本文關(guān)鍵詞：硫氧還蛋白及超氧化物歧化酶在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達及作用

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【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)是一種病因尚不十分清楚的結(jié)腸和直腸慢性非特異性炎癥性疾病,病變局限于大腸黏膜及黏膜下層。病變多位于乙狀結(jié)腸和直腸,也可延伸至降結(jié)腸,甚至整個結(jié)腸。病程漫長,常反復(fù)發(fā)作。其發(fā)病機制復(fù)雜,主要認為是外源物質(zhì)引起宿主反應(yīng)、基因和免疫影響三者相互作用的結(jié)果。近年研究發(fā)現(xiàn)機體氧化應(yīng)激時產(chǎn)生的大量氧自由基對結(jié)腸粘膜細胞的損傷作用是其發(fā)病的重要機制之一,而硫氧還蛋白(thioredoxin,TRX)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)則是參與機體氧化應(yīng)激的重要相關(guān)蛋白。TRX不但可作為氧化應(yīng)激的標志物,還具有強大的清除體內(nèi)過氧化物的功能,能保護細胞免受如腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)以及過氧化氫(Hydrogen Peroxide,H2O2)等的損傷,此外TRX還能調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子以及其它炎癥因子的活性,在病毒感染、缺血損傷的應(yīng)激條件下對細胞產(chǎn)生保護作用。SOD是一種新型酶制劑,是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶,廣泛分布于各種生物體內(nèi)。SOD能有效地清除氧自由基,催化超氧化自由基分解成H2O2,進一步在過氧化氫酶的作用下分解成H2O和氧分子,從而抑制腸組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng),并能穩(wěn)定細胞膜。SOD活力的高低間接反應(yīng)了機體清除氧自由基的能力,也是反映細胞膜功能和機體抗炎癥反應(yīng)的主要指標。關(guān)于TRX及SOD在UC發(fā)病中的研究,國內(nèi)研究較為少見,國外研究也僅僅限于動物模型的實驗研究。本研究擬采用Western blot、PCR技術(shù)以及免疫組化染色分析,分別從蛋白水平和m RNA水平檢測UC患者腸粘膜組織中TRX及SOD的表達水平,探討TRX及SOD在UC發(fā)病中的作用機制,從而為UC的診斷和治療提供新的線索。目的:本課題通過檢測硫氧還蛋白及超氧化物歧化酶在UC患者中的表達,探討其在UC發(fā)病機制中的作用,從而為UC的診斷和治療提供新的線索。方法:病例選自2013年10月至2014年9月就診于滄州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科診斷證實為UC患者共42例,同時選擇腸鏡及病理證實結(jié)腸組織為正常者13例為正常對照組。入選病例根據(jù)Sutherland DAI評分標準,將其分為輕中度活動組(n=23例)及重度活動組(n=19例)。各組間在年齡及性別等方面均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。采用免疫組織化學染色方法、Western blot以及PCR技術(shù),分別從蛋白水平和基因水平檢測UC患者結(jié)腸粘膜組織中TRX及SOD的表達水平,根據(jù)檢測結(jié)果,進行統(tǒng)計學分析。根據(jù)TRX及SOD表達中位數(shù)為分隔點,將其分為高表達組和低表達組,研究降鈣素原(procalcitonin,PTC)、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)及臨床參數(shù)與其相關(guān)性。結(jié)果:1研究對象結(jié)腸鏡檢查結(jié)果及病理特征1.1結(jié)腸鏡檢查可見:正常人結(jié)腸黏膜表面光滑完整,血管紋理清晰;潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜粗糙,呈細顆粒狀改變,血管紋理模糊,覆有膿性或血性分泌物;有彌漫性糜爛和多發(fā)性淺潰瘍形成;假息肉及橋狀粘膜,結(jié)腸袋變鈍或消失。1.2光學顯微鏡下可見:正常人結(jié)腸組織黏膜腺體排列整齊,上皮完整,黏膜固有層可見少量炎性細胞浸潤;潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸黏膜染色過淺、空泡形成、杯狀細胞減少或消失,伴有大量圓細胞或中性粒細胞浸潤,腺體萎縮甚至壞死,并呈不同程度糜爛、隱窩膿腫及水腫形成。2 TRX及SOD在UC患者結(jié)腸組織中的表達2.1 UC患者結(jié)腸組織TRX及SOD m RNA轉(zhuǎn)錄水平。輕中度組UC患者結(jié)腸組織中TRX m RNA含量略高于正常組,但無統(tǒng)計學差異;重度組TRX m RNA表達明顯高于輕中度組及正常組(P0.001);輕中度組UC患者結(jié)腸組織中SOD m RNA表達與正常對照組無明顯差異,重度組UC患者SOD m RNA表達顯著低于輕中度組及正常組。2.2 UC患者組織TRX及SOD蛋白表達水平。輕中度組UC患者結(jié)腸組織中TRX蛋白含量略高于正常組,但無統(tǒng)計學差異;重度組TRX蛋白表達明顯高于輕中度組及正常組(P0.05);輕中度組UC患者SOD蛋白表達稍高于正常對照組,但無統(tǒng)計學差異;重度組UC患者SOD蛋白表達顯著低于輕中度組及正常組(P0.001)。3免疫組織化學染色檢測TRX在UC患者組織的表達染色顯示:TRX的主要表達于上皮細胞及腺上皮細胞胞漿,呈棕黃色。UC患者的結(jié)腸黏膜炎性細胞大量浸潤,伴有不同程度的組織結(jié)構(gòu)破壞,TRX表達的陽性細胞較正常黏膜明顯增多且染色較深。重度組TRX表達水平明顯高于輕中度組及正常組(P0.05);輕中度組明顯高于正常組,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白及臨床參數(shù)與TRX及SOD的相關(guān)性分析血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白在TRX高表達組的潰瘍性結(jié)腸炎患者中含量明顯高于TRX低表達組;血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白在SOD高表達組的潰瘍性結(jié)腸炎患者中含量低于SOD低表達組,但無統(tǒng)計學差異;大便次數(shù)、發(fā)熱、貧血等臨床參數(shù)與TRX及SOD的表達均無相關(guān)性。結(jié)論:1 UC患者結(jié)腸粘膜組織中的TRX與SOD表達和病情的嚴重程度有相關(guān)。2 TRX與SOD均通過氧化應(yīng)激反應(yīng)參與了UC發(fā)病過程。3 血清降鈣素原、C反應(yīng)蛋白與TRX的表達呈正相關(guān),共同參與了潰瘍性結(jié)腸炎炎癥的發(fā)病。
【關(guān)鍵詞】：硫氧還蛋白 超氧化物歧化酶 氧化應(yīng)激 潰瘍性結(jié)腸炎
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-25
• 附表25-27
• 討論27-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-36
• 綜述 氧化應(yīng)激反應(yīng)在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中的作用機制36-44
• 參考文獻41-44
• 致謝44-45
• 個人簡歷45

【參考文獻】

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本文編號：1089998