本文關(guān)鍵詞：靶向脂質(zhì)納泡在肝臟缺血再灌注損傷中的分子顯像實驗研究

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【摘要】：目的構(gòu)建一種新型的納米級靶向超聲造影劑,考察其體外尋靶特性及體內(nèi)造影增強效果,評估超聲分子成像技術(shù)在早期診斷肝臟缺血再灌注損傷病變的可行性及可重復(fù)性。方法應(yīng)用薄膜水化和超聲振蕩法制備普通的脂質(zhì)納泡,然后利用親和素-生物素連接法,將生物素化的ICAM-1抗體靶向連接于生物素化的脂質(zhì)納泡上,制備載ICAM-1抗體的靶向脂質(zhì)納泡。培養(yǎng)原代分離的人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞(HHSEC),建立低溫缺氧／復(fù)氧(H/R)模型,在激光共聚焦顯微鏡下觀察攜帶ICAM-1抗體的靶向脂質(zhì)納泡體外尋靶與細(xì)胞的結(jié)合情況。按照Pringle’s法建立兔肝臟缺血再灌注損傷動物模型(I/R組),并設(shè)假手術(shù)組(SO組)作為對照。建模成功后,行肝臟超聲造影檢查,應(yīng)用QLAB軟件獲取感興趣區(qū)域(ROI)肝臟血流參數(shù)：峰值強度(PI)、達(dá)峰時間(time to peak)及增強持續(xù)時間(time of duration),定量評價靶向脂質(zhì)納泡超聲造影的顯影效果、穩(wěn)定性及造影參數(shù)的可靠性。結(jié)果自制靶向脂質(zhì)納泡粒徑約148.15±3975nm, Zeta電位-28.4±7.9 mV,濃度(3.6～7.4)×109個/ml,激光共聚焦顯微鏡下觀察靶向脂質(zhì)納泡的綠色熒光較好地粘附在H/R組人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞表面。肝臟IRI后,以細(xì)胞凋亡為主。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞凋亡比例17.53±1.19%,肝細(xì)胞凋亡比例5.61±0.85%。IRI后,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1顯著表達(dá),且與ALT、LDH呈線性相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為r=0.812,r=0.854。靶向脂質(zhì)納泡體內(nèi)顯影效果穩(wěn)定,組內(nèi)相關(guān)系數(shù)ICC=0.938,可重復(fù)性好。超聲造影測量參數(shù)選取肝包膜下3cm深度作為ROI區(qū)域,變異性最小,CV 3.9%。兩名觀測者在相同條件下測量結(jié)果一致性好,ICC=0.948,信度較高。動物體內(nèi)超聲造影顯示,I/R組靶向脂質(zhì)納泡PI及增強持續(xù)時間明顯高于普通納泡,達(dá)峰時間明顯提前；靶向脂質(zhì)納泡的PI及增強持續(xù)時間在I/R組明顯高于SO組。I/R組靶向脂質(zhì)納泡PI與肝臟IRI病理Suzuki's評分呈正相關(guān),秩相關(guān)系數(shù)rs=0.648;與IRI后肝內(nèi)ICAM-1表達(dá)呈線性相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.706。結(jié)論自制的靶向脂質(zhì)納泡粒徑小而均一,性質(zhì)穩(wěn)定,與抗體結(jié)合率高,體外細(xì)胞靶向結(jié)合實驗尋靶能力良好。與普通脂質(zhì)納泡相比,靶向脂質(zhì)納泡超聲造影具有較好的特異性、高效性及穩(wěn)定性,重復(fù)性好,可以從分子水平,無創(chuàng)、定量評估肝臟缺血再灌注損傷,提高了超聲分子成像技術(shù)的診斷能力,具有可行性。
【關(guān)鍵詞】：超聲分子成像 靶向超聲造影劑 納泡 缺血再灌注損傷 細(xì)胞間粘附分子-1
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中英文縮略語對照表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 第一部分 載ICAM-1抗體靶向脂質(zhì)納泡制備及物理性質(zhì)檢測15-23
• 1 材料與方法15-18
• 2 結(jié)果18-20
• 3 討論20-22
• 4 小結(jié)22-23
• 第二部分 載ICAM-1抗體靶向脂質(zhì)納泡細(xì)胞結(jié)合實驗23-35
• 第一節(jié) 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/再給氧模型建立23-29
• 1 材料與方法23-27
• 2 結(jié)果27-29
• 第二節(jié) 靶向脂質(zhì)納泡細(xì)胞尋靶實驗研究29-35
• 1 材料與方法29-31
• 2 結(jié)果31-32
• 3 討論32-34
• 4 小結(jié)34-35
• 第三部分 載ICAM-1抗體靶向脂質(zhì)納泡體內(nèi)顯影效果及重復(fù)性研究35-57
• 第一節(jié) 載ICAM-1抗體靶向脂質(zhì)納泡體內(nèi)顯影重復(fù)性研究35-40
• 1 材料與方法35-38
• 2 結(jié)果38-40
• 第二節(jié) 載ICAM-1抗體靶向脂質(zhì)納泡體內(nèi)顯影效果研究40-57
• 1 材料與方法40-43
• 2 結(jié)果43-53
• 3 討論53-56
• 4 小結(jié)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 文獻(xiàn)綜述61-83
• 參考文獻(xiàn)77-83
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況83-84
• 致謝84

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