本文關(guān)鍵詞：氯化銨對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)的影響

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【摘要】：目的:建立大鼠海馬神經(jīng)元的氨中毒模型模擬肝性腦病的氨中毒,觀察不同氨濃度氨對(duì)體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)、微絲的影響,為闡明肝性腦病患者中樞神經(jīng)功能失調(diào)的機(jī)制提供理論依據(jù)及新思路。方法:1.提取大鼠海馬組織,培養(yǎng)原代大鼠海馬神經(jīng)元,培養(yǎng)至第7天加入不同濃度的NH_4CL(培養(yǎng)基中NH_4CL終濃度分別為0.125、0.5、1.0、5.0mmol/L),24小時(shí)后,利用熒光顯微觀察各組神經(jīng)元形態(tài)的變化,用IPP軟件統(tǒng)計(jì)各組海馬神經(jīng)元突起長(zhǎng)度,根據(jù)神經(jīng)元改變,選擇合適的氨濃度,建立氨中毒模型模擬肝性腦病。2.培養(yǎng)至第7天的海馬神經(jīng)元加入不同濃度的NH_4CL培養(yǎng)24小時(shí)后,用鈣黃綠素-乙酰乙酸酯(AM)染色,觀察海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)情況,鑒定神經(jīng)元的存活情況。3.海馬神經(jīng)元培養(yǎng)至第9天加入NH_4CL(培養(yǎng)基中NH_4CL終濃度1mmol/L),24小時(shí)后用羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色,用熒光顯微鏡及激光共聚焦顯微鏡觀察神經(jīng)元內(nèi)F-actin的改變并拍照,用IPP軟件統(tǒng)計(jì)F-actin的熒光強(qiáng)度,用Image-J軟件對(duì)海馬神經(jīng)元行Sholl分析并統(tǒng)計(jì)神經(jīng)元突起分布情況。結(jié)果:1.正常對(duì)照組神經(jīng)元生長(zhǎng)良好,細(xì)胞胞體飽滿,突起輪廓清晰,連接成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu);0.125 mmol/L NH_4CL組海馬神經(jīng)元與正常對(duì)照組無(wú)明顯差別,隨著濃度的增加,神經(jīng)元胞體內(nèi)出現(xiàn)黑色顆粒,細(xì)胞核皺縮、破裂,神經(jīng)元突起僵硬曲張、斷裂,甚至消失,5mmol/L組出現(xiàn)大量神經(jīng)元凋亡;神經(jīng)元突起長(zhǎng)度隨NH_4CL濃度的升高而降低,5mmol/L組神經(jīng)元突起長(zhǎng)度與對(duì)照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),0.125、0.5、1.0mmol/L組神經(jīng)元長(zhǎng)度與對(duì)照組比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);2.用鈣黃綠素-AM染色鑒別存活的海馬神經(jīng)元,結(jié)果顯示對(duì)照組海馬神經(jīng)元形態(tài)基本與倒置顯微鏡所見一致,神經(jīng)元生長(zhǎng)良好,熒光染色強(qiáng),5mmol/L NH_4CL組海馬神經(jīng)元經(jīng)鈣黃綠素染色后,染有綠色熒光的神經(jīng)元較少,且熒光強(qiáng)度較弱,存活神經(jīng)元的細(xì)胞密度降低(P0.05);3.用鬼筆環(huán)肽對(duì)海馬神經(jīng)元染色觀察F-actin,對(duì)照組海馬神經(jīng)元F-actin成束狀整齊分布于突起及胞體。氨中毒組,F-actin排列紊亂、結(jié)構(gòu)破壞,細(xì)胞趨于凋亡,F-actin熒光強(qiáng)度降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);氨中毒組神經(jīng)元細(xì)胞的突起的數(shù)量較對(duì)照組有著明顯下降(P0.05)。結(jié)論:1.成功分離培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元;2.高濃度的氨對(duì)體外培養(yǎng)的原代海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)有抑制作用,并誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡;3.氨中毒組大鼠海馬神經(jīng)元F-actin熒光強(qiáng)度降低,微絲束狀結(jié)構(gòu)被破壞,結(jié)構(gòu)紊亂、排列無(wú)序,提示氨中毒可導(dǎo)致F-actin異常解聚;氨中毒組神經(jīng)元細(xì)胞突起的數(shù)量減少,表明氨中毒可能在神經(jīng)元形態(tài)發(fā)育過(guò)程中有抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.3

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本文編號(hào)：1272878