本文關(guān)鍵詞：連接黏附分子A在促進(jìn)MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機(jī)制

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【摘要】：研究背景肝臟是人體內(nèi)重要的器官,具有代謝、合成、儲存等多種生理功能,并且具有強(qiáng)大的再生功能。由于其獨(dú)特的功能,肝臟易受藥物、毒素、酒精、化學(xué)物質(zhì)等造成的損害,引起功能障礙和再生能力喪失。目前各種急慢性肝臟疾病已是影響人類健康的重要原因之一,特別是終末期肝疾病尚缺乏有效地治療手段。間充質(zhì)干細(xì)胞是一類來源廣泛的成體干細(xì)胞,能夠分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等,并且具有自我更新的潛能。目前間充質(zhì)干細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于肝臟、肺、腎臟等多種組織損傷和移植物抗宿主病等多種疾病的治療,其作用機(jī)制可能包括轉(zhuǎn)分化、免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制、抑制炎癥、分泌細(xì)胞因子等。間充質(zhì)干細(xì)胞向損傷部位的靶向遷移對其發(fā)揮作用非常重要,因此提高細(xì)胞移植后損傷部位間充質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量是提高治療效果的重要手段。連接黏附分子A是脊柱動物細(xì)胞中高度保守的一類連接分子,其獨(dú)特的跨膜結(jié)構(gòu)使其能夠發(fā)生同源二聚化,參與緊密連接的形成,另外還具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移、信號傳導(dǎo)的功能。前期研究發(fā)現(xiàn),通過上調(diào)間充質(zhì)干細(xì)胞的連接粘附分子JAM-A表達(dá),可促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞定向遷移到發(fā)育不成熟的毛囊組織,參與毛囊結(jié)構(gòu)的重建,增強(qiáng)裸鼠的毛發(fā)再生�；谝陨涎芯�,我們通過分離、鑒定、擴(kuò)增間充質(zhì)干細(xì)胞,利用病毒載體構(gòu)建連接黏附分子過表達(dá)的間充質(zhì)干細(xì)胞,研究JAM-A在促進(jìn)MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機(jī)制。第一部分人早胚間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定與培養(yǎng)研究目的：利用間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長的特性,從早期流產(chǎn)胚胎中分離出間充質(zhì)干細(xì)胞,進(jìn)行鑒定,并進(jìn)行傳代培養(yǎng)和擴(kuò)增,為后續(xù)進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。研究方法：利用貼壁培養(yǎng)方法獲取原代間充質(zhì)干細(xì)胞,通過形態(tài)學(xué)、免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面陽性和陰性的細(xì)胞標(biāo)志以及分化潛能,對細(xì)胞進(jìn)行鑒定,并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。研究結(jié)果：貼壁培養(yǎng)法可獲得間充質(zhì)干細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈紡錘形成纖維細(xì)胞狀,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞均陽性表達(dá)CD29(82.89±2.35%)、CD44 (91.95±1.11%)、CD90(92.90±0.97%),造血譜系特異性標(biāo)志CD34和CD45的陽性率均小于1%,分別為(0.65±0.21%)和(0.77±0.14%),免疫熒光結(jié)果顯示：MSC陽性表達(dá)表達(dá)CD29、CD44、 CD105。第二部分連接黏附分子JAM-A過表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建研究目的：利用病毒載體構(gòu)建JAM-A過表達(dá)的MSC系統(tǒng)研究方法：利用cDNA文庫獲取目的基因JAM-A,并進(jìn)行擴(kuò)增,利用pGC-FU慢病毒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒。再將重組載體轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝,并檢測病毒滴度。選擇合適條件進(jìn)行MSC的病毒感染,并檢測JAM-A蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果：重組質(zhì)粒測序結(jié)果正確,病毒滴度2.00E+7 TU/ml,在MOI值為50時可獲得理想的感染效率,細(xì)胞感染率均在90%以上。重組質(zhì)粒在感染MSC后穩(wěn)定表達(dá),WB結(jié)果顯示JAM-AOV-MSC組JAM-A蛋白表達(dá)水平較MSC組顯著升高。第三部分JAM-A在促進(jìn)MSC修復(fù)CCl4肝損傷中的作用及其機(jī)制研究目的：研究JAM-A在促進(jìn)MSC修復(fù)肝損傷中的作用,并探討其可能機(jī)制。研究方法：制備CCl4誘發(fā)小鼠肝損傷,使用CD-DiI標(biāo)記MSC,通過腹腔注射方式進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞移植,檢測小鼠肝臟形態(tài)學(xué)、血清ALT、AST水平等肝損傷指標(biāo),利用免疫組織化學(xué)和免疫組織熒光技術(shù)檢測肝臟JAM-A的表達(dá)和分布和肝損傷時炎癥細(xì)胞浸潤,在體外進(jìn)行細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)觀察JAM-A對細(xì)胞粘附能力的影響,并觀察JAM-A對MSC分泌作用的影響。研究結(jié)論：CM-Dil可安全穩(wěn)定的標(biāo)記MSC;JAM-A過表達(dá)可促進(jìn)MSC對肝損傷的保護(hù)作用：降低血清ALT、AST水平、減少細(xì)胞壞死、減少炎癥細(xì)胞浸潤；肝損傷后JAM-A在血管內(nèi)皮的表達(dá)增加；JAM-A可增強(qiáng)MSC的粘附能力,促進(jìn)MSC抑炎因子分泌作用。
【關(guān)鍵詞】：連接黏附分子A 間充質(zhì)干細(xì)胞 肝損傷 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞表10-12
• 第一部分 人早胚間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定與培養(yǎng)12-26
• 引言12-14
• 材料和方法14-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-23
• 討論23-26
• 第二部分 連接黏附分子JAM-A過表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建26-54
• 引言26-28
• 材料和方法28-42
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-49
• 討論49-54
• 第三部分 連接黏附分子JAM-A在MSC修復(fù)肝損傷中的作用及機(jī)制54-77
• 引言54-56
• 材料和方法56-65
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-74
• 討論74-77
• 綜述77-86
• 參考文獻(xiàn)86-99
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況99-101
• 致謝101-102

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5 記者　陳建強(qiáng);首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫在津建成[N];光明日報;2006年

6 記者　馮國梧;細(xì)胞產(chǎn)品國家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日報;2007年

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9 馮國梧;全球首個臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫規(guī)�；\(yùn)營[N];科技日報;2008年

10 劉瑩清;全球首個臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫泰達(dá)規(guī)模運(yùn)營[N];北方經(jīng)濟(jì)時報;2008年

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本文編號：1120830