本文關(guān)鍵詞：大鼠肝再生中Fcgr2a啟動子區(qū)甲基化變化和作用研究

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【摘要】：肝臟是人和動物體內(nèi)負責代謝的樞紐器官,具有強大的再生能力[1],其具體調(diào)控機制是再生醫(yī)學領(lǐng)域研究的熱點。在正常條件下,絕大多數(shù)肝細胞處于靜息狀態(tài),然而當肝臟受到創(chuàng)傷、切除、壞死等肝損傷刺激后,會引發(fā)一系列病理生理過程,這種現(xiàn)象被稱為肝再生(liver regeneration,LR)。該過程是由肝臟各種細胞和各種肝外器官協(xié)同配合完成的,涉及到復(fù)雜的分子機制。肝再生過程為活體肝移植(living donor liver transplantation,LDLT)和術(shù)后修復(fù)提供了重要的研究思路。DNA甲基化是一種廣泛存在于真核生物和原核生物中的表觀遺傳現(xiàn)象,本篇我們主要研究真核生物體內(nèi)的DNA甲基化現(xiàn)象。在真核生物體內(nèi),S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將甲基基團轉(zhuǎn)移到胞嘧啶上,這個胞嘧啶一般位于CpG雙核苷酸上,這一過程是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化完成的。在啟動子區(qū)域和基因調(diào)節(jié)區(qū)域,CpG島的甲基化程度降低,其基因的表達通常會升高,反之,GpG島的甲基化程度升高,其基因的表達多表現(xiàn)為降低。另外這兩個區(qū)域的甲基化程度對于細胞分化也起著重要的作用[2,3]。應(yīng)用第二代測序技術(shù)(Next Generation Sequencing,NGS)對清晰闡述基因組中甲基化的分布模式,深入了解生物發(fā)育及其發(fā)病機制具有及其重要的意義,這是僅僅靠小范圍測量CpG位點遠遠不能達到的。因此我們使用了甲基化基因的免疫共沉淀測序(Methylated DNA Immunoprecipitation Sequencing,MeDIP-seq)技術(shù)檢測肝再生早期0h、2h、6h甲基化信號源的分布,發(fā)現(xiàn)其廣泛分布于每一條染色體上。且有76%-80%的讀長序列(reads)可以比對上參考基因組。進一步分析基因組水平的甲基化基因的種類和數(shù)量,發(fā)現(xiàn)在大鼠肝再生的2h和6h,5207個基因的甲基化水平高于或低于對照2倍,稱為有意義甲基化變化基因,與相應(yīng)對照組比較后,得到了114個肝再生相關(guān)的甲基化基因(FDR≤0.05)。其中,在2h差異的有90個基因,6h差異的有71個基因。使用GO和IPA軟件分析上述114個肝再生相關(guān)的甲基化基因,發(fā)現(xiàn)有18個甲基化基因參與了40條肝再生相關(guān)的信號通路,52個甲基化基因參與37種生理活動。為了檢驗上述篩選方法是否正確,分析是否有效,我們采取了亞硫酸氫鹽測序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)方法對肝再生相關(guān)甲基化基因Fcgr2a的啟動子區(qū)域做進一步實驗驗證。結(jié)果表明,擴增片段共包括24個CpG位點,其中有15個(CpG 5-CpG 19)位于CpG島上。重點分析CpG島發(fā)現(xiàn),PH 2h的甲基化程度顯著高于對照,其中CpG位點9、12、13、16、17差異極顯著。與此同時,我們利用qRT-PCR技術(shù)檢測其mRNA在肝再生中的表達動態(tài),利用Western Blot技術(shù)檢測其蛋白表達動態(tài)。結(jié)果表明,mRNA在PH 2h-12h和PH36h的表達量顯著低于對照。其蛋白表達量也于PH 2h開始逐漸下降,并在PH 6h達到最低,這與mRNA的表達趨勢一致。這種變化可能與該基因啟動子區(qū)CpG島在PH 2h的甲基化程度顯著升高有關(guān)。
【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韓淑媛;黃志強;劉永雄;于國;咎世明;張曙光;李暉;;大鼠肝部分切除后肝再生過程的動態(tài)觀察[J];傳染病信息;1995年02期

2 唐天勛,樊克武,井清源;大鼠肝、胰十二指腸聯(lián)合切除對殘肝再生的影響[J];南京醫(yī)科大學學報;2002年01期

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4 王閣;肝再生信號轉(zhuǎn)錄調(diào)控進展[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2003年04期

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6 許翠萍,韓德五,張楊,趙元昌,尹鐳;肝部分切除大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥與肝再生的關(guān)系[J];世界華人消化雜志;2004年12期

7 李瀚e，

本文編號：1156447