本文關鍵詞：靶向脂質納泡在肝臟缺血再灌注損傷中的分子顯像實驗研究

  更多相關文章： 超聲分子成像 靶向超聲造影劑 納泡 缺血再灌注損傷 細胞間粘附分子-1

【摘要】：目的構建一種新型的納米級靶向超聲造影劑,考察其體外尋靶特性及體內造影增強效果,評估超聲分子成像技術在早期診斷肝臟缺血再灌注損傷病變的可行性及可重復性。方法應用薄膜水化和超聲振蕩法制備普通的脂質納泡,然后利用親和素-生物素連接法,將生物素化的ICAM-1抗體靶向連接于生物素化的脂質納泡上,制備載ICAM-1抗體的靶向脂質納泡。培養(yǎng)原代分離的人肝竇內皮細胞(HHSEC),建立低溫缺氧／復氧(H/R)模型,在激光共聚焦顯微鏡下觀察攜帶ICAM-1抗體的靶向脂質納泡體外尋靶與細胞的結合情況。按照Pringle’s法建立兔肝臟缺血再灌注損傷動物模型(I/R組),并設假手術組(SO組)作為對照。建模成功后,行肝臟超聲造影檢查,應用QLAB軟件獲取感興趣區(qū)域(ROI)肝臟血流參數(shù)：峰值強度(PI)、達峰時間(time to peak)及增強持續(xù)時間(time of duration),定量評價靶向脂質納泡超聲造影的顯影效果、穩(wěn)定性及造影參數(shù)的可靠性。結果自制靶向脂質納泡粒徑約148.15±3975nm, Zeta電位-28.4±7.9 mV,濃度(3.6～7.4)×109個/ml,激光共聚焦顯微鏡下觀察靶向脂質納泡的綠色熒光較好地粘附在H/R組人肝竇內皮細胞表面。肝臟IRI后,以細胞凋亡為主。肝竇內皮細胞凋亡比例17.53±1.19%,肝細胞凋亡比例5.61±0.85%。IRI后,肝竇內皮細胞ICAM-1顯著表達,且與ALT、LDH呈線性相關,相關系數(shù)分別為r=0.812,r=0.854。靶向脂質納泡體內顯影效果穩(wěn)定,組內相關系數(shù)ICC=0.938,可重復性好。超聲造影測量參數(shù)選取肝包膜下3cm深度作為ROI區(qū)域,變異性最小,CV 3.9%。兩名觀測者在相同條件下測量結果一致性好,ICC=0.948,信度較高。動物體內超聲造影顯示,I/R組靶向脂質納泡PI及增強持續(xù)時間明顯高于普通納泡,達峰時間明顯提前；靶向脂質納泡的PI及增強持續(xù)時間在I/R組明顯高于SO組。I/R組靶向脂質納泡PI與肝臟IRI病理Suzuki's評分呈正相關,秩相關系數(shù)rs=0.648;與IRI后肝內ICAM-1表達呈線性相關,相關系數(shù)r=0.706。結論自制的靶向脂質納泡粒徑小而均一,性質穩(wěn)定,與抗體結合率高,體外細胞靶向結合實驗尋靶能力良好。與普通脂質納泡相比,靶向脂質納泡超聲造影具有較好的特異性、高效性及穩(wěn)定性,重復性好,可以從分子水平,無創(chuàng)、定量評估肝臟缺血再灌注損傷,提高了超聲分子成像技術的診斷能力,具有可行性。
【關鍵詞】：超聲分子成像 靶向超聲造影劑 納泡 缺血再灌注損傷 細胞間粘附分子-1
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中英文縮略語對照表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-15
• 第一部分 載ICAM-1抗體靶向脂質納泡制備及物理性質檢測15-23
• 1 材料與方法15-18
• 2 結果18-20
• 3 討論20-22
• 4 小結22-23
• 第二部分 載ICAM-1抗體靶向脂質納泡細胞結合實驗23-35
• 第一節(jié) 肝竇內皮細胞缺氧/再給氧模型建立23-29
• 1 材料與方法23-27
• 2 結果27-29
• 第二節(jié) 靶向脂質納泡細胞尋靶實驗研究29-35
• 1 材料與方法29-31
• 2 結果31-32
• 3 討論32-34
• 4 小結34-35
• 第三部分 載ICAM-1抗體靶向脂質納泡體內顯影效果及重復性研究35-57
• 第一節(jié) 載ICAM-1抗體靶向脂質納泡體內顯影重復性研究35-40
• 1 材料與方法35-38
• 2 結果38-40
• 第二節(jié) 載ICAM-1抗體靶向脂質納泡體內顯影效果研究40-57
• 1 材料與方法40-43
• 2 結果43-53
• 3 討論53-56
• 4 小結56-57
• 參考文獻57-61
• 文獻綜述61-83
• 參考文獻77-83
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況83-84
• 致謝84

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