本文關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪性肝病大鼠肝組織microRNA表達(dá)譜的分析

  更多相關(guān)文章： 非酒精性脂肪性肝病 microRNA 基因芯片

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)旨在篩查非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝組織中差異表達(dá)的微小RNA(micro RNA,mi RNA),為NAFLD的早期干預(yù)、診斷、治療提供生物學(xué)標(biāo)記,也為進(jìn)一步研究mi RNA以何種方式作用于細(xì)胞凋亡過(guò)程奠定基礎(chǔ)。方法:取SD大鼠16只(4周齡、每只重約200g、雄性),經(jīng)適應(yīng)性飼喂1周后,隨機(jī)分成對(duì)照組(命名為為E組,共8只)及模型組(命名為為Y組,共8只),E組采用普通飼料喂養(yǎng),Y組給予高糖、高脂飼料喂養(yǎng),共喂養(yǎng)12周以建立非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型。12周末處死兩組,各取肝臟組織進(jìn)行HE染色的病理學(xué)檢查(以觀察各組肝臟脂肪樣變、炎癥活動(dòng)程度并進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分),隨后經(jīng)腹腔腹主動(dòng)脈取血,使用全自動(dòng)生化分析儀,采用酶法測(cè)定血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、總膽固醇(total cholesterol,TG)、總甘油三酯(total triglyceride,TC)和空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)的水平;然后,E組和Y組隨機(jī)各取3只大鼠,采用Trizol法分別提取各新鮮樣本的總RNA,經(jīng)Nano Drop2000和Agilent Bioanalyzer 2100質(zhì)檢合格后采用Affymetrix mi RNA表達(dá)譜芯片Gene Chip mi RNA 4.0進(jìn)行mi RNA的檢測(cè),根據(jù)芯片結(jié)果及相關(guān)文獻(xiàn)篩選mi RNA使用實(shí)時(shí)定量PCR以驗(yàn)證。結(jié)果:1.一般情況:造模過(guò)程中,E組大鼠喜動(dòng)、活躍,毛發(fā)干凈、光澤,體重逐步增加;Y組大鼠精神萎靡、少動(dòng),毛發(fā)亂、光澤度差,進(jìn)食少,體重增加較緩慢。2.肝指數(shù)變化:與E組相比,Y組大鼠的體重、肝濕重?zé)o明顯變化(P0.05),而肝指數(shù)增加顯著(P0.05)。3.生化指標(biāo):相較于E組,Y組大鼠ALT、TG、TC、FPG四項(xiàng)指標(biāo)未見(jiàn)顯著變化(P0.05),而AST升高明顯(P0.05)。4.肝臟組織HE染色:Y組大鼠的肝臟可見(jiàn)重度脂肪樣變性,甚至發(fā)生氣球樣變,伴肝細(xì)胞的點(diǎn)、灶狀壞死,周圍有多種炎細(xì)胞浸潤(rùn)。5.mi RNA芯片結(jié)果:與E組相比,Y組有10個(gè)變化倍數(shù)在2倍以上的差異性表達(dá)的mi RNA(P0.05)。Y組中rno-mi R-743a-3p、rno-mi R-741-3p、rno-mi R-101a-3p、rno-mi R-29b-3p、rno-mi R-871-3p表達(dá)明顯升高;rno-mi R-344g、rno-mi R-183-5p、rno-mi R-32-3p、rno-mi R-182、rno-mir-182表達(dá)明顯降低。6.綜合mi RNA芯片結(jié)果及結(jié)合相關(guān)參考文獻(xiàn),選擇mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證,結(jié)果顯示,與E組相比,Y組中mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p的表達(dá)明顯增加(P0.05),與基因芯片結(jié)果基本一致。結(jié)論:1.高糖高脂飲食是NAFLD的病因,采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)可安全、高效的建立NAFLD動(dòng)物模型;2.采用高糖、高脂飲食喂養(yǎng)建立的NAFLD大鼠,其mi RNA表達(dá)譜較正常組有顯著改變,表明這些差異性表達(dá)mi RNA可能在NAFLD的發(fā)病進(jìn)程中發(fā)揮作用,但其具體機(jī)制仍待進(jìn)一步探索;3.采用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p的表達(dá),其結(jié)果與mi RNAs芯片基本一致,表明mi RNAs的結(jié)果比較可靠,可用于各類疾病中,可能參與發(fā)病的mi RNAs的初篩;4.mi R-182、mi R-29b-3p、mi R-741-3p可能參與NAFLD的發(fā)病,但其具體的影響路徑及作用環(huán)節(jié)仍有待深入探尋。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳勇;劉巍;;microRNA影響抗腫瘤藥物敏感性相關(guān)研究進(jìn)展[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2009年09期

2 牛曉曉;王秦秦;;microRNA與肺癌[J];中國(guó)肺癌雜志;2010年04期

3 劉靜;王小中;;慢性粒細(xì)胞白血病相關(guān)microRNA的研究進(jìn)展[J];分子診斷與治療雜志;2010年04期

4 LEE Younghee;LUSSIER Yves A;;Identification of common microRNA-mRNA regulatory biomodules in human epithelial cancer[J];Chinese Science Bulletin;2010年31期

5 唐志強(qiáng);;The effect of microRNA-21-siRNA-lentivirus on biological behaviors in human hepatic cancer cell line hepG2[J];China Medical Abstracts(Surgery);2012年01期

6 ;PTEN and PDCD4 are Bona Fide Targets of microRNA-21 in Human Cholangiocarcinoma[J];Chinese Medical Sciences Journal;2012年02期

7 林建宇;朱雨捷;王晶;湯溢飛;徐中華;;急性冠狀動(dòng)脈綜合征相關(guān)microRNA靶向通路及其功能分析[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年04期

8 崔洪亮;張陽(yáng)德;;microRNA的協(xié)同調(diào)控網(wǎng)的構(gòu)建與研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2012年33期

9 張明杰;徐卓明;朱麗敏;龔霄雷;黃蕊;;先天性心臟病重度肺動(dòng)脈高壓血漿 microRNA 的分析與驗(yàn)證[J];上海醫(yī)學(xué);2013年12期

10 孟勝喜;胡義揚(yáng);馮琴;;microRNA在中醫(yī)藥防治非酒精性脂肪性肝病中的應(yīng)用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2014年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 荊清;袁文俊;秦永文;;microRNA的基因調(diào)控新功能[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

2 靳新;駱志剛;王金華;管乃洋;;microRNA靶標(biāo)研究進(jìn)展[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)功能基因組學(xué)研討會(huì)論文集[C];2006年

3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2008年

4 朱丹霞;徐衛(wèi);繆扣榮;方成;朱華淵;董華潔;王冬梅;范磊;喬純;李建勇;;慢性淋巴細(xì)胞白血病microRNA異常表達(dá)研究[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

6 金希;厲有名;;單純性脂變與非酒精性脂肪性肝炎間差異microRNA表達(dá)譜研究[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

7 賈新正;盧肖男;聶慶華;張細(xì)權(quán);;雞部分microRNA的同源預(yù)測(cè)與克隆驗(yàn)證[A];中國(guó)動(dòng)物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國(guó)動(dòng)物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

8 李炯;段德民;鄭克孝;;新型非標(biāo)記高通量microRNA芯片技術(shù)[A];第一屆全國(guó)生物物理化學(xué)會(huì)議暨生物物理化學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

9 徐小濤;陸曉;孫婧;束永前;;肺癌側(cè)群細(xì)胞microRNA表達(dá)譜檢測(cè)及初步分析[A];2010’全國(guó)腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第五屆中國(guó)中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

10 王俊峰;李巍;吳小江;阮康成;;大鼠附睪microRNA表達(dá)譜的研究[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳英云 喬蕤琳;哈醫(yī)大成功研發(fā)國(guó)內(nèi)首例microRNA轉(zhuǎn)基因及敲減小鼠模型[N];黑龍江經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

2 記者 陳青;2厘米以下肝癌檢出率88%[N];文匯報(bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 崔洪亮;microRNA的腫瘤表達(dá)研究及協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析[D];中南大學(xué);2014年

2 馬建華;高粱低磷低氮形態(tài)生理特征及低氮響應(yīng)的microRNA研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 李虔楨;microRNA相關(guān)基因遺傳多態(tài)性與冠心病臨床關(guān)聯(lián)及預(yù)后研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王耀輝;血清microRNA作為乳腺癌診斷標(biāo)志物的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 周霽子;環(huán)境因素對(duì)心臟畸形胎兒影響的表觀遣傳學(xué)機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 張麗;microRNA通過(guò)調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)參與血管性認(rèn)知障礙發(fā)生發(fā)展[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 查若鵬;肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)microRNA的鑒定及其分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 方硯田;結(jié)腸癌干細(xì)胞分選、差異microRNA表達(dá)譜檢測(cè)以及miR-449b-CCND1、E2F3通路在結(jié)腸癌干細(xì)胞自我更新的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

9 辛成齊;椰棗microRNA鑒定及其在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)譜研究[D];中國(guó)科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

10 李棟;先天性心臟病血漿microRNA表達(dá)譜及與GATA4靶序列單核苷酸多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究[D];山東大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高智紅;應(yīng)用多樣性增量方法識(shí)別人類基因組microRNA前體序列[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2010年

2 王娜娜;microRNA進(jìn)化關(guān)系及編碼特性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2007年

3 王玫;小麥microRNA的鑒定與分析[D];南昌大學(xué);2007年

4 秦保東;原發(fā)性膽汁性肝硬化microRNA表達(dá)譜的檢測(cè)及其功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 吳曉妍;基于納米復(fù)合材料及生物放大技術(shù)構(gòu)建的電化學(xué)microRNA傳感器的研究[D];西南大學(xué);2015年

6 周景輝;2型糖尿病microRNA表達(dá)譜及其信號(hào)通路研究[D];華南理工大學(xué);2015年

7 姜溪;血漿microRNA-486、microRNA-499在肺癌中的表達(dá)及臨床價(jià)值的研究[D];河北大學(xué);2015年

8 林杉;營(yíng)養(yǎng)誘導(dǎo)舍飼綿羊非繁殖季節(jié)發(fā)情相關(guān)microRNA篩選及其靶基因功能驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

9 林妹妹;microRNA-192 和 microRNA-21 在 IBD 患者中的表達(dá)情況[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

10 徐嬌陽(yáng);循環(huán)microRNA用于低氧性肺動(dòng)脈高壓早期診斷的實(shí)驗(yàn)研究[D];石河子大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1289942