本文關(guān)鍵詞：c-Met抑制劑聯(lián)合塞來昔布作用于肝膽管結(jié)石并膽管癌的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：背景肝膽管結(jié)石常指發(fā)生于左、右肝膽管及其分支內(nèi)的結(jié)石,常合并肝外膽管結(jié)石、肝內(nèi)外膽管狹窄和肝臟的纖維化改變。文獻(xiàn)中關(guān)于肝膽管結(jié)石的記載始于16世紀(jì)左右。肝膽管結(jié)石多見于亞洲,中國(guó)大陸此病發(fā)病率較高。肝內(nèi)膽管結(jié)石合并感染反復(fù)發(fā)作是導(dǎo)致肝內(nèi)膽管癌發(fā)生的常見因素。肝內(nèi)膽管癌(ICC)是一種發(fā)病率較高的惡性腫瘤疾病,發(fā)病年齡多為50-70歲。膽管癌的病因目前尚不清楚,有研究表明,常年患有肝膽管結(jié)石的病例是膽管癌的高發(fā)人群,肝膽管結(jié)石患者2%-10%的病例有發(fā)生膽管癌的風(fēng)險(xiǎn),一般認(rèn)為是肝膽管結(jié)石對(duì)膽管壁的長(zhǎng)期機(jī)械刺激及其所引起的慢性膽道感染和膽汁淤積等因素可導(dǎo)致膽管壁的慢性增生性炎癥、受累區(qū)域的肝膽管擴(kuò)張、膽管呈環(huán)狀或節(jié)段性狹窄；受累膽管壁可增厚、膽管壁及周圍纖維組織增生并慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；匯管區(qū)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維細(xì)胞增生,伴有肝實(shí)質(zhì)損害,嚴(yán)重者形成肝段或肝葉的纖維化萎縮和肝功能損害。而膽管壁炎性增厚,纖維化和狹窄,繼而引起膽管黏膜上皮的不典型增生。病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),膽管黏膜上皮的不典型增生可逐漸移行成腺癌。然而,當(dāng)出現(xiàn)肝膽管結(jié)石合并膽管癌時(shí),由于在臨床表現(xiàn)上患者多與單純性肝膽管結(jié)石并發(fā)膽管炎相類似,而無特異性,同時(shí)在臨床檢查時(shí)往往由于結(jié)石與腫瘤的并存,容易掩蓋腫瘤的存在造成漏診而錯(cuò)過了最佳治療時(shí)機(jī),因此,積極開展對(duì)肝膽管結(jié)石并膽管癌的基礎(chǔ)與臨床治療研究有重要的現(xiàn)實(shí)意義。很多基礎(chǔ)、臨床和流行病學(xué)的研究已經(jīng)證實(shí),炎癥是一個(gè)明確可以導(dǎo)致腫瘤的危險(xiǎn)因素。炎癥與腫瘤的關(guān)系最早引起研究者的關(guān)注,是因?yàn)槿藗冊(cè)谀[瘤的標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了免疫細(xì)胞浸潤(rùn)。當(dāng)時(shí)這個(gè)現(xiàn)象大多被解釋成為機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的應(yīng)答,但是后來有研究認(rèn)為“腫瘤起源于慢性炎癥”。此外,在腫瘤中發(fā)現(xiàn)的免疫細(xì)胞類型與非腫瘤性炎癥部位的細(xì)胞類型一致。此后越來越多的科學(xué)家深入研究腫瘤與炎癥的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)慢性炎癥是許多惡性腫瘤發(fā)生的高危因素,參與惡變、腫瘤形成、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等多個(gè)過程,被列為腫瘤細(xì)胞十大生物學(xué)特征之一。炎癥,特別是慢性炎癥,是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的重要因素之一,而這類疾病有學(xué)者稱之為是“炎癥相關(guān)性腫瘤”。導(dǎo)致各種炎癥相關(guān)性腫瘤的病原明顯是不相關(guān)的,然而它們之間在病理特征上關(guān)鍵的共同特點(diǎn)是可以持續(xù)介導(dǎo)炎癥：最初是由激活的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn),然后是被由纖維細(xì)胞和血管生成相關(guān)細(xì)胞組成的間質(zhì)激活。同時(shí)認(rèn)為這些浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞持續(xù)產(chǎn)生的ROS和NO可能會(huì)損傷正常細(xì)胞。這可能會(huì)反過來導(dǎo)致代償性的細(xì)胞增殖,之后導(dǎo)致DNA損傷、基因突變的積累,并有效地把內(nèi)源性及外源性腫瘤因子帶入正常生長(zhǎng)的細(xì)胞當(dāng)中。除此之外,近期也發(fā)現(xiàn)炎癥環(huán)境可以加速表觀遺傳學(xué)的改變,這些改變可能導(dǎo)致炎癥相關(guān)腫瘤的發(fā)生。c-Met是一種由c-Met原癌基因編碼的蛋白產(chǎn)物,為肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的受體,具有酪氨酸激酶活性,與多種癌基因產(chǎn)物和調(diào)節(jié)蛋白相關(guān),參與細(xì)胞信息傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架重排的調(diào)控,是細(xì)胞增殖、分化和運(yùn)動(dòng)的重要因素。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)是c-Met受體的配體,主要由間充質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生,以自分泌和旁分泌的方式起效,屬于典型的間質(zhì)細(xì)胞來源的生長(zhǎng)因子；HGF能刺激多種細(xì)胞生長(zhǎng),并參與血管生成及免疫活性的調(diào)節(jié),還可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲,是一種具有多種功能的生物因子。當(dāng)c-Met與其配體HGF結(jié)合后,胞質(zhì)中酪氨酸殘基(Tyr1234、Tyr1235)可發(fā)生自身磷酸化,從而激活c-Met胞質(zhì)內(nèi)蛋白激酶結(jié)構(gòu)域中酪氨酸激酶,激活的PTK可引起c-Met羧基末端酪氨酸的自身磷酸化。隨后,細(xì)胞質(zhì)中的多種效應(yīng)蛋白募集到磷酸化的羧基末端并被快速磷酸化,最后激活細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路。研究發(fā)現(xiàn),c-Met通路異常會(huì)誘發(fā)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移；c-Met與腫瘤對(duì)多種激酶抑制劑的耐藥性相關(guān)；c-Met可與多種膜受體之間的相互作用促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移,誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥性。在腫瘤細(xì)胞中有許多分子機(jī)制可以激活c-Met,最常見的方式是通過HGF和c-Met結(jié)合發(fā)揮作用。HGF和c-Met結(jié)合導(dǎo)致受體自身磷酸化,增強(qiáng)了c-Met酪氨酸激酶的活性,導(dǎo)致多種底物蛋白的酪氨酸磷酸化。以c-Met為作用靶點(diǎn)的藥物酪氨酸激酶抑制劑已經(jīng)逐步進(jìn)入了臨床試驗(yàn)階段,而PF-2341066是在2011年獲得美國(guó)FDA受理進(jìn)入優(yōu)先評(píng)審程序的一種c-Met抑制劑。人類COX-2基因定位于1號(hào)染色體的1q25.2-q25.3,全長(zhǎng)8.3 kb,由10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成,編碼604個(gè)氨基酸殘基組成的多肽。COX-2與COX-1具有61%的同源性,但卻表現(xiàn)出明顯的功能差異。COX-2主要分布于細(xì)胞核膜上,其表達(dá)調(diào)控主要集中在轉(zhuǎn)錄水平。誘導(dǎo)其表達(dá)的因素包括癌基因、白細(xì)胞介素-1、缺氧、紫外線、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子和腫瘤壞死因子-α等,而地塞米松、抗氧化劑、抑癌蛋白P53則可抑制其表達(dá)。COX-2的致癌機(jī)制,現(xiàn)在比較認(rèn)同的觀點(diǎn)是認(rèn)為COX-2可通過促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管形成、抑制免疫功能等機(jī)制,參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。其中主要是促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制凋亡、促進(jìn)血管形成。塞來昔布(Celecoxib)是第一個(gè)上市的COX-2選擇性抑制劑。美國(guó)佛雷德里克的國(guó)家癌癥研究所的Xu等研究人員發(fā)現(xiàn)COX-2的抑制劑塞來昔布具有抗血管生成的效用。美國(guó)Emory大學(xué)研究者的一項(xiàng)研究顯示,塞來昔布可能通過激活外源性死亡受體通路引起非小細(xì)胞肺癌腫瘤細(xì)胞的凋亡。研究人員利用小鼠模型,通過塞來昔布抑制COX-2的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn),VEGF通路的抑制被明顯增強(qiáng)了,最終得以有效抑制腫瘤生成及轉(zhuǎn)移、延長(zhǎng)了生存期。隨著對(duì)腫瘤生物行為的不斷深入研究,發(fā)現(xiàn)血管生成對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。腫瘤血管生成由正負(fù)兩方面調(diào)節(jié),其中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生長(zhǎng)因素。腫瘤發(fā)展的過程可分為無血管和有血管兩個(gè)階段,對(duì)于無血管階段,腫瘤細(xì)胞主要依靠彌散活動(dòng),由鄰近的血供系統(tǒng)獲得氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并運(yùn)走代謝產(chǎn)物,此時(shí)腫瘤細(xì)胞的凋亡率很高,體積很少超過1～2mm3,腫瘤呈休眠狀態(tài),這一過程可持續(xù)數(shù)周或數(shù)年。而一旦腫瘤細(xì)胞發(fā)生具有抗凋亡活性表型的突變,即轉(zhuǎn)入有血管階段。進(jìn)入有血管階段后,瘤體快速增大并可能發(fā)生轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞,參與腫瘤血管的新生,為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)。當(dāng)腫瘤組織直徑1cm以后,被激活的腫瘤組織通過自分泌或旁分泌機(jī)制合成和分泌VEGF,促進(jìn)腫瘤周圍組織建立起豐富的毛細(xì)血管網(wǎng),在VEGF等血管生成因子的作用下,血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌膠原酶和纖溶酶原借以降解血管基底膜,同時(shí),腫瘤組織內(nèi)部新形成的微血管基膜不完善,這使得腫瘤細(xì)胞并不需要很復(fù)雜的侵襲過程就能直接進(jìn)入到血道中,有利于腫瘤細(xì)胞在新的部位生長(zhǎng)及增殖。有研究表明,c-Met可作用于COX-2。Jones等對(duì)大鼠胃上皮細(xì)胞的研究認(rèn)為,HGF通過c-Met磷酸化和ERK-2細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來激活COX-2基因的表達(dá)。c-Met基因表達(dá)陽性的胃癌組織中微血管密度均值顯著高于陰性組,說明c-Met基因表達(dá)陽性的胃癌細(xì)胞更易生成腫瘤微血管,可能機(jī)制是上調(diào)COX-2表達(dá)和增加前列腺素合成,從而影響胃癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。目的探討COX-2和C-Met在肝膽管結(jié)石合并膽管癌組織中,二者的組織表達(dá)情況；觀察PF-2341066及塞來昔布聯(lián)合作用于膽管癌細(xì)胞株QBC939及膽管癌裸鼠荷瘤模型的實(shí)驗(yàn)效果；探討HGF—c-Met—COX-2—PGE2—VEGF是否為促進(jìn)膽管癌血管生成的一個(gè)潛在信號(hào)通路：探討c-Met抑制劑PF-2341066及COX-2抑制劑塞來昔布的聯(lián)合使用能否為該類腫瘤未來的治療策略提供一種新的靶點(diǎn)治療方案。方法1.Western blot法、RT-PCR檢測(cè)膽管癌組織中c-Met、COX-2的表達(dá),分析其與該疾病臨床病理征之間的關(guān)系。2. c-Met和COX-2的表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后關(guān)系的分析方法：c-Met和COX-2的表達(dá)水平與肝膽管結(jié)石并膽管癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系采用Mann-Whitney U和Kruskal-Wallis法檢驗(yàn)分析；二者與患者預(yù)后關(guān)系采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析模型(Cox proportional hazards model)進(jìn)行分析。3.MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)：體外培養(yǎng)膽管癌QBC939細(xì)胞株,然后用c-Met抑制劑PF-2341066聯(lián)合塞來昔布進(jìn)行干預(yù),檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：體外培養(yǎng)膽管癌QBC939細(xì)胞株,然后用c-Met抑制劑PF-2341066聯(lián)合塞來昔布進(jìn)行干預(yù),采用Annexin V-EGFP和Propidium Iodide染色,染色后采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析,檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。5.構(gòu)建裸鼠荷瘤模型,采用PF-2341066聯(lián)合塞來昔布對(duì)其進(jìn)行干預(yù),MTT法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡情況。結(jié)果1. c-Met、COX-2在肝膽管結(jié)石并膽管癌組織中的蛋白表達(dá)均為最高,其在癌旁組織中的表達(dá)又比在肝膽管結(jié)石膽管組織及正常組織中高,組間有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.肝膽管結(jié)石并膽管癌組織內(nèi)c-Met和COX-2表達(dá)水平明顯與膽管癌的腫瘤分期有關(guān),腫瘤分期為Ⅲ和Ⅳ期的膽管癌組織內(nèi)c-Met和COX-2表達(dá)明顯高于分期為Ⅰ和Ⅱ期的膽管癌組織(P0.05); c-Met和COX-2表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也有顯著的相關(guān)性,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性患者的膽管癌組織內(nèi)c-Met和COX-2水平明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的膽管癌組織(P0.05)；此外已經(jīng)出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶患者的膽管癌組織中c-Met和COX-2表達(dá)水平也明顯高于沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶的膽管癌組織(P0.05)；由此可見,c-Met和COX-2在膽管癌的臨床進(jìn)展和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中可能發(fā)揮了重要作用。3.采用Cox多因素回歸分析膽管癌患者的預(yù)后相關(guān)因素。結(jié)果發(fā)現(xiàn),癌組織中c-Met和COX-2表達(dá)高的患者預(yù)后更差,提示c-Met、COX-2的表達(dá)與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān),c-Met與COX-2可能是膽管癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P0.05)。此外統(tǒng)計(jì)分析提示,腫瘤的分期(P0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(P0.05)和遠(yuǎn)處是否存在轉(zhuǎn)移灶(P0.05)同樣是膽管癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。4.使用膽管癌細(xì)胞株QBC939進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),采用不同濃度的c-Met抑制劑作用QBC939細(xì)胞后,檢測(cè)其增殖與凋亡的變化,結(jié)果顯示QBC939細(xì)胞的增殖抑制率隨c-Met抑制劑濃度增高而增高,并且發(fā)現(xiàn)在PF-2341066和塞來昔布聯(lián)合用藥組中的細(xì)胞增殖抑制率最高,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。同樣方法處理細(xì)胞后,使用流式細(xì)胞儀對(duì)QBC939細(xì)胞的凋亡進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,QBC939的細(xì)胞凋亡率隨c-Met抑制劑濃度增高而增高,并且發(fā)現(xiàn)在PF-2341066和塞來昔布聯(lián)合用藥組中的細(xì)胞凋亡率最高,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)5.采用不同濃度的c-Met抑制劑作用QBC939細(xì)胞株后,對(duì)細(xì)胞的c-Met、 COX-2、VEGF蛋白與mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)c-Met、COX-2、VEGF蛋白與mRNA表達(dá)水平隨c-Met抑制劑的濃度增加而降低,并在PF-2341066和塞來昔布聯(lián)合用藥組中的表達(dá)最低,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。6.構(gòu)建裸鼠荷瘤模型,采用c-Met抑制劑聯(lián)合塞來昔布干預(yù)荷瘤裸鼠后,對(duì)腫瘤體積大小進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)腫瘤體積隨c-Met抑制劑濃度增加而減小PF-2341066和塞來昔布聯(lián)合用藥組的腫瘤平均體積最小,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)7.采用不同濃度的c-Met抑制劑對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行干預(yù)作用后,檢測(cè)其腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡的變化。結(jié)果顯示,腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率隨c-Met抑制劑濃度增高而增高,并且在PF-2341066和塞來昔布聯(lián)合用藥組的增殖抑制率最高,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。同樣方法處理細(xì)胞后,使用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,細(xì)胞凋亡率隨c-Met抑制劑濃度增高而增高,并且在聯(lián)合用藥組的凋亡率最高,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。8.采用不同濃度的c-Met抑制劑對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行干預(yù)作用后,對(duì)腫瘤組織的c-Me、COX-2、VEGF蛋白與mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)c-Met、 COX-2、VEGF蛋白與mRNA表達(dá)水平隨c-Met抑制劑濃度的增加而降低,并在PF-2341066和塞來昔布聯(lián)合用藥組的表達(dá)最低,與對(duì)照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論1肝膽管結(jié)石并膽管癌組織中c-Met及COX-2的表達(dá)較癌旁組織、正常膽管組織明顯升高,提示二者在肝膽管結(jié)石并膽管癌的發(fā)生發(fā)展中可能起到了重要的作用。2肝膽管結(jié)石并膽管癌組織中c-Met及COX-2的表達(dá)水平與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶有明顯的相關(guān)性,因此推測(cè)二者可能與肝膽管結(jié)石并膽管癌的惡性程度及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。3使用c-Met抑制劑聯(lián)合塞來昔布能夠降低荷瘤裸鼠腫瘤體積,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,推測(cè)c-Met及COX-2可能是影響膽管癌腫瘤進(jìn)展的重要因素。4 c-Met及COX-2的抑制劑可能是肝膽管結(jié)石并膽管癌未來潛在的靶點(diǎn)藥物,有望為肝膽管結(jié)石并膽管癌的輔助治療帶來新的前景。5 c-Met抑制劑PF-2341066和COX-2抑制劑塞來昔布對(duì)膽管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)有協(xié)同抑制效應(yīng),但c-Met與COX-2之間是否存在促進(jìn)膽管癌血管生成的交叉信號(hào)通路還有待更深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：肝膽管結(jié)石 膽管癌 c-Met COX-2 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.8;R575.7
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-22
• 前言22-28
• 第一部分 c-Met與COX-2在肝膽管結(jié)石合并膽管癌組織、癌旁膽管組織、肝膽管結(jié)石以及正常膽管組織中的表達(dá)及其預(yù)后相關(guān)性的研究28-48
• 引言28-29
• 材料與方法29-35
• 結(jié)果35-44
• 討論44-48
• 第二部分 c-Met抑制劑聯(lián)合塞來昔布對(duì)膽管癌細(xì)胞株QBC939的體外作用觀察研究48-82
• 引言48
• 材料與方法48-55
• 結(jié)果55-74
• 討論74-82
• 第三部分 c-Met抑制劑聯(lián)合塞來昔布作用于裸鼠模型的實(shí)驗(yàn)效果觀察82-101
• 引言82
• 材料與方法82-84
• 結(jié)果84-97
• 討論97-101
• 結(jié)論101-102
• 參考文獻(xiàn)102-123
• 綜述123-133
• 參考文獻(xiàn)126-133
• 攻讀學(xué)位期間成果133-134
• 致謝134-136
• 中英文縮略詞136-137

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10 黃建富;;肝膽管結(jié)石并肝膽管癌診治[J];肝膽外科雜志;2007年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王偉林;蔣智軍;鄭樹森;;肝膽管結(jié)石合并肝膽管癌的診治[A];2004年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

2 王益鐘;馮文明;;中西醫(yī)結(jié)合治療肝膽管結(jié)石的可行性探討[A];浙江省第二十屆基層衛(wèi)生改革與發(fā)展學(xué)術(shù)會(huì)議大會(huì)論文集[C];2012年

3 譚華;;對(duì)肝膽管結(jié)石發(fā)病原因再認(rèn)識(shí)[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2000年

4 馬俊杰;王全剛;郭波;;中西藥結(jié)合治療肝膽管結(jié)石臨床應(yīng)用(附36例臨床報(bào)告)[A];第八屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合普通外科臨床與基礎(chǔ)學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科危重病學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2003年

5 劉杰;;肝膽管結(jié)石的綜合療法[A];第七屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合普通外科臨床及基礎(chǔ)研究學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

6 畢德明;楊余朋;劉勇;馮乃兵;;肝膽管結(jié)石合并膽汁性肝硬化的外科處理[A];2008年中醫(yī)外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

7 魏琪;蔡秀軍;忻瑩;周偉;牟一平;;手助腹腔鏡肝段切除治療肝膽管結(jié)石[A];2006年浙江省微創(chuàng)外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

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本文編號(hào)：1090352