本文關(guān)鍵詞：長脈沖胃電刺激對糖尿病大鼠胃動力的影響及其機制研究

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【摘要】：目的以糖尿病大鼠為研究對象,觀察糖尿病狀態(tài)下胃動力和胃竇ICC的改變。 方法雄性Sprague Dawley(SD)大鼠20只,隨機分為兩組,糖尿病組(DM group, n=10)采用60mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射成功建立糖尿病模型：其余10只為正常對照組(normal control group, n=10)。分別于造模前、成模后、成模后第2周、4周和6周記錄兩組大鼠的血糖和體重。成模后第6周末,應(yīng)用酚紅餐灌胃法檢測胃排空及器官浴槽技術(shù)檢測胃竇環(huán)形肌收縮能力來判斷兩組大鼠胃動力的改變情況：應(yīng)用免疫組化、RT-PCR和Western blot等實驗技術(shù)評估胃竇c-kit的表達(dá)情況：應(yīng)用透射電鏡仔細(xì)觀察ICC超微結(jié)構(gòu)損傷情況。 結(jié)果(1)造模前兩組大鼠血糖水平?jīng)]有明顯地差異：成模后及成模后第2周、4周和6周,糖尿病組大鼠血糖水平與正常組相比顯著升高；(2)造模前兩組大鼠體重亦沒有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周和6周,糖尿病組大鼠體重較同期正常組相比都有明顯下降；(3)糖尿病組大鼠胃排空率較正常組相比發(fā)生明顯延遲(0.57+0.06%vs0.73±0.02%,P=0.018)；(4)在選擇性破壞ICC前后,糖尿病組肌條收縮能力均較正常組的明顯減弱；(5)RT-PCR顯示糖尿病組大鼠胃竇c-kit mRNA的表達(dá)量相對于正常組明顯降低(0.024+0.001vs1.000±0.095,P=0.000)；(6)免疫印跡法實驗顯示胃竇c-kit蛋白表達(dá)量在糖尿病組較止常組相比顯著降低；(7)止常組胃竇c-kit陽性細(xì)胞主要分布在肌間層,肌內(nèi)層以及黏膜下層,而糖尿病組各層次c-kit陽性細(xì)胞表達(dá)均明顯減少：(8)糖尿病組ICC超微結(jié)構(gòu)較正常組顯示細(xì)胞器顯著減少,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯腫脹。 結(jié)論糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯胃排空延遲,胃竇收縮力減弱,并且伴隨有ICC的缺失和損傷。 目的以糖尿病胃輕癱大鼠為動物模型,研究在糖尿病狀態(tài)下SCF/c-kit信號通路及SMC在ICC改變中的作用。 方法應(yīng)用免疫印跡法檢測胃竇SCF、a-SMA、mysionll蛋白表達(dá)；應(yīng)用RT-PCR檢測SCF、a-SMA mRNA表達(dá)：應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)a-SMA與c-kit同時定位半滑肌細(xì)胞與ICC細(xì)胞的表達(dá)；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察SMC超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果(1)Western blot結(jié)果顯示,糖尿病組大鼠胃竇的SCF蛋白表達(dá)量較正常組相比顯著降低,但糖尿病組胃竇的a-SMA表達(dá)較正常組未見明顯改變,而mysionll則較正常組表達(dá)出現(xiàn)顯著降低：(2) RT-PCR結(jié)果顯示,糖尿病組大鼠胃竇SCF mRNA的表達(dá)量相對于正常組明顯降低,而a-SMA mRNA的表達(dá)量則較正常組未見明顯改變；(3)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示在正常組c-kit+細(xì)胞夾雜在a-SMA+細(xì)胞之間,肌間層與肌內(nèi)層有較多ICC分布,而糖尿病組a-SMA+細(xì)胞未出現(xiàn)較明顯改變,c-kit+細(xì)胞則明顯減少；(4)正常對照組SMC整體呈梭形,其細(xì)胞核則為長橢圓形,胞核內(nèi)的異染色質(zhì)分布相對較為均勻,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯可見豐富的密斑、密體,肌絲亦清晰可見,可見線粒體較多分布其中。糖尿病組的SMC排列較為紊亂,細(xì)胞核較為不規(guī)則,染色質(zhì)呈致密塊狀,染色較深,胞內(nèi)可見有許多較大的胞質(zhì)溶解性空泡,密斑及密體、肌絲同時都明顯減少,線粒體異常腫脹、呈空泡樣變、甚至溶解。 結(jié)論糖尿病時SCF/c-kit信號通路表達(dá)下調(diào),SMC數(shù)量未見明顯減少,但結(jié)構(gòu)出現(xiàn)顯著損傷。 目的觀察長脈沖胃電刺激能否有效地改善糖尿病胃輕癱大鼠胃動力及對胃竇ICC的影響,進一步探討其中相關(guān)機制。 方法雄性Sprague Dawley (SD)大鼠共60只,其中40只成功制備胃電刺激動物模型。分為正常對照組(Control, n=10)、糖尿病組(DM,n=10)、糖尿病+假性刺激組(DM+SGES, n=10)、糖尿病+真性刺激組(DM+GES, n=30)。經(jīng)過術(shù)后恢復(fù)兩周后,糖尿病組及真假性刺激組大鼠采用STZ溶液60mg/kg一次性腹腔注射成功制備糖尿病大鼠模型。假性刺激組(DM+SGES)只埋電極手術(shù),不給予胃電刺激干預(yù),而真性刺激組(DM+GES, n1=n2=n3=10)則埋電極后在給予給予不同參數(shù)的長脈沖電刺激。其參數(shù)為：GES1為5.5cpm,100ms,4mA; GES2為5.5cpm,300ms,4mA; GES3為5.5cpm,550ms,2mA.刺激干預(yù)為慢性刺激,30min/天,共刺激6周。分別于造模前、成模后、成模后2周、4周和6周等時間段記錄各組大鼠的血糖和體重。成模6周后,應(yīng)用酚紅餐灌胃法測定胃排空和器官浴槽技術(shù)檢測胃竇環(huán)肌收縮能力來評估各組大鼠胃動力的改變。取各組大鼠胃竇組織標(biāo)本,應(yīng)用Western blot和RT-PCR技術(shù)評估胃竇組織c-kit、SCF、a-SMA、myosinll的表達(dá)情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察各組胃竇ICC的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)定位ICC與SMC的共表達(dá)：應(yīng)用透射電鏡檢測ICC及SMC超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果(1)造模前各組大鼠血糖水平?jīng)]有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周和6周,真假刺激組與糖尿病組相比沒有明顯差異；(2)造模前各組大鼠體重亦沒有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周,真性刺激組大鼠體重較糖尿病組亦無明顯增加：成模后第6周,真性刺激組大鼠體重較糖尿病組有顯著差異；(3)DM組胃排空較正常組明.顯減弱,給予不同參數(shù)的GES后胃排空都有明顯改善,其中GES2和GES3效果最明顯；(4)DM組胃竇環(huán)形肌條收縮較正常組明顯減弱,給予不同參數(shù)的GES后胃竇肌條收縮都有明顯改善；(5)Western blot結(jié)果顯示在給予長脈沖胃電刺激后c-kit、SCF、myosinll蛋白表達(dá)量均較糖尿病組表現(xiàn)顯著增加,而a-SMA蛋白的表達(dá)量則未見明顯改變；(6)RT-PCR顯示真性刺激組大鼠胃竇c-kit、SCF mRNA的表達(dá)量均較糖尿病組有明顯增加,而a-SMA mRNA的表達(dá)量未見發(fā)生明顯改變；(7)免疫組織化學(xué)技術(shù)顯示各真性刺激組多數(shù)胃竇c-kit陽性細(xì)胞主要分布在肌間層,肌內(nèi)層及黏膜下層亦有許多陽性表達(dá)；(8)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示糖尿病大鼠給予真性胃電刺激后a-SMA+細(xì)胞之間有較多c-kit+細(xì)胞,即肌間層與肌內(nèi)層可以觀察到有較多ICC分布；(9)各真性刺激組ICC超微結(jié)構(gòu)較糖尿病組顯示細(xì)胞膜較為完整,細(xì)胞核內(nèi)分布的異染色質(zhì)可見明顯減少,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等重要細(xì)胞器腫脹程度明顯降低：各真性刺激組SMC表現(xiàn)排列整齊,梭形,細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)均勻分布,末見較大的胞質(zhì)溶解空泡,可見豐富的密體和較多的肌絲,細(xì)胞器未見明顯腫脹和擴張。結(jié)論長脈沖胃電刺激可一定程度上增加糖尿病大鼠體重,并有效地改善糖尿病大鼠出現(xiàn)的胃排空延遲及胃竇收縮力減弱；長脈沖胃電刺激明顯增加糖尿病大鼠胃竇ICC的表達(dá)和改善其細(xì)胞病理損傷,同時上調(diào)SCF/c-kit信號通路的表達(dá)以及改善SMC結(jié)構(gòu)損傷。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R57

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本文編號：1252924