本文關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞損傷條件培養(yǎng)基對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞肝向分化的促進(jìn)作用

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【摘要】：目的:制備肝細(xì)胞損傷條件培養(yǎng)基(CM),體外模擬損傷組織微環(huán)境,探討其對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)肝向分化的作用。方法:取1周齡乳鼠,經(jīng)差時(shí)貼壁和差速梯度法結(jié)合優(yōu)化梯度離心和貼壁換液時(shí)間分離培養(yǎng)BMMSCs。取6~8周齡大鼠,腹腔注射60%四氯化碳溶液(0.75mL·kg~(-1))制備肝細(xì)胞損傷組織勻漿上清(CM1)和肝細(xì)胞損傷血清(CM2)。將第3代(P3)BMMSCs隨機(jī)分為0%CM組(對(duì)照組,采用10%FBS L-DMEM培養(yǎng))、10%CM1組、20%CM2組和10%CM1+10%CM2組。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn),免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組BMMSCs表面標(biāo)志物CD105和各組細(xì)胞中白蛋白(ALB)的陽(yáng)性表達(dá)率,油紅O染色法檢測(cè)BMMSCs成脂分化的脂滴形成陽(yáng)性率;RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中甲胎蛋白(AFP)和ALB的表達(dá)水平,糖原染色法檢測(cè)細(xì)胞中糖原合成陽(yáng)性率,鑒定并比較各組BMMSCs肝向分化能力。結(jié)果:骨髓細(xì)胞原代培養(yǎng)72h,貼壁細(xì)胞呈圓形或梭形,鋪滿瓶底時(shí)呈均勻有序的成纖維梭形狀,P3BMMSCs表面標(biāo)志物CD105呈陽(yáng)性表達(dá)。P3BMMSCs經(jīng)地塞米松、胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤和消炎痛(DX+IBMX+IS+ID)聯(lián)合誘導(dǎo)后4d,鏡下可見(jiàn)脂滴形成。P3BMMSCs經(jīng)CM誘導(dǎo)后細(xì)胞中AFP和ALB呈陽(yáng)性表達(dá),細(xì)胞糖原染色呈陽(yáng)性。誘導(dǎo)后7d,含CM成分的3組BMMSCs中均可見(jiàn)細(xì)胞胞漿內(nèi)容物變得豐富,細(xì)胞呈圓形、三角形或肝板樣排列;誘導(dǎo)后7、14和21d,與對(duì)照組比較,含CM成分的3組BMMSCs中ALB陽(yáng)性表達(dá)率均明顯增加(P0.01);10%CM1+10%CM2組BMMSCs中ALB陽(yáng)性表達(dá)率高于10%CM1組和20%CM2組(P0.05)。誘導(dǎo)后7和14d,與對(duì)照組比較,含CM成分的3組BMMSCs中糖原合成陽(yáng)性率均明顯增加(P0.01);10%CM1+10%CM2組BMMSCs中糖原合成陽(yáng)性率高于10%CM1組和20%CM2組(P0.05)。結(jié)論:CM1和CM2可誘導(dǎo)大鼠BMMSCs向肝細(xì)胞分化,在達(dá)到相同誘導(dǎo)作用效果時(shí)所需的CM1和CM2濃度更低;CM1和CM2提供的微環(huán)境更有利于BMMSCs向肝細(xì)胞分化,其誘導(dǎo)細(xì)胞分化效率更高。
【作者單位】： 吉林大學(xué)藥學(xué)院再生醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 條件培養(yǎng)基 細(xì)胞增殖 肝向分化
【基金】：教育部回國(guó)留學(xué)生科研基金資助課題(3C1026613432) 吉林省科技廳基礎(chǔ)研究項(xiàng)目資助課題(3D1106643432)
【分類號(hào)】：R575
【正文快照】： 目前,器官移植是治療肝代謝異�；蚋喂δ芩ソ叩冉K末期肝病患者的有效方案,包括生物人工肝移植和肝細(xì)胞移植,而肝臟或肝細(xì)胞移植因供體來(lái)源有限,限制了其臨床應(yīng)用。因此,獲得高效供體肝系細(xì)胞系越來(lái)越受到人們關(guān)注[1-3]。1987年Friedenstein等[4]首先證實(shí):哺乳動(dòng)物骨髓基質(zhì)中存，

本文編號(hào)：1109395