本文關(guān)鍵詞：線粒體自噬在肝纖維化中的作用　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 肝纖維化 肝星狀細(xì)胞 線粒體自噬 環(huán)孢菌素A 纈氨霉素

【摘要】：肝纖維化(Liver fibrosis)是多種肝臟疾病共同的病理過程,其中一部分會(huì)進(jìn)展為肝硬化和/或肝癌,死亡率高,預(yù)后差,嚴(yán)重威脅人類健康。肝纖維化是一種可逆性的損傷-修復(fù)過程,細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)過度沉積是促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展的重要因素,而細(xì)胞外基質(zhì)主要來(lái)源于肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSCs),因此抑制HSCs的活化是逆轉(zhuǎn)肝纖維化的關(guān)鍵。線粒體是生產(chǎn)能量的主要場(chǎng)所,參與多種細(xì)胞生命活動(dòng),因此,線粒體穩(wěn)態(tài)對(duì)維持正常的細(xì)胞功能至關(guān)重要。線粒體自噬(mitophagy)由Lemasters于2005年首次提出,主要指通過自噬的方式降解細(xì)胞內(nèi)損傷或多余的線粒體,維持線粒體數(shù)量及質(zhì)量的穩(wěn)定,從而維持正常的細(xì)胞功能。研究顯示,白藜蘆醇可誘導(dǎo)HSCs發(fā)生線粒體自噬,表明HSCs中存在線粒體自噬現(xiàn)象。但線粒體自噬與肝纖維化之間的關(guān)系,目前尚無(wú)報(bào)道。本研究擬以C57BL/6雄性小鼠及人HSCs細(xì)胞株LX-2為研究對(duì)象,建立肝纖維化模型,從動(dòng)物及細(xì)胞層面進(jìn)行研究,探討線粒體自噬在肝纖維化中的作用。目的:探討線粒體自噬在肝纖維化中的作用,為肝纖維化的治療提供新思路。方法:本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射CCl4建立小鼠肝纖維化模型并用TGF-β刺激LX-2細(xì)胞活化,分別在體內(nèi)及體外觀察肝纖維化形成及HSCs活化過程中線粒體自噬的變化。應(yīng)用線粒體自噬抑制劑Cyclosporine A及誘導(dǎo)劑Valinomycin驗(yàn)證線粒體自噬與肝纖維化及HSCs活化之間的關(guān)系。通過檢測(cè)血清中谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate transaminase,AST)的水平及肝臟組織HE染色來(lái)觀察肝臟炎癥程度;通過天狼星紅染色觀察膠原變化,通過免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)分析α-SMA的表達(dá)。用蛋白免疫印跡法(Westen blotting,WB)分析α-SMA、Collagen I、HSP60、TOM20、PINK1蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1肝纖維化及HSCs活化過程中線粒體自噬受到抑制腹腔注射橄欖油(oil)后6 W及注射CCl4后2 W、4 W和6 W,分別留取小鼠血清及肝臟組織,并進(jìn)行HE、天狼猩紅及IHC染色。結(jié)果顯示與oil組相比,CCl4組血清ALT及AST水平隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高;HE染色顯示CCl4組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,炎細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞脂肪變性及壞死嚴(yán)重,6 W時(shí)達(dá)到高峰;天狼星紅染色及WB顯示CCl4組膠原纖維隨注射時(shí)間延長(zhǎng)而增加,6 W時(shí)達(dá)到高峰;IHC及WB顯示CCl4組α-SMA表達(dá)隨用藥時(shí)間延長(zhǎng)增加;上述結(jié)果證實(shí)肝纖維化造模成功。WB顯示在CCl4組中,代表線粒體剩余量的TOM20及HSP60表達(dá)顯著增加,表明肝纖維化過程中線粒體自噬被抑制。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用不同濃度梯度及時(shí)間梯度的TGF-β刺激HSCs活化,WB結(jié)果顯示HSCs活化指標(biāo)α-SMA及Collagen I表達(dá)增加,線粒體剩余量指標(biāo)TOM20、HSP60表達(dá)增加,線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1表達(dá)減少,并且各指標(biāo)變化呈濃度依賴性及時(shí)間依賴性,表明HSCs活化過程中,線粒體自噬減弱。2抑制線粒體自噬促進(jìn)肝纖維化及HSCs活化動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,與單獨(dú)應(yīng)用CCl4組相比,應(yīng)用線粒體自噬抑制劑CsA后,小鼠肝臟TOM20及HSP60的表達(dá)增加,證明CsA能夠抑制線粒體自噬。應(yīng)用CsA后,與單獨(dú)應(yīng)用CCl4組相比,小鼠血清ALT、AST水平更高,肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂程度、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、肝細(xì)胞脂肪變及壞死程度更重,膠原沉積更加明顯、α-SMA表達(dá)進(jìn)一步上調(diào),表明線粒體自噬抑制劑CsA可促進(jìn)肝纖維化進(jìn)程。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,與單純TGF-β刺激組比較,應(yīng)用線粒體自噬抑制劑后,線粒體剩余量標(biāo)志TOM20、HSP60表達(dá)增加,線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1表達(dá)減少,肝纖維化指標(biāo)α-SMA及Collagen I表達(dá)增加,表明抑制線粒體自噬可促進(jìn)HSCs的活化。3線粒體自噬誘導(dǎo)劑抑制HSCs活化WB結(jié)果顯示,與單純TGF-β組比較,應(yīng)用線粒體自噬誘導(dǎo)劑后,線粒體剩余量標(biāo)志TOM20、HSP60減少,線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1表達(dá)增加,HSCs活化指標(biāo)α-SMA及Collagen I表達(dá)減少,結(jié)果提示誘導(dǎo)線粒體自噬能夠抑制HSCs活化。結(jié)論:在肝纖維化形成及HSCs活化中線粒體自噬受到抑制。抑制線粒體自噬能促進(jìn)HSCs活化,加重肝纖維化,而誘導(dǎo)線粒體自噬可抑制HSCs活化。干預(yù)線粒體自噬有望成為肝纖維化治療的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.2

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄒圣強(qiáng),齊宗利;91例非老年慢性乙型肝炎肝纖維化的診斷[J];中國(guó)基層醫(yī)藥;2001年04期

2 曾民德;肝纖維化的診斷和治療[J];肝臟;2001年S1期

3 田養(yǎng)年,鄧淑玲,張武智;中西醫(yī)結(jié)合治療肝纖維化的新進(jìn)展[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2001年S1期

4 曾民德;肝纖維化的治療及其療效評(píng)估[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年05期

5 謝彥華,劉春榮;基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑與肝纖維化[J];臨床薈萃;2002年08期

6 李清華,戰(zhàn)淑慧,卞魯巖,秦成勇,勞萍;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β_1和纖溶酶原激活物抑制物-1在肝纖維化中的作用及關(guān)系[J];中華消化雜志;2004年02期

7 王吉耀;重視肝纖維化的基礎(chǔ)與臨床研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年15期

8 陸倫根,曾民德;肝纖維化的診斷和評(píng)估[J];中華肝臟病雜志;2005年08期

9 時(shí)昭紅,鄧長(zhǎng)生;肝纖維化的防治研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2005年03期

10 劉克洲;侯偉;;肝纖維化的治療策略[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2006年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉勇鋼;盧建華;;瘦素與肝纖維化關(guān)系及研究方法探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 袁鳳儀;;淺議中西醫(yī)防治肝纖維化的研究[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)2010年消化系病學(xué)術(shù)交流會(huì)暨非酒精性脂肪肝研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2010年

3 杜緒勝;;肝纖維化的中西醫(yī)結(jié)合研究現(xiàn)狀[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

4 趙新顏;王寶恩;賈繼東;;先天性肝纖維化的臨床病理特點(diǎn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

5 李驥;董培紅;金益輝;盧明芹;潘發(fā)奮;王幫松;陳永平;;維生素D受體基因多態(tài)性與肝纖維化關(guān)系初步研究[A];第九次浙江省中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

6 張磊;李俊;黃成;呂雄文;金涌;朱鵬禮;;肝纖維化逆轉(zhuǎn)的機(jī)制研究[A];第十屆全國(guó)生化與分子藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

7 徐葉進(jìn);;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1在大鼠肝纖維化組織中的表達(dá)及意義[A];2012年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省感染科醫(yī)師學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

8 賈繼東;;肝纖維化的發(fā)生機(jī)理及治療進(jìn)展[A];第6屆全國(guó)疑難及重癥肝病大會(huì)論文集[C];2011年

9 楊從意;陳英杰;程晶;李群;周大橋;;淺談肝纖維化的臨床研究進(jìn)展[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十三屆內(nèi)科肝膽病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

10 郭宇;曾華強(qiáng);羅時(shí)兵;何麗珍;;中西醫(yī)結(jié)合診療肝纖維化的幾點(diǎn)思考[A];第十八次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張昀;肝纖維化可以治療[N];健康報(bào);2005年

2 陳斌;肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)嗎？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

3 范又;肝病專家指出治療肝纖維化中醫(yī)藥療效世界領(lǐng)先[N];光明日?qǐng)?bào);2007年

4 陳黎明;肝纖維化[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

5 通訊員 陳麗霞邋王懷民 記者 趙鳳華;黃連素可能治肝纖維化[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

6 蔣明邋通訊員 陳麗霞 王懷民;黃連素治療肝纖維化有效果[N];健康報(bào);2008年

7 健康時(shí)報(bào)記者 劉橋斌;測(cè)肝纖維化免穿刺[N];健康時(shí)報(bào);2009年

8 解放軍302醫(yī)院肝纖維化無(wú)創(chuàng)診療中心 陳國(guó)鳳 黃顯斌 整理;肝纖維化檢查進(jìn)入無(wú)創(chuàng)時(shí)代[N];健康報(bào);2009年

9 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)征醫(yī)院教授 謝渭芬　整理 王根華;阻斷肝纖維化發(fā)展的鏈條[N];健康報(bào);2010年

10 黃丁毅;福瑞股份：肝纖維化�？泼鎸�(duì)“做大”命題[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李俊峰;單采血漿所致慢性HCV感染20年自然史及其鞘脂組學(xué)研究[D];蘭州大學(xué);2015年

2 杜靜華;微小RNAs差異表達(dá)對(duì)非酒精性脂肪性肝炎相關(guān)肝纖維化的影響及分子調(diào)控機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

3 李紅;探討海珠益肝方從痰論治肝纖維化的作用及機(jī)制研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 涂曉龍;miR-30和lincRNA-p21調(diào)控肝纖維化的作用機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2016年

5 朱穎煒;轉(zhuǎn)染TIMP-1-shRNA基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠肝纖維化[D];蘇州大學(xué);2016年

6 李楊;磁共振T_2~* mapping成像及分子成像評(píng)價(jià)大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 莊燦皇;基于近二十年文獻(xiàn)中醫(yī)藥治療肝纖維化的方藥規(guī)律研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

8 吳鵬;姜黃素對(duì)肝纖維化的保護(hù)作用及表觀遺傳學(xué)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 石磊;表皮形態(tài)發(fā)生素在HIV與HCV共感染肝纖維化中的作用及機(jī)制[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

10 陳利軍;經(jīng)血干細(xì)胞治療肝纖維化及其作用機(jī)制[D];浙江大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王靜;2型糖尿病合并肝纖維化等并發(fā)癥的相關(guān)危險(xiǎn)因素分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

2 侯龍輝;沙棘籽油對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化肝臟中TIMP-1表達(dá)的影響[D];青海大學(xué);2016年

3 李超;Decorin對(duì)CCl_4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠肝臟TGF-β1、α-SMA表達(dá)的影響[D];青海大學(xué);2016年

4 張明曉;丙酮酸乙酯對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化保護(hù)作用的研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

5 宗詠花;丙酮酸乙酯對(duì)膽汁淤積性肝纖維化的作用及其機(jī)制的研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

6 吳靈芝;瞬時(shí)彈性成像技術(shù)（FibroTouch）對(duì)慢性乙型肝炎肝纖維化的診斷價(jià)值[D];首都醫(yī)科大學(xué);2016年

7 蘇李娜;常規(guī)肝臟多期動(dòng)態(tài)增強(qiáng)CT掃描計(jì)算肝細(xì)胞外體積分?jǐn)?shù)定量評(píng)價(jià)肝纖維化的診斷價(jià)值[D];蘭州大學(xué);2016年

8 劉曉亞;Arkadia對(duì)肝纖維化SnoN蛋白降解作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2016年

9 萬(wàn)穎;組織聲學(xué)結(jié)構(gòu)定量技術(shù)評(píng)估慢乙肝肝臟纖維化分級(jí)的研究?jī)r(jià)值[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

10 孔文麗;M2BPGi評(píng)估慢性丙型肝炎患者肝纖維化的臨床研究[D];吉林大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1307942