本文關(guān)鍵詞：糖皮質(zhì)激素經(jīng)P-gp阻止肝衰竭發(fā)生與發(fā)展的研究

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【摘要】：急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)、亞急性肝衰竭(subacute liver failure,SALF)和慢加急性肝衰竭(acute on chronic liver failure,ACLF)患者病情危重、疾病進(jìn)展迅速,救治十分困難,病死率極高,目前除肝移植外尚無有效的內(nèi)科治療方法。糖皮質(zhì)激素能快速抑制過度免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng),同時(shí)還有肝細(xì)胞保護(hù)作用;本課題組及國外有報(bào)道提示:糖皮質(zhì)激素能有效改善HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭前期患者的肝功能與預(yù)后。因而,用糖皮質(zhì)激素治療ALF、SALF與ACLF是一個(gè)合理的治療選擇,但糖皮質(zhì)激素在治療ALF、SALF與ACLF中的療效仍存爭議,其根本原因是糖皮質(zhì)激素阻止肝衰竭發(fā)生與發(fā)展的機(jī)制尚未闡明,以至于不能合理選擇最佳治療人群與最佳治療時(shí)機(jī)。糖皮質(zhì)激素阻止肝衰竭發(fā)生與發(fā)展的機(jī)制,除抑制免疫應(yīng)答與炎癥反應(yīng)外,可能更關(guān)鍵的是能增強(qiáng)肝細(xì)胞保護(hù)功能。P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)具有重要的組織細(xì)胞保護(hù)功能。糖皮質(zhì)激素能夠上調(diào)胎盤、腦膜等組織P-糖蛋白的表達(dá)。由此,我們推測糖皮質(zhì)激素能誘導(dǎo)人肝細(xì)胞增強(qiáng)表達(dá)P-gp,并經(jīng)P-gp途徑增強(qiáng)肝細(xì)胞保護(hù)作用,從而阻止肝衰竭的發(fā)生與發(fā)展。研究方法與研究內(nèi)容:1.以2000年至2012年在我科住院的73例ALF和165例SALF患者為研究對象,回顧性分析比較應(yīng)用與未應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療患者的自然生存率是否存差異,并探討血清ALT水平、MELD評分、肝性腦病程度及糖皮質(zhì)激素開始治療時(shí)間等對治療效果的影響,從而評估糖皮質(zhì)激素在改善ALF和SALF患者自然存活率中的作用、并找出糖皮質(zhì)激素治療的最佳應(yīng)答者與最佳介入時(shí)機(jī)。2.用免疫組化技術(shù)檢測慢性無癥狀HBV攜帶者(AsC)、輕度慢性乙型肝炎(CHB)患者、HBV相關(guān)急性肝衰竭前期(Acute pre-liver failure associated HBV,pre-ALF-HBV)患者、HBV相關(guān)肝衰竭患者的肝組織P-糖蛋白水平,并分析肝組織P-糖蛋白表達(dá)與慢性HBV感染不同臨床類型的關(guān)系,從而闡明肝細(xì)胞P-糖蛋白表達(dá)是否具有肝細(xì)胞保護(hù)功能、及其在肝衰竭發(fā)生與發(fā)展中的作用。3.比較糖皮質(zhì)激素治療前后肝衰竭前期患者肝組織P-糖蛋白表達(dá)水平的變化,及其改變與肝衰竭前期患者肝功能改善間的關(guān)系。4.體外培養(yǎng)正常人肝細(xì)胞株l-02細(xì)胞,比較分析地塞米松對l-02細(xì)胞p-糖蛋白表達(dá)及trail誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響,并分析p-糖蛋白的第三代抑制劑tariquidar在地塞米松抵抗trail誘導(dǎo)l-02細(xì)胞凋亡中的作用,從而證實(shí)地塞米松能經(jīng)p-糖蛋白途徑阻止l-02細(xì)胞凋亡。主要研究結(jié)果:1.糖皮質(zhì)激素治療組與非糖皮質(zhì)激素治療組肝衰竭患者的生存率分別為38.2%與20.2%,兩者間相差顯著(p=0.011)。2.對于alt"g303uln(upperlimitofnormal)并且肝性腦病Ⅳ度和meld評分35的患者,糖皮質(zhì)激素治療組與非糖皮質(zhì)激素治療組的生存率分別為65.0%與17.4%,兩者間相差非常顯著(p=0.002)。3.糖皮質(zhì)激素治療病程≤2周患者的生存率顯著高于其治療病程2周的患者(51.4%比15.0%,p=0.010)。4.hbv相關(guān)急性肝衰竭前期患者肝組織的p-糖蛋白水平顯著高于hbv相關(guān)肝衰竭患者(p0.01)與慢性無癥狀hbv攜帶者和輕度慢性乙型肝炎患者(p0.01)。5.在14例hbv相關(guān)肝衰竭前期患者中,糖皮質(zhì)激素治療后肝組織p-糖蛋白表達(dá)水平顯著高于糖皮質(zhì)激素治療之前的水平(p0.01)。6.pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn):肝衰竭前期患者在糖皮質(zhì)激素治療前后,血清alt水平與肝組織中p糖蛋白表達(dá)水平之間呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.569,p0.05),ast水平與p糖蛋白表達(dá)(rs=-0.557,p0.05)水平之間呈顯著負(fù)相關(guān),tbil與p糖蛋白(rs=-0.565,p0.05)水平之間呈顯著負(fù)相關(guān);肝組織中p糖蛋白表達(dá)水平與pta(%)(rs=775,p0.05)水平之間,呈顯著正相關(guān)。7.細(xì)胞爬片免疫組化、流式細(xì)胞術(shù)、westernblot、實(shí)時(shí)熒光定量pcr均證實(shí)人l-02肝細(xì)胞存在p-糖蛋白的表達(dá)。8.糖皮質(zhì)激素可以增強(qiáng)人l-02肝細(xì)胞p-糖蛋白的表達(dá),并呈濃度和時(shí)間依賴關(guān)系。9.糖皮質(zhì)激素拮抗trail誘導(dǎo)的人l-02肝細(xì)胞的凋亡,tunel檢測顯示用10μm的糖皮質(zhì)激素孵育48小時(shí),可顯著最低的l-02細(xì)胞凋亡細(xì)胞數(shù)目(p0.05)。10.p-糖蛋白的第三代抑制劑tariquidar可以阻斷p-糖蛋白對人l02肝細(xì)胞的凋亡拮抗作用。與不加入tariquidar只用地塞米松刺激組相比,50nm的p-糖蛋白抑制劑孵育24小時(shí),即可使l-02細(xì)胞的凋亡水平出現(xiàn)明顯增加(p0.05)。結(jié)論：1.糖皮質(zhì)激素能夠改善ALF和SALF的預(yù)后,最好的應(yīng)答者是疾病進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)性高、但病情相對較輕的患者,最佳的治療時(shí)機(jī)是癥狀出現(xiàn)兩周內(nèi)。2.肝損傷嚴(yán)重患者肝組織P-糖蛋白表達(dá)水平呈代償性增加,提示P-糖蛋白具有肝細(xì)胞保護(hù)功能、并在阻止肝細(xì)胞死亡與肝衰竭的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。3.糖皮質(zhì)激素治療阻止HBV相關(guān)肝衰竭前期患者的疾病進(jìn)展,可能與其顯著提高肝衰竭前期患者肝組織的P-糖蛋白表達(dá)水平有關(guān)。4.地塞米松可以通過誘導(dǎo)人L-02細(xì)胞P-糖蛋白的增強(qiáng)表達(dá)來保護(hù)L-02細(xì)胞抵抗TRAIL誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.3

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1281536