ω-3魚油脂肪乳對肝細(xì)胞氧化損傷的修復(fù)作用及其機(jī)制
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【摘要】:目的觀察ω-3魚油脂肪乳對肝細(xì)胞氧化損傷的修復(fù)作用,并探討其機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人肝細(xì)胞系HL7702細(xì)胞。取對數(shù)生長期的HL7702細(xì)胞分成對照組、模型組和觀察組,每組9孔。對照組僅加培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng);模型組、觀察組在培養(yǎng)基中加入500μmol/L過氧化氫(H_2O_2),培養(yǎng)1 h后觀察組加入0.5%ω-3魚油脂肪乳;另設(shè)空白對照組,只加培養(yǎng)基,無細(xì)胞。各組繼續(xù)培養(yǎng)4 h后收集細(xì)胞,油紅O染色觀察各組細(xì)胞內(nèi)脂滴變化,CCK-8法測算各組細(xì)胞存活率,DCFH-DA熒光探針法檢測各組細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(ROS),比色法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST),COD-PAP單試劑比色法檢測各組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC),硫代巴比妥酸法檢測各組細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA),黃嘌呤氧化酶法檢測各組細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD),實(shí)時熒光定量PCR法檢測各組細(xì)胞中過氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)αmRNA,Western blotting法檢測各組細(xì)胞中肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)相對表達(dá)量。結(jié)果光鏡下可見脂滴染為橘紅色。對照組組HL7702肝細(xì)胞排列緊密,僅見少許橘紅色脂滴。模型組肝細(xì)胞可見大量橘紅色脂滴并伴有脂滴融合現(xiàn)象。觀察組肝細(xì)胞可見較多橘紅色脂滴,但與模型組比較顯著減少。對照組、模型組、觀察組細(xì)胞存活率分別為67.25%±4.68%、71.72%±2.47%、100%。觀察組細(xì)胞存活率高于模型組(P0.05),但低于對照組(P0.05)。與對照組比較,模型組細(xì)胞內(nèi)ROS增高(P0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清液ALT、AST增高(P均0.05),細(xì)胞內(nèi)TG、TC、MDA增高(P均0.05),細(xì)胞內(nèi)SOD降低(P0.05),PPARαmRNA降低(P0.05),L-FABP相對表達(dá)量降低(P0.05)。與模型組比較,觀察組細(xì)胞內(nèi)ROS降低(P0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清液ALT、AST均降低(P均0.05),細(xì)胞內(nèi)TG、TC、MDA均降低(P均0.05),細(xì)胞內(nèi)SOD活性增高(P0.05),PPARαmRNA增高(P0.05),L-FABP相對表達(dá)量增高(P0.05)。結(jié)論ω-3魚油脂肪乳可修復(fù)人肝HL7702細(xì)胞氧化損傷,其機(jī)制可能與其上調(diào)LFABP/PPARα信號通路相關(guān)因子的表達(dá)、維持肝細(xì)胞脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)有關(guān)。
【作者單位】: 貴州醫(yī)科大學(xué);
【基金】:貴州省國際科技合作計劃項(xiàng)目(20137023)
【分類號】:R575
【正文快照】: 人機(jī)體內(nèi)正常情況下活性氧的產(chǎn)生和清除處于動態(tài)平衡。當(dāng)內(nèi)源性或外源性的刺激破壞平衡后可致活性氧大量生成。當(dāng)活性氧超過機(jī)體抗氧化系統(tǒng)清除能力時,會引起細(xì)胞DNA氧化損傷及細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)異常,并產(chǎn)生細(xì)胞毒效應(yīng),最終對機(jī)體造成不可逆的損傷[1,2]。肝臟細(xì)胞的氧化損傷在
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