本文關鍵詞：鋅α2糖蛋白對LPS干預的HepG2的JNK炎癥信號通路的影響

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【摘要】：目的:重組鋅alpha2糖蛋白(Zinc alpha2 glycoprotein,ZAG)質(zhì)粒瞬時轉染Hep G2細胞,觀察Hep G2細胞過表達ZAG后對肝細胞的腫瘤壞死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)表達的影響以及探討脂多糖(LPS)干預對Hep G2細胞和Hepa1-6細胞的ZAG、法尼酯受體(Farnesoid X receptor,FXR)、脂肪細胞因子Adiponectin表達的影響。方法:1.體外培養(yǎng)Hep G2細胞,用濃度分別為1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml的ZAG質(zhì)粒轉染Hep G2細胞48小時后,Western blot檢測ZAG蛋白表達情況。2.體外培養(yǎng)Hep G2細胞,用過表達ZAG質(zhì)粒(p IRES2-h ZAG)和空白質(zhì)粒(p IRES2-GFP)分別經(jīng)脂質(zhì)體2000轉染Hep G2細胞48h后,Western blot檢測TNF-α、IL-1β蛋白表達情況。3.體外培養(yǎng)Hep G2以及Hepa1-6細胞,用LPS分別干預Hep G2和Hepa1-6細胞0h、1/2h、1h、2h、6h、12h、24h、48h,Western blot檢測ZAG、FXR以及Adiponectin蛋白的表達情況。結果:1.4μg/ml組ZAG質(zhì)粒轉染Hep G2細胞后,能顯著增加ZAG蛋白的表達。2.與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組中炎癥因子TNF-α表達降低(p0.05),炎癥因子IL-1β表達降低(p0.01)。3.用LPS分別干預Hep G2和Hepa1-6細胞不同時間,在LPS(1μg/ml)干預下,Hep G2細胞中ZAG在干預1h表達增加(p0.05),干預12h、24h、48h時ZAG表達明顯降低(p0.01);FXR在12h、24h、48h表達降低(p0.05);Adiponectin在6h、12h、24h、48h表達明顯降低(p0.01)。而Hepa1-6細胞中ZAG在LPS干預1h表達增加(p0.05),干預6h、12h、24h、48h表達降低(p0.05);FXR在12h、24h、48h表達降低(p0.05);Adiponectin在6h、12h、24h、48h表達降低(p0.05)。結論:1.過表達ZAG可降低Hep G2細胞中炎癥因子TNF-α及IL-1β蛋白表達。2.LPS干預Hep G2細胞和Hepa1-6細胞,ZAG、FXR、Adiponectin均在干預12小時以后表達減少。目的:探討鋅alpha2糖蛋白ZAG對LPS誘導的Hep G2細胞JNK炎癥信號通路的影響。方法:1.體外培養(yǎng)Hep G2細胞和Hepa1-6細胞,用LPS分別干預對照組、空白質(zhì)粒組、ZAG過表達組12小時,Western blot檢測ZAG、FXR、Adiponectin蛋白的表達情況。2.用六孔板培養(yǎng)Hep G2細胞,過表達ZAG質(zhì)粒和空白質(zhì)粒分別經(jīng)脂質(zhì)體2000轉染Hep G2細胞48h后,并分別用LPS以及LPS聯(lián)合JNK抑制劑SP600125干預,Western blot檢測JNK、P-JNK、C-jun、P-cjun蛋白的表達。結果:1.Western blot結果顯示:與control組相比,LPS組以及LPS+p IRES2-GFP組ZAG表達明顯降低(p0.01),與LPS+p IRES2-GFP組相比,LPS+p IRES2-h ZAG組ZAG表達增加(p0.05);與control組相比,LPS組以及LPS+p IRES2-GFP組FXR及Adiponectin表達降低(p0.05)。2.Western-blotting結果顯示:與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組各組JNK蛋白表達無明顯變化(p0.05),在p IRES2-GFP組中,與control組相比,LPS干預組中P-JNK蛋白表達增加(p0.05),LPS+SP600125聯(lián)合干預組與LPS干預組相比,P-JNK蛋白表達降低(p0.05),與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組中LPS+SP600125干預組P-JNK蛋白表達降低(p0.05)。3.Western-blotting結果顯示,在p IRES2-GFP組中,與control組相比,LPS干預組中C-jun及P-cjun蛋白表達增加(p0.05),LPS+SP600125聯(lián)合干預組與LPS干預組相比,C-jun及P-cjun蛋白表達降低(p0.05),與p IRES2-GFP組相比,p IRES2-h ZAG組中LPS+SP600125干預組C-jun及P-cjun蛋白表達降低(p0.05)。結論:1.過表達ZAG能降低P-JNK、C-jun及P-cjun蛋白的表達,在JNK抑制劑SP600125和LPS聯(lián)合作用下,ZAG能增強JNK抑制劑SP600125的抑制作用,從而降低P-JNK、C-jun及P-cjun蛋白表達。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.5

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