本文關(guān)鍵詞：ω-3多不飽和脂肪酸調(diào)節(jié)腸道菌群平衡緩解NAFLD機(jī)制

  更多相關(guān)文章： ω-3多不飽和脂肪酸 高脂飲食 非酒精性脂肪性肝病 腸道菌群 肝脂肪變性和炎癥

【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是現(xiàn)今發(fā)達(dá)國家和我國發(fā)達(dá)地區(qū)的最常見的慢性肝臟疾病,也是代謝綜合征在肝臟的表征。流行病學(xué)研究分析顯示,富含ω-3多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)的魚油和紫蘇子油可以干預(yù)NAFLD的進(jìn)程,緩解肝損傷和肝炎癥,但其具體機(jī)制尚不完全清楚。近來也有研究表明:ω-3 PUFAs可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡,可能在防止NAFLD炎性損傷過程中發(fā)揮重要作用。目的:高脂高膽固醇膳食飼喂雄性Sprague Dawley(SD)大鼠構(gòu)建NAFLD動(dòng)物模型,研究富含ω-3 PUFA的魚油和紫蘇子油緩解高脂膳食誘導(dǎo)NAFLD進(jìn)程及對(duì)腸道菌群平衡的干預(yù)作用。方法:將40只8-9周齡SD健康雄性大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組,每組10只共四組,大鼠按下面四種飼料配方喂養(yǎng)16周:第一組喂食正常飼料,為正常對(duì)照組(NOR,n=10);第二三四組喂食高脂飼料,分別為高脂模型組(HFD,n=10)、魚油干預(yù)高脂組(FOH,n=10)、紫蘇油干預(yù)高脂組(POH,n=10)。16周后,采集糞便、收集血清,快速摘除肝臟并稱重。用比色法測(cè)定血清中TCH、LDL-C、TG含量,酶法檢測(cè)血清中ALT、AST活力,肝組織標(biāo)本石蠟切片(5μm切片),進(jìn)行HE染色,采用qPCR和western blot技術(shù)檢測(cè)肝組織中IL-1、IL-6、TNF等促炎因子的表達(dá)。采用試劑盒法提取腸道細(xì)菌基因組DNA,利用16S rDNA V4區(qū)序列設(shè)計(jì)引物,雙末端測(cè)序法對(duì)四組腸道微生物進(jìn)行測(cè)序分析。根據(jù)測(cè)序結(jié)果,用qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行驗(yàn)證,基于特異基因的qPCR對(duì)各組腸道微生物Akkermansia和Escherichia的量進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果:肝臟HE染色觀察到富含ω-3 PUFA魚油和紫蘇子油干預(yù)組肝臟脂質(zhì)積累減輕,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少,緩解了炎癥。相比于HFD組,魚油和紫蘇子油干預(yù)組血清中肝功能指示酶ALT和AST活力顯著下降,同時(shí)干預(yù)組中肝組織促炎因子Il-1β,TNF-α,和IL-6等顯著下調(diào)。因此,魚油和紫蘇子油都能改善高脂誘導(dǎo)的肝脂肪變性和炎癥。與正常對(duì)照組比較,高脂喂養(yǎng)顯著增加了腸道中普氏菌(Prevotella)、埃希式桿菌屬(Escherichia)等革蘭氏陰性細(xì)菌的相對(duì)豐度,而魚油和紫蘇子油可以輕微的扭轉(zhuǎn)這趨勢(shì)。TLR4是革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖(LPS)識(shí)別受體,在肝臟細(xì)胞中,高脂組TLR4的表達(dá)是最大的,而干預(yù)組明顯下調(diào)TLR4的表達(dá),相比于HFD組,干預(yù)組血清中LPS濃度顯著下降,這一結(jié)果同樣和腸道微生物變化一致。此外,魚油和紫蘇子油都緩解了高脂喂養(yǎng)動(dòng)物腸道內(nèi)Prevotella和Escherichia的過度生長(zhǎng),并且魚油和紫蘇子油腸道菌群具有相似的組成。與高脂組相比,只有魚油組腸道中減肥菌Akkermansia的相對(duì)豐度增加。結(jié)論:富含DHA/EPA的魚油和富含ALA的紫蘇子油均可緩解高脂所致代謝紊亂,并能調(diào)節(jié)腸道菌群平衡,表明:ω-3 PUFAs可通過減少腸道革蘭氏陰性菌的豐度、抑制革蘭氏陰性菌介導(dǎo)的肝臟炎癥,達(dá)到緩解高脂所致的肝炎癥的效果,這一結(jié)果將有助于我們更好的理解ω-3 PUFAs對(duì)健康的營養(yǎng)價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：ω-3多不飽和脂肪酸 高脂飲食 非酒精性脂肪性肝病 腸道菌群 肝脂肪變性和炎癥
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 1 緒論10-18
• 1.1 非酒精性脂肪肝病及其病理機(jī)制研究進(jìn)展10
• 1.2 NAFLD和腸道菌群之間關(guān)系的研究進(jìn)展10-13
• 1.2.1 NAFLD與腸道菌群10-11
• 1.2.2 NAFLD腸道內(nèi)的重要微生物11-13
• 1.3 ω-3 PUFA與腸道菌群13-14
• 1.3.1 膳食與腸道菌群13
• 1.3.2 ω-3 PUFA緩解炎癥13-14
• 1.4 腸道菌群分子分析技術(shù)14-15
• 1.4.1 16S rDNA基因檢測(cè)技術(shù)的產(chǎn)生與應(yīng)用14-15
• 1.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)15
• 1.5 目的意義和技術(shù)路線15-18
• 1.5.1 目的意義15-16
• 1.5.2 技術(shù)路線16-18
• 2 ω-3 PUFA改善大鼠NAFLD18-38
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器和試劑18-22
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼料22-24
• 2.1.3 血清樣本采集24
• 2.1.4 血脂及肝功能檢測(cè)24
• 2.1.5 肝臟病理檢測(cè)24
• 2.1.6 炎性因子分子指標(biāo)測(cè)定24-28
• 2.1.7 統(tǒng)計(jì)分析28-29
• 2.2 結(jié)果與分析29-35
• 2.2.1 魚油和紫蘇子油改善高脂誘導(dǎo)的脂肪肝29-32
• 2.2.2 魚油和紫蘇子油減輕高脂誘導(dǎo)的肝損傷32-33
• 2.2.3 魚油和紫蘇子油減輕高脂誘導(dǎo)的炎癥33-35
• 2.3 討論35-38
• 3 ω-3 PUFA改善大鼠NAFLD腸道菌變化38-56
• 3.1 材料與方法38-44
• 3.1.1 主要儀器和試劑38-39
• 3.1.2 腸道微生物基因組DNA提取39
• 3.1.3 腸道微生物測(cè)序和組成分析39-40
• 3.1.4 相關(guān)腸道菌的量化40-43
• 3.1.5 血清中LPS的測(cè)定43
• 3.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析43-44
• 3.2 結(jié)果與分析44-53
• 3.2.1 膳食誘導(dǎo)腸道微生物的改變44
• 3.2.2 腸道微生物門水平上的比較44-45
• 3.2.3 腸道微生物科和屬水平上的比較45-48
• 3.2.4 腸道菌群的量化驗(yàn)證48-51
• 3.2.5 ω-3 PUFA改善腸道菌群51-53
• 3.3 討論53-56
• 4 全文總結(jié)56-57
• 4.1 本文的主要結(jié)論如下56
• 4.2 研究展望56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66

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本文編號(hào)：1104496