本文關(guān)鍵詞：芍藥苷對重癥急性胰腺炎腎損傷的保護作用及其機制探討

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【摘要】：目的：觀察芍藥苷對大鼠重癥急性胰腺炎的量效關(guān)系,應(yīng)用其最佳劑量觀察對重癥急性胰腺炎所致大鼠急性腎損傷的保護作用,并對其可能的機制進行探討。方法：第一部分：SPF級雄性Sprague Dawley(SD)大鼠40只,采用隨機數(shù)表法分為5組,分別為假手術(shù)對照組、重癥急性胰腺炎組、芍藥苷干預(yù)組(下設(shè)3個劑量討論組)。每組有8只大鼠。芍藥苷組有分為50mg/kg組(P1)、100mg/kg組(P2)、150mg/kg組(P3),牛黃膽酸鈉(5%)成功建立重癥急性胰腺炎模型后30分鐘股靜脈給予各劑量芍藥苷。重癥急性胰腺炎組僅建模,對照組僅開腹翻動大鼠十二指腸和胰腺組織。各組在12小時時間點麻醉后下腔靜脈取血用于血清胰腺炎水平(淀粉酶AMY、脂肪酶LIPA)、肝功能(ALT、AST)以及腎功能(BUN、Cr)的檢測。取大鼠胰頭組織固定于4%的多聚甲醛中,進行HE染色,觀察胰腺組織病理改變。第二部分：SPF級雄性Sprague Dawley(SD)大鼠72只,隨機分為3大組(據(jù)隨機數(shù)表法,每組24只)：對照組、重癥急性胰腺炎腎損傷組及芍藥苷干預(yù)組(采用100mg/kg最佳劑量),每組又分為3h、6h、12h亞組,每亞組有8只大鼠�？瞻讓φ战M手術(shù)僅在麻醉后開腹翻動胰腺及十二指腸,然后關(guān)腹；重癥急性胰腺炎腎損傷組采用牛黃膽酸鈉(5%)大鼠膽胰管逆行注射構(gòu)建模型；芍藥苷干預(yù)組在構(gòu)建重癥急性胰腺炎腎損傷模型后30分鐘大鼠股靜脈注射100mg/kg芍藥苷進行干預(yù)。各組大鼠均在模型構(gòu)建后3、6、12小時麻醉后下腔靜脈取血,ELISA法檢測血清中炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α水平及腎功能改變(Cr及RUN)。大鼠腎臟組織取下后固定于4%的多聚甲醛中后包埋,切片進行HE染色觀察各組腎臟組織病理學(xué)改變。第三部分：對芍藥苷保護重癥急性胰腺炎大鼠腎功能的可能的機制進行探討。通過NO試劑盒檢測大鼠腎臟組織中NO水平的改變。免疫組織化學(xué)染色法觀察大鼠腎臟組織中NF-κ Bp65的表達情況,并通過western blot研究其上游MAPKs信號通路中磷酸化p38的活化情況,討論p38MAPKs信號通路是否參與炎性通路NF-κB的激活。采用TUNEL試劑盒輔助以Caspase-3的表達情況檢測大鼠腎組織的細胞凋亡情況。對芍藥苷保護腎功能的藥理學(xué)機制進行討論。結(jié)果：第一部分：探討芍藥苷對大鼠重癥急性胰腺炎保護作用的最佳劑量,通過牛黃膽酸鈉構(gòu)建大鼠重癥急性胰腺炎模型,芍藥苷干預(yù)組對大鼠重癥急性胰腺炎模型的最佳劑量的探討示,50mg/kg組與重癥急性胰腺炎組相比較能夠降低血清AMY和LIPA水平,其對大鼠的肝功能的影響較小,HE染色觀察胰腺組織病理的改變及胰腺病理學(xué)評分示胰腺組織病理有所改善但改善不明顯,胰腺病理評分下降程度低。100mg/kg芍藥苷干預(yù)組能夠降低重癥急性胰腺炎大鼠模型的血清AMY及LIPA,血清AST、ALT較對照組改變較輕,100mg/kg組較50mg/kg組降低血清淀粉酶,脂肪酶水平更為明顯,對于大鼠肝腎功能的改變?nèi)鏏LT,AST較對照組及50mg/kg組并無明顯區(qū)別。胰腺組織的HE染色示100mg/kg組能夠降低胰腺組織病理評分。150mg/kg芍藥苷干預(yù)組能夠降低重癥急性胰腺炎大鼠的血清AMY及LIPA,胰腺組織的HE染色能夠降低胰腺組織病理評分,但反應(yīng)肝功能的血清AST、ALT較對照組明顯升高,示150mg/kg組對大鼠機體的肝功能影響較大。綜上所述,100mg/kg是芍藥苷干預(yù)大鼠重癥急性胰腺炎最佳劑量。第二部分：觀察芍藥苷對大鼠重癥急性胰腺炎所致的急性腎損傷的保護作用在第二部分采用3、6、12小時時間節(jié)點觀察對照組、重癥急性胰腺炎組及最佳劑量芍藥苷干預(yù)組對其腎功能的保護作用。結(jié)果示芍藥苷對重癥急性胰腺炎所致的腎損傷具有保護作用,能夠降低大鼠急性炎癥反應(yīng),ELISA測定的干預(yù)組炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-α水平均較重癥急性胰腺炎組下降,統(tǒng)計學(xué)具有意義。腎臟組織的HE切片及腎組織病理評分示干預(yù)組能夠降低其病理評分。綜上,芍藥苷能夠?qū)χ匕Y急性胰腺炎所致的急性腎損傷具有保護作用。第三部分：探討芍藥苷對重癥急性胰腺炎所致的急性腎損傷的可能的機制。NO試劑盒測定腎臟組織中NO的含量,芍藥苷干預(yù)組與重癥急性胰腺炎組相比能夠降低腎臟組織中NO水平,NO水平反映了機體中缺氧狀態(tài)。腎臟組織中反映炎性狀態(tài)的NF-κB水平示芍藥苷干預(yù)組能夠降低NF-κB水平,western blot示芍藥苷組的MAPK-p38的磷酸化水平低于重癥急性胰腺炎組。TUNEL和腎臟組織中Caspase-3水平結(jié)果示芍藥苷干預(yù)組能夠減輕腎細胞的凋亡。結(jié)論：芍藥苷能夠?qū)χ匕Y急性胰腺炎所致的急性腎損傷具有一定的保護作用,量效關(guān)系是100mg/kg對于大鼠來說是最佳芍藥苷保護劑量,其保護重癥急性胰腺炎所致的急性腎損傷可能與抑制炎性組織中NO的釋放,減少腎臟組織的急性缺血有關(guān)聯(lián)。通過免疫組化、western blot及TUNEL試劑盒,芍藥苷對腎臟的保護作用可能與抑制MAPK信號通路中p38信號通路的磷酸化,進而抑制核因子K B水平,減少腎臟組織細胞的凋亡相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R576;R692

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