本文關(guān)鍵詞：胃病患者非幽門螺桿菌螺桿菌（NHPH）感染分析

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【摘要】：幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,簡稱H. pylori或HP)并不是唯一一種能夠定植于人類胃部的螺桿菌。非幽門螺桿菌螺桿菌(gastric non-Helicobacter pylori Helicobacters, NHPH)是由一類通常定植于動物胃部的長螺桿狀革蘭氏陰性菌組成,其感染同樣能夠?qū)е氯祟惗喾N胃部疾病。國外研究報道,0.2-6%的胃病患者能夠檢測到NHPH的存在,但國內(nèi)缺乏人群感染率系統(tǒng)調(diào)查數(shù)據(jù)。本研究擬利用特異PCR對中國胃病患者中NHPH的感染情況進行檢測分析,并對人源和豬源H. suis進行了多位點序列分型(MLST)分析。第一部分：胃病患者非幽門螺桿菌螺桿菌(NHPH)感染分析利用基于尿素酶基因的特異PCR檢測方法對北京地區(qū)1517位快速尿素酶試驗(RUT)陽性患者的胃黏膜活檢組織標本進行了5種NHPH (H. suis, H. bizzozeronii, H.felis, H. salomonis, H. heilmannii sensu strict(s.s.))的檢測。HP的分離培養(yǎng)和特異PCR用于檢測患者HP感染情況。并對浙江地區(qū)202份經(jīng)real-time PCR和特異PCR檢測為HP陰性的胃黏膜標本DNA進行了H. suis的檢測分析。結(jié)果顯示,北京地區(qū)HP陽性胃病患者中NHPH感染率為11.87%(178/1499),遠高于其他國家和地區(qū)。其中H. suis的感染率最高,約為6.94%。其他四種螺桿菌(H. felis, H. bizzozeronii, H. heilmannii s.s和H. salomonis)的感染率分別為2.20%,0.13%,0.07%和2.54%。此外,分析顯示有部分胃病患者同時感染了3種螺桿菌。202份HP陰性標本中共檢測出8份H. suis陽性標本,陽性率為3.96%,顯示HP陰性胃病患者同樣存在較高的H. suis感染率。本研究是在國內(nèi)首次開展對胃病患者中NHPH的感染情況的大樣本綜合分析,發(fā)現(xiàn)胃病患者中NHPH的感染比較普遍,H. suis的感染率明顯高于其他螺桿菌。因此,對胃病患者進行病原診斷時應(yīng)考慮NHPH感染的存在。第二部分：人源和豬源H. suis多位點序列分型(MLST)分析H. suis是一種定植于豬及非人靈長類動物胃部的革蘭氏陰性的人獸共患病原菌,其感染已被證實與人類多種胃部疾病有關(guān)。與豬等動物的直接接觸和肉類消費可能是人感染H. suis的主要傳播途徑。在中國,豬養(yǎng)殖業(yè)及飲食習慣(喜食豬胃等內(nèi)臟)所關(guān)聯(lián)的H. suis感染備受關(guān)注,但缺乏相關(guān)研究。本研究對60份新鮮豬胃標本進行了H. suis感染情況檢測,利用MLST技術(shù)對豬胃中和患者攜帶的H. suis及國外菌株進行遺傳進化關(guān)系分析。結(jié)果顯示,60份豬胃標本中共檢測出20份H. suis陽性,陽性率為33.33%。H. suis MLST分析共發(fā)現(xiàn)了14個新的ST型。人源(2份陽性標本)和豬源(20陽性標本)H. suis分布在3個克隆群內(nèi),親緣關(guān)系相近。國內(nèi)與國外H. suis可分成3個克隆群,且親緣關(guān)系相近,但不同克隆群內(nèi)多數(shù)國內(nèi)菌株能單獨成簇。第三部分：HP克拉霉素耐藥相關(guān)基因23S rRNA檢測分析隨著克拉霉素(CLA)耐藥率的不斷上升,以CLA為組方成分的HP根除方案的根除率不斷下降。HP對CLA耐藥的主要機制是由23S rRNA基因的點突變所致,主要包括A2143G和A2142G/C三種突變類型,但三種點突變在我國的覆蓋率仍缺乏充分的數(shù)據(jù)支持。本研究通過PCR-DNA測序相結(jié)合方法對1086份胃黏膜活檢組織標本進行了23S rRNA突變特征分析。結(jié)果顯示,北京地區(qū)HP 23S rRNA的突變類型以A2143G為主,突變率為66.12%,其次為A2142G (1.48%), A2142C (0.16%)。CLA耐藥菌株中A2143G和A2142G/C 3種常規(guī)突變類型的總突變率為67.76%,仍有32.24%的耐藥菌株未發(fā)生相關(guān)突變,顯示3種常規(guī)突變的檢測對HPCLA耐藥的覆蓋率不足。另外,發(fā)現(xiàn)C1951T和G1933A兩個突變位點僅出現(xiàn)在耐藥菌株中,提示可能與HP的CLA耐藥相關(guān)。第四部分：利用同一份胃黏膜標本進行HP分離培養(yǎng)及CYP2C19基因多態(tài)性檢測的研究若能采用同一塊胃黏膜活檢組織標本在完成HP分離培養(yǎng)的同時進行CYP2C19代謝類型分析,將對完善和推廣HP個體化根除方案具有重要意義。本研究通過PCR-DNA測序相結(jié)合方法在檢測胃病患者CYP2C19基因多態(tài)性時,探索采用同一塊胃黏膜活檢組織標本在完成HP分離培養(yǎng)的同時進行CYP2C19代謝類型分析的可行性。結(jié)果顯示,采用同一塊胃黏膜活檢組織標本,可獲得CYP2C19檢測的100%成功率,HP的分離培養(yǎng)率與本實驗室用整塊胃黏膜標本無明顯差異。結(jié)果表明用同一份胃黏膜標本可同時滿足HP分離培養(yǎng)(和藥敏試驗)及CYP2C19基因多態(tài)性的檢測。
【關(guān)鍵詞】：NHPH H.suis H.pylori 23S rRNA CYP2C19
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R573
【目錄】：

• Abbreviation (縮略詞)5-6
• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 第一部分 胃病患者非幽門螺桿菌螺桿菌(NHPH)感染分析13-26
• 前言13-14
• 材料與方法14-19
• 實驗結(jié)果19-23
• 討論23-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 人源和豬源H.suis多位點序列分型(MLST)分析26-38
• 前言26-27
• 材料與方法27-31
• 實驗結(jié)果31-36
• 討論36-37
• 小結(jié)37-38
• 第三部分 幽門螺桿菌克拉霉素耐藥相關(guān)基因23S rRNA檢測分析38-48
• 前言38-39
• 材料與方法39-42
• 實驗結(jié)果42-45
• 討論45-47
• 小結(jié)47-48
• 第四部分 利用同一份胃黏膜標本進行幽門螺桿菌分離培養(yǎng)及CYP2C19基因多態(tài)性檢測的研究48-58
• 前言48
• 材料與方法48-52
• 實驗結(jié)果52-56
• 討論56-57
• 小結(jié)57-58
• 參考文獻58-70
• 綜述70-84
• 參考文獻75-84
• 在讀期間發(fā)表論文84-85
• 致謝85

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本文編號：1108825