本文關(guān)鍵詞：1，，25-二羥基維生素D3對體外大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響及其機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:探討1,25-二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3)對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響及其可能的機(jī)制。方法:1,25-(OH)2D3作用于離體大鼠肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6),用MTT比色法測定細(xì)胞的增殖變化;應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移能力的改變;選擇流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry,FCM)觀測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的變化;Western Blotting法判斷凋亡調(diào)節(jié)蛋白caspase-3、casepase-9,PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路中總Akt(ser473)、mTOR(ser2448)及磷酸化的pAkt(ser473)及pmTOR(ser2448)和Ⅰ型膠原蛋白量改變;應(yīng)用Rt-PCR法檢測α-1(Ⅰ)mRNA的表達(dá)變化,觀察凋亡調(diào)節(jié)蛋白和PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路對HSC的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡的調(diào)節(jié)機(jī)制。結(jié)果:1.1,25-(OH)2D3能有效降低HSC-T6的遷移能力并以濃度和時(shí)間依賴的方式抑制其增值,藥物濃度分別為2.5×10-9-2.5×10-6mol/l,體外經(jīng)24小時(shí)干預(yù)后對T6細(xì)胞抑制率分別達(dá)到32.01%,42.23%,51.23%,64.11%,上述濃度梯度在12-48h時(shí)限范圍內(nèi)抑制T6細(xì)胞呈現(xiàn)出時(shí)效和量效關(guān)系(P0.05)。2.細(xì)胞間劃痕剩余面積隨著1,25(OH)2D3濃度的提高逐漸變大,細(xì)胞融合率呈減低趨勢。對照組較2.5×10-9、2.5×10-8、2.5×10-7、2.5×10-6實(shí)驗(yàn)組的劃痕剩余面積逐步增大,組間比較有差別,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.FCM檢測發(fā)現(xiàn),對照組HSC-T6經(jīng)48h培養(yǎng)后其凋亡率為1.03%,與其他實(shí)驗(yàn)組對比,HSC-T6凋亡率上升,分別至3.91%,7.11%,12.01%,22.21%,與對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.細(xì)胞周期分析結(jié)果示對照組細(xì)胞G0/G1期、S期的細(xì)胞百分比與各個(gè)試驗(yàn)組經(jīng)48h干預(yù)后G0/G1期百分比均不同程度升高,S期百分比則均明顯下降,濃度梯度試驗(yàn)組與正常對照組想對比G0/G1期、S期的百分比均可見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,G2/M期的百分比則無明顯變化,由此說明經(jīng)藥物干預(yù)后T6細(xì)胞被阻滯于G0/G1期(P0.05)。5.1,25-(OH)2D3作用24h后,I型膠原mRNA表達(dá)和I型膠原蛋白印記表達(dá)均呈劑量依賴性降低(P0.05)。6.蛋白印記法測得經(jīng)1,25-(OH)2D3干預(yù)后T6細(xì)胞促凋亡蛋白caspase-3及caspase-9活性增加。7.蛋白印跡法測總Akt、mTOR及磷酸化的Akt(Ser473)、mTOR(Ser2448),1,25-(OH)2D3顯著抑制磷酸化的Akt(Ser473)、mTOR(Ser2448)而總的Akt、mTOR無明顯變化。(P0.05)結(jié)論:1,25-(OH)2D3通過抑制HSC-T6的增殖并誘導(dǎo)其凋亡,從而發(fā)揮抗肝纖維化作用,可能是通過調(diào)控PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路來完成。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.2

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