本文關(guān)鍵詞：ConA誘導(dǎo)肝衰竭中肝臟巨噬細(xì)胞調(diào)控分子機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景與目的 肝衰竭是一類起病較急且病情嚴(yán)重的肝臟疾病,它會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞的大量死亡,最終引起多個(gè)器官的功能失調(diào)和衰竭。它的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,主要包括直接的肝臟損傷和不同病原刺激所引起的免疫調(diào)節(jié)損傷兩部分。而固有免疫調(diào)節(jié)引起的損傷在肝衰竭中發(fā)生的很早,因此是肝衰竭發(fā)生的重要原因之一。肝臟巨噬細(xì)胞是一類定植于肝臟中的特殊巨噬細(xì)胞,它是固有免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)中的重要組成部分,在許多肝臟疾病所引起的肝臟炎癥中具有重要調(diào)節(jié)的作用。然而,肝衰竭發(fā)病過(guò)程中,肝臟巨噬細(xì)胞的具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明了。本課題旨在研究肝衰竭早期,肝臟巨噬細(xì)胞中免疫狀態(tài)改變對(duì)肝衰竭發(fā)病影響,闡明促炎因子IL-1β的產(chǎn)生原因及作用,探究肝臟巨噬細(xì)胞中相關(guān)microRNA分子對(duì)肝衰竭早期肝臟巨噬細(xì)胞的調(diào)控作用,從而進(jìn)一步理解肝衰竭中固有免疫損傷調(diào)節(jié)的具體機(jī)制,為尋求有效治療方法提供理論依據(jù)。研究方法1.肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞免疫狀態(tài)改變的影響和產(chǎn)生IL-1p的原因1.1肝臟巨噬細(xì)胞免疫狀態(tài)動(dòng)態(tài)變化：通過(guò)ConA處理建立小鼠肝衰竭模型,在ConA處理1,3,6小時(shí)后,分離出小鼠肝臟巨噬細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)M1型代表分子IL-1β,M2型代表分子Argl、Mrc2的mRNA表達(dá)水平。1.2IL-1β的產(chǎn)生原因：在ConA處理1,3,6小時(shí)后,分離出小鼠肝臟巨噬細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)炎性小體分子AIM2的mRNA表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)AIM2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。分離正常小鼠的肝臟巨噬細(xì)胞,轉(zhuǎn)染AIM2-siRNA及對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照,ConA (5μg/ml,下同)刺激1,3,6小時(shí)后,ELISA檢測(cè)IL-1β的表達(dá)水平。 2.肝衰竭早期階段,相關(guān)microRNA分子調(diào)控肝臟巨噬細(xì)胞的機(jī)制研究 2.1篩選合適的microRNA:在ConA處理1,3,6小時(shí)后,分離出小鼠肝臟巨噬細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)microRNA-155和microRNA-223的表達(dá)水平。 2.2microRNA-223與IL-1β的關(guān)系：分離正常小鼠的肝臟巨噬細(xì)胞,分別轉(zhuǎn)染microRNA-223模擬物和microRNA-223抑制子及對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照,ConA刺激1,3,6小時(shí)后,ELISA檢測(cè)IL-1β的表達(dá)水平 2.3microRNA-223與AIM2的關(guān)系：分離正常小鼠的肝臟巨噬細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染microRNA-223模擬物和microRNA-223抑制子及對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照：ConA刺激1,3,6小時(shí)后,RT-PCR檢測(cè)炎性小體分子AIM2的mRNA表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)AIM2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。 轉(zhuǎn)染AIM2-siRNA及對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照,ConA刺激1,3,6小時(shí)后,RT-PCR檢測(cè)microRNA-223的表達(dá)水平。共轉(zhuǎn)染熒光報(bào)告質(zhì)粒,空質(zhì)粒和microRNA-223及對(duì)應(yīng)的陰性對(duì)照,檢測(cè)熒光的強(qiáng)度值。 研究結(jié)果 1.肝臟巨噬細(xì)胞免疫狀態(tài)動(dòng)態(tài)變化：肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞活化后呈現(xiàn)出免疫狀態(tài)的動(dòng)態(tài)改變。由促炎狀態(tài)轉(zhuǎn)為抑炎狀態(tài),最終又轉(zhuǎn)為促炎狀態(tài)的表現(xiàn)。 2.IL-1β的產(chǎn)生原因：肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞內(nèi)的IL-1β的產(chǎn)生與炎性小體分子AIM2有關(guān)。AIM2的表達(dá)被siRNA抑制后,Il-1β的產(chǎn)生量明顯減少。 3. microRNA-223與IL-1β的關(guān)系：肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞內(nèi)microRNA-223能抑制IL-1β的產(chǎn)生。MicroRNA-223過(guò)表達(dá)后,IL-1β的產(chǎn)生明顯減少；microRNA-223被抑制后,IL-1β的產(chǎn)生明顯增多。 4. microRNA-223與AIM2的關(guān)系：肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞內(nèi)microRNA-223能抑制AIM2的表達(dá)。MicroRNA-223過(guò)表達(dá)后,AIM2的表達(dá)明顯下降；microRNA-223被抑制后,AIM2的表達(dá)明顯升高。AIM2的表達(dá)被siRNA抑制后,microRNA-223的表達(dá)沒(méi)有變化。熒光報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果顯示AIM2不是microRNA-223的直接靶點(diǎn)。 研究結(jié)論 1.肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞活化后免疫狀態(tài)的改變,產(chǎn)生大量的促炎因子IL-1β影響肝衰竭的發(fā)生。 2.肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞IL-1β的產(chǎn)生與AIM2有關(guān)。 3.肝衰竭早期階段,肝臟巨噬細(xì)胞中microRNA-223能抑制肝臟巨噬細(xì)胞中AIM2的表達(dá)從而阻礙促炎因子IL-1β的產(chǎn)生并影響肝臟巨噬細(xì)胞活化后免疫狀態(tài)的改變；但AIM2不是它的直接靶位。microRNA-223可能會(huì)成為有效治療肝衰竭的潛在分子
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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本文編號(hào)：1178277