本文關(guān)鍵詞：原發(fā)性膽汁性肝硬化血清代謝物組的核磁共振氫譜初步研究

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【摘要】：[研究目的]采用氫譜核磁共振(~1H-NMR)檢測并比較原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、慢性乙型病毒性肝炎肝硬化(HBV肝硬化)、酒精性肝硬化患者與正常對照組的血清代謝物,分析對比AMA陽性、AMA陰性的PBC患者血清代謝物,篩選差異性表達(dá)的生物標(biāo)志物,構(gòu)建血清代謝物組的診斷模型,探索能早期診斷PBC并與不同原因肝硬化鑒別的特異性血清代謝物,為PBC發(fā)病機(jī)制的研究提供重要的科學(xué)依據(jù)。[研究方法]1.病例篩選：選取2015年4月-2016年1月在昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院肝膽胰內(nèi)科住院經(jīng)臨床、影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查或經(jīng)肝活檢病理檢查確診的肝硬化患者,同時(shí),選取本院體檢中心同期采樣的健康志愿者作為正常對照組,所有受試者均符合研究的納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn),均簽署知情同意書。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。2.實(shí)驗(yàn)方法：采用~1H-NMR對20例PBC、20例HBV肝硬化、20例酒精性肝硬化患者和20例正常對照組進(jìn)行檢測,以及對AMA陽性和AMA陰性的PBC患者檢測獲得~1H-NMR圖譜,結(jié)合主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)方法對~1H-NMR圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,創(chuàng)建診斷模型,根據(jù)OPLS-DA模型的相關(guān)系數(shù)(p(corr))、VIP值及非配對t檢驗(yàn),初步篩選出正常組與三組肝硬化之間以及AMA陽性和AMA陰性的PBC患者之間血清差異性代謝物。[結(jié)果]正常組與PBC組(CP組)、正常組與酒精性肝硬化組(CA組)、正常組與HBV肝硬化組(CH組)的PCA模型累積解釋率R2Xcum分別為60.8%、48.8%、60.0%,結(jié)果顯示的小分子代謝物有較明顯差別,樣品的分布和離散趨勢均較好。進(jìn)一步創(chuàng)建OPLS-DA模型,經(jīng)交叉驗(yàn)證和方差分析(CV-ANOVA)驗(yàn)證后均提示三組的OPLS-DA模型具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。①CP組的OPLS-DA模型能顯著區(qū)分PBC組與正常對照組,模型解釋能力和預(yù)測能力分別為R2cum=0.819, Q2cum= 0.448 04, p= 0.0293 0.05.初步篩選出4個(gè)差異性代謝物,PBC組患者血清中的谷氨酰胺(Glutamine, Gln)濃度較正常組明顯下降,葉酸(Folic acid)、尿刊酸(Urocanic acid, UCA)、4-乙基苯甲酸(4-Ethylbenzoic acid)濃度較正常對照組明顯升高。②CA組的OPLS-DA模型能顯著區(qū)分酒精性肝硬化組與正常對照組,模型質(zhì)量參數(shù)分別為的Q2cum= 0.877 04, R2cum=0.685, p=1.22×10-6,遠(yuǎn)小于0.05,初步篩選出10個(gè)差異性代謝物,在酒精性肝硬化組血清中,左型精氨酸、甲基戊二酸、乙醛、丙二酸較正常組明顯降低,而苯乙尿酸、肌氨酸酐、L-乙�；鈮A、肌苷、3-羥苯基丙酸、酪氨酸較正常組明顯升高。③CH組OPLS-DA模型能顯著區(qū)分HBV肝硬化組與正常對照組,模型質(zhì)量參數(shù)分別為Q2cum= 0.493 04, R2cum=0.593, p= 1.69X 10~(-4),遠(yuǎn)小于0.05。初步篩選出5個(gè)差異性代謝物,在HBV肝硬化組血清中,1-甲基腺嘌呤較正常組明顯降低,而1-甲基組胺、葡萄糖、L-乙�；鈮A、尿刊酸較正常組明顯升高。④PBC組與酒精性肝硬化組、PBC組與HBV肝硬化組、HBV肝硬化組與酒精性肝硬化組的PCA模型顯示無明顯分離趨勢。進(jìn)一步創(chuàng)建的OPLS-DA模型均無正交組分,經(jīng)驗(yàn)證后表明模型無效,不能有效區(qū)分以上三組肝硬化。⑤PBC的／AMA-M2陽性與AMA-M2陰性組的PCA得分圖顯示兩組無明顯分離趨勢,累計(jì)解釋率R2Xcum=0.809.進(jìn)一步的OPLS-DA模型分析,它們均無正交組分,經(jīng)交叉驗(yàn)證(CV)和方差分析(ANOVA)驗(yàn)證結(jié)果為：Q2cum= 0.0103 0.4, R2cum=0.183, p= 0.304 0.05,表明該OPLS-DA模型無效,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,不能有效區(qū)分AMA-M2陽性與陰性PBC組。[結(jié)論]1、采用~1H-NMR結(jié)合模式識別分析方法,均能有效區(qū)分健康對照組與三組肝硬化(PBC、HBV肝硬化、酒精性肝硬化患者),差異性表達(dá)的生物標(biāo)志物均有助于研究PBC等三組不同原因肝硬化的發(fā)病機(jī)制及病情進(jìn)展。2、血清谷氨酰胺、葉酸可能為PBC潛在的特異性生物標(biāo)志物,可能與PBC的免疫損傷機(jī)制及預(yù)后發(fā)展有密切聯(lián)系。3、~1H-NMR技術(shù)結(jié)合模式識別分析方法,不能有效區(qū)分PBC的AMA-M2陽性與陰性組患者,診斷模型不能有效鑒別三組肝硬化,考慮樣本數(shù)量有限及實(shí)驗(yàn)操作誤差等。4、~1H-NMR分析的OPLS-DA診斷模型有望成為一種新的方法,有助于研究各型肝硬化的發(fā)病機(jī)制、病情預(yù)后情況。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575.22

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本文編號：1178592