本文關鍵詞：Toll樣受體9在大鼠急性胰腺炎中的作用及CpG-ODN、siRNA干預后的影響

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【摘要】：第一部分Toll樣受體9在大鼠急性胰腺炎中的作用及CpG-ODN干預后的影響目的：探討Toll樣受體9(TLR9)在大鼠急性胰腺炎發(fā)病過程中的作用及CpG-ODN預處理后的變化情況。方法：SD大鼠隨機分為：正常對照組(CON組)、急性胰腺炎3h組(AP3h組)、AP6h組、AP12h組、配體干預對照組(CpG組)、配體干預急性胰腺炎3h組(CpG+AP3h組)、CpG+AP6h組、CpG+AP12h組。AP各組按十二指腸穿刺逆行胰膽管注射5%牛黃膽酸鈉建立急性胰腺炎模型；CpG各組在建模前1h給予CpG-ODN腹腔注射,其余同AP組。分別于建模后3h、6h、12h取胰腺組織進行HE、電鏡觀察胰腺組織病理學變化,qPCR、Western Blot檢查胰腺組織TLR9mRNA和蛋白量的變化,ELISA測定血清TNF-α、IL-6水平,淀粉酶試劑盒測定血清和腹水淀粉酶活性。結果：胰腺組織病理學評分隨時間升高(P0.05),CpG預處理后各組病理學評分更高(P0.05)；胰腺組織TLR9mRNA表達量隨時間上調(P0.05),CpG預處理后各組TLR9mRNA表達量更高(P0.05)；胰腺組織TLR9mRNA的表達與病理學評分呈正相關；WB檢測TLR9蛋白表達量建模后升高(P0.05),其中以6h組最高,明顯高于3h(P0.05)和12h (P0.05), CpG預處理后各組蛋白表達量上調(P0.05); ELISA檢測血清TNF-α水平建模后上升(P0.05),12h組達最高,CpG預處理后各組TNF-α含量升高(P0.05)；血清IL-6含量建模后升高(P0.05),AP6h達最高,CpG預處理后3h、6h組含量升高;血清、腹水淀粉酶建模后均升高(P0.05),CpG預處理后變化無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：1、Toll樣受體9參與了大鼠胰腺炎的發(fā)病過程；2、在胰腺炎發(fā)病早期toll樣受體9表達量上調,與急性胰腺炎的進展呈正相關；3、本研究首次證實了CpG-ODN預處理可刺激胰腺TLR9mRNA上調并加速胰腺炎的進展；4、TLR9可能是胰腺炎由水腫型轉為壞死型的一個關鍵性因素。第二部分siRNA靶向干擾TLR9基因后的大鼠急性胰腺炎的變化情況目的：探討siRNA沉默Toll樣受體9(TLR9)基因后大鼠急性胰腺炎的變化情況。方法：SD大鼠隨機分為：正常對照組(CON組)、急性胰腺炎3h組(AP3h組)、AP6h組、AP12h組、siRNA干預對照組(siRNA組)、siRNA干預急性胰腺炎3h組(siRNA+AP3h組)、siRNA+AP6h組、siRNA+AP12h組。AP各組按十二指腸穿刺逆行胰膽管注射5%牛黃膽酸鈉建立急性胰腺炎模型；siRNA各組在建模前48h給予TLR9 siRNA腹腔和靜脈注射,其余同AP組。分別于建模后3h、6h、12h行qPCR檢查胰腺組織TLR9mRNA的變化,行HE觀察胰腺組織病理學變化,ELISA測定血清TNF-α、IL-6水平,淀粉酶試劑盒測定血清和腹水淀粉酶活性。結果：TLR9 siRNA干擾后生存時間延長,siRNA各組胰腺組織TLR9mRNA表達量下調(P0.05); siRNA各組病理學評分降低(除3h組外)(P0.05); ELISA檢測siRNA各組血清TNF-α和IL-6水平降低(P0.05)。結論：1、本研究首次通過腹腔局部聯(lián)合靜脈用藥將TLR9 siRNA轉染至大鼠體內,有效的抑制了大鼠胰腺組織TLR9 mRNA的表達。2、本研究首次證實抑制TLR9 mRNA的表達后AP大鼠血清IL-6和TNF-α水平下降,胰腺病理學評分下降,生存時間延長。3、本研究提示AP的發(fā)生發(fā)展可能有多因素參與其中,TLR9在急性胰腺炎早期的進展中,特別是由水腫向壞死過程中起了重要的作用。4、本研究首次揭示了降低TLR9基因的表達能明顯延緩早期胰腺炎的進展,可能為急性胰腺炎提供一個新的預防和治療靶點。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R576

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