本文關(guān)鍵詞：青藤堿對體外人肝星狀細(xì)胞和小鼠肝纖維化影響的研究

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【摘要】：背景：肝纖維化(HF)是多種慢性肝臟疾病進(jìn)展為肝硬化的必經(jīng)病理過程,是由于肝臟內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)生成增多,降解減少,代謝失衡大量沉積而形成。研究表明肝星狀細(xì)胞(HSC)是纖維化肝臟ECM的主要來源,轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGF-β1)在促進(jìn)HSC活化,增殖和產(chǎn)生ECM過程中起重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道高劑量的青藤堿(SN)能夠顯著下調(diào)腎小管上皮細(xì)胞α-平滑肌激動蛋白(a-SMA)和TGF-β1表達(dá),抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,起到減輕腎間質(zhì)纖維化的作用。但對HF過程中TGF-β1和HSC的影響卻鮮有報(bào)道。目的：本課題旨在探討SN對體外培養(yǎng)的人HSC (LX-2)增殖、凋亡及CCL4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化的影響。方法：(1)體外實(shí)驗(yàn)：使用不同濃度(0.4、0.8、1.6、3.2、6.4mM)的SN溶液處理LX-2細(xì)胞12和24小時后,分別用MTS法和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的增殖和凋亡變化；western blot檢測細(xì)胞中凋亡相關(guān)分子Bcl-2和Bax表達(dá)變化。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：40只雄性C57BL/6小鼠,隨機(jī)分為正常對照組,肝纖維化模型組,SN干預(yù)組(低劑量組和高劑量組),每組10只,正常對照組給予橄欖油溶液5ml/kg ip,其余各組給予10%的四氯化碳橄欖油混合液5ml/kg腹腔注射,2次/周,共6周,從第5周開始對照組和模型組給予生理鹽水灌胃,干預(yù)組分別給予不同劑量的SN溶液灌胃,造模結(jié)束后留取肝組織樣本,檢測肝組織中羥脯氨酸的含量；western blot檢測肝組織中Ⅰ型膠原,TGF-β1表達(dá)變化；肝組織經(jīng)HE和Masson染色后觀察各組肝臟組織的炎癥和纖維化程度。結(jié)果：(1)體外實(shí)驗(yàn)：MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SN能抑制LX-2的增殖并具有劑量依賴效應(yīng)；流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SN能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡比例增加,當(dāng)劑量為3.2mM時有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05); western blot實(shí)驗(yàn)顯示1.6和3.2mM的SN均能減少LX-2細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)(P0.05),均增加Bax的表達(dá),當(dāng)濃度為3.2mM時更加明顯(P0.05), Bcl-2/Bax比值顯著降低(P0.01)。(2)HF模型組和正常對照組相比：小鼠肝組織Ⅰ型膠原、羥脯氨酸含量和TGF-β1表達(dá)均增加(P0.05)；肝組織HE染色顯示肝細(xì)胞壞死較重,炎性細(xì)胞浸潤較多,Masson染色顯示膠原沉積增加。SN干預(yù)組和模型組相比：肝組織羥脯氨酸含量減少,Ⅰ型膠原、TGF-β1表達(dá)下降,其中高劑量干預(yù)組Ⅰ型膠原、TGF-β1下降較為明顯(P0.05)；組織HE染色顯示肝細(xì)胞壞死減輕,Masson染色顯示膠原沉積減少。結(jié)論：(1)SN可以抑制體外培養(yǎng)的LX-2細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡增加；(2)SN可以減緩小鼠肝組織纖維化進(jìn)程,其機(jī)制可能與SN能夠下調(diào)TGF-β1表達(dá),減少HSC活化,膠原生成并誘導(dǎo)HSC凋亡增加有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 王宇,賈繼東;水飛薊素的抗肝臟纖維化作用及其機(jī)制[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年17期

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本文編號：1159952