本文關(guān)鍵詞：TRAF5基因缺失通過(guò)調(diào)節(jié)輔助性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥加重小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎

  更多相關(guān)文章： 炎癥性腸病 TRAF5 Th細(xì)胞 基因敲除 NF-κB信號(hào)通路

【摘要】：研究背景及目的：炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種慢性、復(fù)發(fā)性的腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病(crohn's disease,CD)兩種類型。迄今為止,IBD的具體病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其發(fā)病是遺傳、環(huán)境、感染、免疫等多方面因素共同作用的結(jié)果。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子5(tumor necrosis factor-associated factors 5,TRAF5)是一種細(xì)胞內(nèi)接頭蛋白,它可與細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)多種受體發(fā)生結(jié)合,從而調(diào)控下游的信號(hào)傳遞。研究證實(shí),TRAF5可以有效調(diào)節(jié)輔助性T淋巴細(xì)胞(Th細(xì)胞)介導(dǎo)的免疫應(yīng)答反應(yīng),并參與調(diào)控NF-κd3等信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo),但是TRAF5在IBD發(fā)病中的作用仍不得而知。我們的研究首次運(yùn)用7RAF5基因敲除的小鼠構(gòu)建DSS誘導(dǎo)的急性腸炎模型,以期探討TRAF5在IBD發(fā)病中的作用及具體作用機(jī)制,從而為臨床IBD的診療提供新策略。方法：TRAF5基因敲除小鼠及野生型小鼠給予自由飲用3%DSS溶液,連續(xù)造模7天,通過(guò)體重百分比、疾病活動(dòng)度評(píng)分、結(jié)腸縮短程度、組織病理學(xué)評(píng)分及MPO活性5個(gè)方面評(píng)估結(jié)腸炎癥程度;Real-Time PCR法檢測(cè)腸組織中Th細(xì)胞特異性細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子(Th1:TNF-α、IFN-γ、T-bet；Th2:IL-4.GATA-3； Th17:IL-17a、IL-22、ROR-α、ROR-γt) mRNA的表達(dá)水平；ELISA及免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞因子11FN-γ、IL-4及IL-17a 在腸道中的分泌與表達(dá)；分選腸固有膜單個(gè)核細(xì)胞(LPMC),流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)LPMC中Th各亞群細(xì)胞的比例；Western blot法檢測(cè)腸組織中p65及IκBα總蛋白及磷酸化蛋白的表達(dá)水平；免疫熒光單標(biāo)法檢測(cè)p65的核內(nèi)定位情況,免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)腸組織中p65+CD4+及p65+CK18+細(xì)胞的表達(dá)與分布。結(jié)果：與野生型小鼠相比,TRAF5基因敲除小鼠在造模第5天時(shí)開(kāi)始表現(xiàn)出更顯著的體重下降(體重百分比,第5天：88.13±3.64%vs.97.04±2.97%,p0.01;第6天：78.41±3.25%vs.90.04±2.83%,p0.01；第7天：71.32±3.28%vs.82.98±2.63%,p0.01),并于造模第4天時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)疾病活動(dòng)度評(píng)分的明顯增高(第4天：5.4±1.8 vs.2.9±1.4,p=0.019；第5天：9.4±2.4 vs.4.7±2.6,p=0.003；第6天：11.2±0.8 vs.9.0±1.1,p=0.001；第7天：11.8±0.6 vs.10.4±1.1,p=0.018);另外,TRAF5基因敲除小鼠DSS誘導(dǎo)后結(jié)腸縮短更明顯(結(jié)腸長(zhǎng)度,46.9±29 mm vs. 55.2±2.5 mm,p0.01),腸組織病理學(xué)評(píng)分更高(7.50±0.53 vs.5.60±1.07,p0.01),MPO活性更強(qiáng)(1.58±0.62 vs.1.01±0.19 U/g組織,p0.05)；Real-Time PCR的結(jié)果顯示,TRAF5基因敲除小鼠造模后腸組織IFN-γ、IL-4、IL-17a、T-bet及GATA3 mRNA的表達(dá)較野生型小鼠顯著增高,而兩組小鼠之間Th17細(xì)胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子ROR-α及 ROR-yt mRNA的表達(dá)卻無(wú)明顯差異；ELISA及免疫熒光的結(jié)果表明,TRAF5基因缺失可以明顯促進(jìn)結(jié)腸炎小鼠腸組織中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4及IL-17a的分泌與表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果提示,TRAF5基因缺失可以顯著增加造模小鼠腸道固有膜中Th2細(xì)胞及IFN-γ+IL-17a+CD4+T細(xì)胞的比例;Western blot結(jié)果顯示,與野生型小鼠相比,TRAF5基因敲除小鼠DSS誘導(dǎo)后腸組織P-p65、T-p65及P-IκBα蛋白的表達(dá)明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；免疫熒光單標(biāo)的結(jié)果表明,TRAF5基因缺失可以顯著促進(jìn)造模小鼠腸道p65的核內(nèi)移位；免疫熒光雙標(biāo)的結(jié)果顯示,DSS誘導(dǎo)的TRAF5基因敲除小鼠腸組織中p65+CD4+細(xì)胞的表達(dá)較野生型小鼠顯著增高,而兩組小鼠之間p65+CK18+細(xì)胞的表達(dá)卻無(wú)明顯差異。結(jié)論：我們的研究發(fā)現(xiàn),TRAF5基因缺失可以顯著加重DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥,增強(qiáng)造模小鼠腸道固有膜中Th2細(xì)胞及IFN-y+IL-17a+CD4+T細(xì)胞的反應(yīng),同時(shí)促進(jìn)腸道CD4+T淋巴細(xì)胞中NF-κB信號(hào)的激活。因此我們推斷,TRAF5基因在小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的發(fā)病過(guò)程中可能發(fā)揮抗炎作用,TRAF5基因缺失導(dǎo)致DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的加重可能與其對(duì)Th細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用有關(guān),作用于TRAF5將為臨床上IBD的診療提供新策略。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R574.62

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳鋒;何生松;邱榮元;龐然;許娟娟;董繼華;;Influence of Silencing TRAF6 with shRNA on LPS/TLR4 Signaling in vitro[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2010年03期

2 辛利軍;TRAF:一種重要的接頭分子[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));2002年03期

3 李珊;楊桂文;安利國(guó);;TRAF1以及它的生物學(xué)功能[J];科技信息(學(xué)術(shù)研究);2008年25期

4 ;TRAF-mediated regulation of immune and inflammatory responses[J];Science China(Life Sciences);2010年02期

5 王新禹;黃懿;李禮;魏群;;腫瘤壞死因子受體作用因子3(TRAF3)結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年06期

6 孫利;王曉輝;關(guān)薇;唐劉君;王建;楊曉明;汪思應(yīng);;TRAF6-GST融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)及純化[J];生物技術(shù)通訊;2011年05期

7 張波;周芳亮;盧芳國(guó);嚴(yán)杰;王成;周建林;張健;;過(guò)表達(dá)TRAF2降解外源性綠色熒光蛋白[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年08期

8 王沂;張秀軍;劉青;余源;慈雅麗;王洋;;人TRAF3IP3基因的克隆及真核表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年05期

9 曾凡龍;衛(wèi)榮華;朱敬;沈君豪;;以TRAF2為樣本檢驗(yàn)證實(shí)的一種通過(guò)模式關(guān)鍵位點(diǎn)研究未知蛋白質(zhì)功能的方法[J];湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

10 張文;張p，

本文編號(hào)：1201493