁組織中tlr9mrna表達(dá)較未激活組明顯增多(6.35,4.43-14.17vs0.66,0.28-1.64,p=0.006),且蛋白免疫印跡提示tlr9蛋白水平表達(dá)也較未激活組顯著增多。但激活組和未激活組癌旁組織中myd88、irak1、traf6、tak1、irf7分子轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平表達(dá)無明顯差異。本課題可以得出以下結(jié)論:1)術(shù)前未長(zhǎng)期行抗病毒治療是乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后病毒激活的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示臨床上積極抗病毒治療可能可以降低術(shù)后病毒激活發(fā)生率。2)病毒激活與漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞數(shù)目無關(guān),提示其可能與細(xì)胞功能障礙有關(guān)。3)激活組患者TLR9在外周血漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞上呈低表達(dá)而在癌旁組織中高表達(dá),提示TLR9在乙肝相關(guān)肝細(xì)胞患者術(shù)后病毒激活中可能起著“雙刃劍”作用:樹突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞上表達(dá)的TLR9可以調(diào)節(jié)機(jī)體固有免疫及適應(yīng)性免疫,促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放;癌旁組織上表達(dá)的TLR9能夠幫助乙肝病毒逃避宿主監(jiān)視,躲避術(shù)前病毒清除從而引起病毒激活。4)乙肝相關(guān)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后TNF-α分泌減少可能是病毒激活的機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.62;R735.7

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 Roberto Mazzanti;Umberto Arena;Renato Tassi;;Hepatocellular carcinoma: Where are we?[J];World Journal of Experimental Medicine;2016年01期

2 Rong-Juan Pei;Xin-Wen Chen;Meng-Ji Lu;;Control of hepatitis B virus replication by interferons and Toll-like receptor signaling pathways[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

3 Jeong Won Jang;;Hepatitis B virus reactivation in patients with hepatocellular carcinoma undergoing anti-cancer therapy[J];World Journal of Gastroenterology;2014年24期

4 ;Recognition of HBV antigens and HBV DNA by dendritic cells[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年06期

5 周健;黃元成;田德英;許東;陳淼;吳會(huì)玲;;Expression of Toll-like Receptor 9 in Peripheral Blood Mononuclear Cells from Patients with Different Hepatitis B and C Viral Loads[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2009年03期

6 劉士敬;慢性乙肝的診斷[J];中國(guó)社區(qū)醫(yī)師;2005年22期

7 吳孟超,陳漢,沈鋒;原發(fā)性肝癌的外科治療5524例報(bào)告(英文)[J];中華外科雜志;2001年06期

，

本文編號(hào)：1317034