發(fā)布時間：2017-12-15 15:09

  本文關(guān)鍵詞：基于“腦腸菌軸”探討痛瀉要方治療IBS模型大鼠新機(jī)制

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【摘要】：目的：腸易激綜合征(irritable bowel syndrome, IBS)作為典型而常見的情志病,腦腸互動異常已獲得中西醫(yī)學(xué)界共識,但是,腸道菌群在IBS發(fā)生發(fā)展與中藥療效進(jìn)程中的具體作用機(jī)制,仍缺乏研究。本文基于“腦腸菌軸”(Brain-gut-enteric microbiota axis, BGMA)更高更完整之研究視野,一方面更系統(tǒng)深入地揭示IBS病理生物學(xué)基礎(chǔ),另一方面以痛瀉要方為代表方觀察其調(diào)控BGMA關(guān)鍵環(huán)節(jié)和調(diào)節(jié)模式,探討中醫(yī)藥防治IBS新機(jī)制。方法：選用8周齡SPF級Sprague-Dawley大鼠100只,雌雄各半,給予慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激聯(lián)合高糖高脂飼料、高溫高濕環(huán)境加酒精刺激建立慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激脾胃濕熱泄瀉型IBS模型,通過大鼠體重增長率、糞便Bristoi評分、AWR評分及敞箱實驗評分,綜合評價與鑒定IBS大鼠模型。將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型對照組(M)、痛瀉要方7天治療組(T7)、痛瀉要方14天治療組(T14)、雙歧桿菌7天治療組(B7)、雙歧桿菌14天治療組(B14),加正常對照組共6組。經(jīng)受試藥痛瀉要方及陽性對照藥物雙歧桿菌灌胃7天、14天,實時觀察大鼠一般情況、體重增長率、Bristol糞便性狀評分、腹壁回撤反射(AWR)評分及敞箱實驗評分等指標(biāo),驗證痛瀉要方對IBS模型治療的有效性。在不同組別特定時間窗口,無菌法采集糞便,經(jīng)心臟灌洗后取腦組織、結(jié)腸組織標(biāo)本。采用免疫組化法檢測大鼠海馬區(qū)、結(jié)腸組織一氧化氮合酶(NOS)、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(CHAT)、血管活性腸肽(VIP)、Fos蛋白表達(dá)情況,探索痛瀉要方對IBS模型“腦腸軸”紊亂的調(diào)節(jié)機(jī)制。提取腸道菌群總RNA、反轉(zhuǎn)錄為cDNA,采用實時定量PCR檢測腸道菌群色氨酸合成酶基因的表達(dá),探討痛瀉要方對腸道菌群關(guān)鍵性活性物質(zhì)的影響。提取腸道菌群總DNA,應(yīng)用Illumina高通量測序平臺進(jìn)行宏基因組測序,通過Blast等比對軟件對基因進(jìn)行NR物種分類、COG、 KEGG功能注釋,探討痛瀉要方對腸道菌群種類及蛋白、代謝通路功能的影響。結(jié)果：1、對1BS模型的評價：與N組比較,IBS模型大鼠精神萎靡、易激惹,弓背,倦怠蜷臥,反應(yīng)遲鈍,活動減少,測定敞箱實驗評分明顯減少(P0.05)；食欲減低,檢測體重增長率明顯降低(P0.05)；出現(xiàn)不同程度稀便,毛發(fā)發(fā)黃、污穢、缺少光澤,肛周夾有粘液或體毛被稀便沾染,檢測Bristol糞便性狀評分、AWR評分均明顯增加(P0.05)。2、痛瀉要方對IBS模型大鼠療效評價：與M組比較,T14、B14組可明顯改善IBS模型大鼠精神狀態(tài)、飲食、毛發(fā)等一般情況,體重增長率、敞箱實驗評分均明顯增加(P0.05),而Bristol糞便性狀評分,AWR均明顯降低(P0.05)；T7、B7組以上指標(biāo)變化無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3、痛瀉要方對IBS模型大鼠海馬區(qū)、結(jié)腸組織CHAT、NOS、VIP、Fos的影響：與N組比較,M組大鼠海馬區(qū)、結(jié)腸組織CHAT、c-Fos、VIP表達(dá)明顯增加(P0.05)、NOS表達(dá)明顯降低(P0.05)；與M組比較,T14、B14組IBS模型大鼠海馬區(qū)、結(jié)腸組織CHAT、c-Fos、VIP表達(dá)明顯減少(P0.05),NOS表達(dá)明顯增加(P0.05),T7、B7組以上指標(biāo)變化無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4、痛瀉要方對IBS模型大鼠腸道菌群TRPA基因表達(dá)的影響：與N組比較,M組大鼠腸道菌群TRPA基因表達(dá)水平明顯降低(P0.05)；與M組比較,T14、B14組TRPA基因的表達(dá)明顯升高(P0.05),T7、B7組TRPA基因表達(dá)變化無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。5、痛瀉要方對IBS模型大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響：與N組比較,M組大鼠腸道類桿菌門(Bacteroidia)豐度降低、梭狀芽孢桿菌門(Clostridia)豐度升高；與M組比較,T7、T14組和B7、B14組類桿菌門(Bacteroidia)豐度均有升高趨勢,梭狀芽孢桿菌門(Clostridia)豐度均有降低趨勢。屬水平heatmap顯示腸道菌群結(jié)構(gòu)和豐度比較,T7組與B7組有相似性、T14組與B14組有相似性,四個治療組與N組之間有一定相似性,M組與其他組差異最大。6、痛瀉要方對IBS模型大鼠腸道菌群COG聚類的影響：與N組比較,M組大鼠腸道菌群在能量的產(chǎn)生和轉(zhuǎn)化、氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝、碳水化合物的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝、酶的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝、脂質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝功能COG蛋白功能聚類降低；與M組比較,T7、T14組和B7、B14組以上功能蛋白COG聚類有升高趨勢。COG聚類heatmap比較,T7組與B7組有相似性、T14組與B14組有相似性,四個治療組與N組之間有一定相似性,M組與其他組差異最大。7、痛瀉要方對IBS模型大鼠腸道菌群KEGG代謝通路聚類的影響：與N組比較,M組大鼠腸道菌群在ko00970氨酰生物合成、ko00230嘌呤代謝,ko00240嘧啶代謝、ko00640丙酸代謝、ko00030糖磷酸通路、ko00400苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸代謝、ko03020RNA多聚酶代謝的KEGG聚類降低。與M組比較,T7、T14組和B7、B14組以上KEGG聚類有升高趨勢。COG聚類heatmap比較,T7組與B7組有相似性,再與M組有一定相似性；T14組與B14組有相似性,再與N組有一定相似性。結(jié)論：1、IBS的發(fā)病與腦腸軸相關(guān)腦腸肽調(diào)節(jié)紊亂有關(guān),同時,腸道菌群結(jié)構(gòu)、蛋白功能及代謝通路改變也是重要發(fā)病機(jī)制之一,“腦-腸-菌”軸異常是IBS發(fā)病的重要病理基礎(chǔ)。2、痛瀉要方對IBS模型大鼠治療效果明顯,其機(jī)制可能正是通過對“腦-腸-菌軸”的調(diào)節(jié)來發(fā)揮作用。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.4

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本文編號：1292398