發(fā)布時(shí)間：2017-12-05 00:25

  本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)脈沖胃電刺激對(duì)糖尿病大鼠胃動(dòng)力的影響及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的以糖尿病大鼠為研究對(duì)象,觀察糖尿病狀態(tài)下胃動(dòng)力和胃竇ICC的改變。 方法雄性Sprague Dawley(SD)大鼠20只,隨機(jī)分為兩組,糖尿病組(DM group, n=10)采用60mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射成功建立糖尿病模型：其余10只為正常對(duì)照組(normal control group, n=10)。分別于造模前、成模后、成模后第2周、4周和6周記錄兩組大鼠的血糖和體重。成模后第6周末,應(yīng)用酚紅餐灌胃法檢測(cè)胃排空及器官浴槽技術(shù)檢測(cè)胃竇環(huán)形肌收縮能力來(lái)判斷兩組大鼠胃動(dòng)力的改變情況：應(yīng)用免疫組化、RT-PCR和Western blot等實(shí)驗(yàn)技術(shù)評(píng)估胃竇c-kit的表達(dá)情況：應(yīng)用透射電鏡仔細(xì)觀察ICC超微結(jié)構(gòu)損傷情況。 結(jié)果(1)造模前兩組大鼠血糖水平?jīng)]有明顯地差異：成模后及成模后第2周、4周和6周,糖尿病組大鼠血糖水平與正常組相比顯著升高；(2)造模前兩組大鼠體重亦沒(méi)有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周和6周,糖尿病組大鼠體重較同期正常組相比都有明顯下降；(3)糖尿病組大鼠胃排空率較正常組相比發(fā)生明顯延遲(0.57+0.06%vs0.73±0.02%,P=0.018)；(4)在選擇性破壞ICC前后,糖尿病組肌條收縮能力均較正常組的明顯減弱；(5)RT-PCR顯示糖尿病組大鼠胃竇c-kit mRNA的表達(dá)量相對(duì)于正常組明顯降低(0.024+0.001vs1.000±0.095,P=0.000)；(6)免疫印跡法實(shí)驗(yàn)顯示胃竇c-kit蛋白表達(dá)量在糖尿病組較止常組相比顯著降低；(7)止常組胃竇c-kit陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在肌間層,肌內(nèi)層以及黏膜下層,而糖尿病組各層次c-kit陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)均明顯減少：(8)糖尿病組ICC超微結(jié)構(gòu)較正常組顯示細(xì)胞器顯著減少,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯腫脹。 結(jié)論糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯胃排空延遲,胃竇收縮力減弱,并且伴隨有ICC的缺失和損傷。 目的以糖尿病胃輕癱大鼠為動(dòng)物模型,研究在糖尿病狀態(tài)下SCF/c-kit信號(hào)通路及SMC在ICC改變中的作用。 方法應(yīng)用免疫印跡法檢測(cè)胃竇SCF、a-SMA、mysionll蛋白表達(dá)；應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)SCF、a-SMA mRNA表達(dá)：應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)a-SMA與c-kit同時(shí)定位半滑肌細(xì)胞與ICC細(xì)胞的表達(dá)；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察SMC超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果(1)Western blot結(jié)果顯示,糖尿病組大鼠胃竇的SCF蛋白表達(dá)量較正常組相比顯著降低,但糖尿病組胃竇的a-SMA表達(dá)較正常組未見(jiàn)明顯改變,而mysionll則較正常組表達(dá)出現(xiàn)顯著降低：(2) RT-PCR結(jié)果顯示,糖尿病組大鼠胃竇SCF mRNA的表達(dá)量相對(duì)于正常組明顯降低,而a-SMA mRNA的表達(dá)量則較正常組未見(jiàn)明顯改變；(3)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示在正常組c-kit+細(xì)胞夾雜在a-SMA+細(xì)胞之間,肌間層與肌內(nèi)層有較多ICC分布,而糖尿病組a-SMA+細(xì)胞未出現(xiàn)較明顯改變,c-kit+細(xì)胞則明顯減少；(4)正常對(duì)照組SMC整體呈梭形,其細(xì)胞核則為長(zhǎng)橢圓形,胞核內(nèi)的異染色質(zhì)分布相對(duì)較為均勻,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯可見(jiàn)豐富的密斑、密體,肌絲亦清晰可見(jiàn),可見(jiàn)線粒體較多分布其中。糖尿病組的SMC排列較為紊亂,細(xì)胞核較為不規(guī)則,染色質(zhì)呈致密塊狀,染色較深,胞內(nèi)可見(jiàn)有許多較大的胞質(zhì)溶解性空泡,密斑及密體、肌絲同時(shí)都明顯減少,線粒體異常腫脹、呈空泡樣變、甚至溶解。 結(jié)論糖尿病時(shí)SCF/c-kit信號(hào)通路表達(dá)下調(diào),SMC數(shù)量未見(jiàn)明顯減少,但結(jié)構(gòu)出現(xiàn)顯著損傷。 目的觀察長(zhǎng)脈沖胃電刺激能否有效地改善糖尿病胃輕癱大鼠胃動(dòng)力及對(duì)胃竇ICC的影響,進(jìn)一步探討其中相關(guān)機(jī)制。 方法雄性Sprague Dawley (SD)大鼠共60只,其中40只成功制備胃電刺激動(dòng)物模型。分為正常對(duì)照組(Control, n=10)、糖尿病組(DM,n=10)、糖尿病+假性刺激組(DM+SGES, n=10)、糖尿病+真性刺激組(DM+GES, n=30)。經(jīng)過(guò)術(shù)后恢復(fù)兩周后,糖尿病組及真假性刺激組大鼠采用STZ溶液60mg/kg一次性腹腔注射成功制備糖尿病大鼠模型。假性刺激組(DM+SGES)只埋電極手術(shù),不給予胃電刺激干預(yù),而真性刺激組(DM+GES, n1=n2=n3=10)則埋電極后在給予給予不同參數(shù)的長(zhǎng)脈沖電刺激。其參數(shù)為：GES1為5.5cpm,100ms,4mA; GES2為5.5cpm,300ms,4mA; GES3為5.5cpm,550ms,2mA.刺激干預(yù)為慢性刺激,30min/天,共刺激6周。分別于造模前、成模后、成模后2周、4周和6周等時(shí)間段記錄各組大鼠的血糖和體重。成模6周后,應(yīng)用酚紅餐灌胃法測(cè)定胃排空和器官浴槽技術(shù)檢測(cè)胃竇環(huán)肌收縮能力來(lái)評(píng)估各組大鼠胃動(dòng)力的改變。取各組大鼠胃竇組織標(biāo)本,應(yīng)用Western blot和RT-PCR技術(shù)評(píng)估胃竇組織c-kit、SCF、a-SMA、myosinll的表達(dá)情況；應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察各組胃竇ICC的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)定位ICC與SMC的共表達(dá)：應(yīng)用透射電鏡檢測(cè)ICC及SMC超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果(1)造模前各組大鼠血糖水平?jīng)]有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周和6周,真假刺激組與糖尿病組相比沒(méi)有明顯差異；(2)造模前各組大鼠體重亦沒(méi)有明顯差異；成模后及成模后第2周、4周,真性刺激組大鼠體重較糖尿病組亦無(wú)明顯增加：成模后第6周,真性刺激組大鼠體重較糖尿病組有顯著差異；(3)DM組胃排空較正常組明.顯減弱,給予不同參數(shù)的GES后胃排空都有明顯改善,其中GES2和GES3效果最明顯；(4)DM組胃竇環(huán)形肌條收縮較正常組明顯減弱,給予不同參數(shù)的GES后胃竇肌條收縮都有明顯改善；(5)Western blot結(jié)果顯示在給予長(zhǎng)脈沖胃電刺激后c-kit、SCF、myosinll蛋白表達(dá)量均較糖尿病組表現(xiàn)顯著增加,而a-SMA蛋白的表達(dá)量則未見(jiàn)明顯改變；(6)RT-PCR顯示真性刺激組大鼠胃竇c-kit、SCF mRNA的表達(dá)量均較糖尿病組有明顯增加,而a-SMA mRNA的表達(dá)量未見(jiàn)發(fā)生明顯改變；(7)免疫組織化學(xué)技術(shù)顯示各真性刺激組多數(shù)胃竇c-kit陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在肌間層,肌內(nèi)層及黏膜下層亦有許多陽(yáng)性表達(dá)；(8)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示糖尿病大鼠給予真性胃電刺激后a-SMA+細(xì)胞之間有較多c-kit+細(xì)胞,即肌間層與肌內(nèi)層可以觀察到有較多ICC分布；(9)各真性刺激組ICC超微結(jié)構(gòu)較糖尿病組顯示細(xì)胞膜較為完整,細(xì)胞核內(nèi)分布的異染色質(zhì)可見(jiàn)明顯減少,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等重要細(xì)胞器腫脹程度明顯降低：各真性刺激組SMC表現(xiàn)排列整齊,梭形,細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)均勻分布,末見(jiàn)較大的胞質(zhì)溶解空泡,可見(jiàn)豐富的密體和較多的肌絲,細(xì)胞器未見(jiàn)明顯腫脹和擴(kuò)張。結(jié)論長(zhǎng)脈沖胃電刺激可一定程度上增加糖尿病大鼠體重,并有效地改善糖尿病大鼠出現(xiàn)的胃排空延遲及胃竇收縮力減弱；長(zhǎng)脈沖胃電刺激明顯增加糖尿病大鼠胃竇ICC的表達(dá)和改善其細(xì)胞病理?yè)p傷,同時(shí)上調(diào)SCF/c-kit信號(hào)通路的表達(dá)以及改善SMC結(jié)構(gòu)損傷。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R57

【相似文獻(xiàn)】

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