本文關(guān)鍵詞：NAFLD小鼠Th17通路變化及白藜蘆醇作用機(jī)制的初步探討

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【摘要】：目的:1建立非酒精性脂肪性肝病的動(dòng)物模型。2初步探討Th17通路在非酒精性脂肪性肝病中的作用及白藜蘆醇對(duì)其作用機(jī)制的初步研究。方法:本實(shí)驗(yàn)采取隨機(jī)-對(duì)照的研究方法。將SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行隨機(jī)分組。(1)60只雄性C57BL/6小鼠,6-8周齡,自由攝食AIN93對(duì)照飼料7天后,隨機(jī)分為Control組、高脂飲食(High fat diet,HFD)組及西方飲食(Western diet,WD)組,Control組16只,HFD組及WD組分別22只。分別給予對(duì)照飼料、高脂飼料、高脂飼料加高糖飲用水(42g/L),造模時(shí)間33周。從WD組中隨機(jī)抽取12只小鼠,每組6只,分別給予白藜蘆醇(resveratrol,Res)及羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose sodium,CMC)45mg/kg/day灌胃,繼續(xù)喂養(yǎng)6周后處死小鼠。(2)定期觀察小鼠的進(jìn)食、精神狀態(tài)及毛發(fā)光澤度等,每周測(cè)量小鼠體重并記錄。(3)觀察各組小鼠肝臟外形變化,記錄肝重,計(jì)算并比較肝重指數(shù)。(4)應(yīng)用苦味酸-天狼猩紅及蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色觀察肝組織病理學(xué)的改變。(5)檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)的變化情況。(6)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitation PCR,Real-time q PCR)方法檢測(cè)肝組織中TGF-βm RNA、IL-22 m RNA、RORγt m RNA及IL-17A m RNA的表達(dá)情況。(7)提取肝、脾組織中的淋巴細(xì)胞,行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè),了解肝、脾組織中CD4/CD8比值及CD4+T細(xì)胞IL-17、RORγt的表達(dá)情況。(8)應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)肝臟組織中α-SMA的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)HE及苦味酸-天狼猩紅染色顯示,Control組肝臟肝細(xì)胞大小及排列正常;HFD組和WD組形成非酒精性脂肪性肝炎及肝纖維化,造模成功;與WD+CMC組比較,WD+Res組肝纖維化程度明顯減輕(P0.05)。(2)與Control組比較,HFD組和WD組血清ALT、AST及TG明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與HFD組比較,WD組ALT、AST升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TG降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與WD+CMC組比較,WD+Res組血清ALT、AST及TG均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)Real-time QPCR:與Control組比較,WD和HFD組TGF-β、IL-22及RORγt m RNA表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HFD組IL-17 m RNA表達(dá)無明顯差異(P0.05);與HFD組比較,WD組TGF-β、IL-22、RORγt及IL-17 m RNA表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與WD+CMC組比較,WD+Res組TGF-β、IL-22、RORγt及IL-17 m RNA表達(dá)均明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)血清IL-17:與Control組比較,HFD組及WD組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);WD組較HFD組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與WD+CMC組比較,WD+Res組IL-17表達(dá)量明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果:肝臟:與Control組及HFD組比較,WD組CD4/CD8比值升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Control組與HFD組比較CD4/CD8比值無明顯差異(P0.05);與Control組比較,HFD組及WD組CD4+T RORγt表達(dá)量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且WD組較HFD組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與WD+CMC組比較,WD+Res組CD4/CD8比值及CD4+T RORγt表達(dá)量明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);CD4+T IL-17的表達(dá)量在治療前后各組間均無明顯表達(dá)。脾臟:CD4/CD8比值、CD4+T RORγt及CD4+T IL-17表達(dá)量在治療前后均無明顯變化。(6)免疫組化:α-SMA:與Control組比較,HFD組及WD組α-SMA表達(dá)量增高(P0.05),且WD組明顯高于HFD組(P0.05);同WD+CMC組比較,WD+Res組表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1通過采用經(jīng)典的西方飲食,成功建立了NASH相關(guān)肝纖維化小鼠模型。2模型組血清及組織中IL-17表達(dá)升高,提示Th17通路在NAFLD進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用。3果糖在NASH相關(guān)肝纖維化的形成中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。4α-SMA、TGF-β、IL-22、IL-17及RORγt在NAFLD炎癥反應(yīng)及肝纖維化中均發(fā)揮了重要作用。5肝臟CD4/CD8比值的變化在NASH相關(guān)肝纖維化中發(fā)揮了重要的作用。6 Res可能通過下調(diào)肝臟CD4/CD8比值發(fā)揮抗纖維化作用。7 Res可能通過下調(diào)肝淋巴細(xì)胞內(nèi)CD4+T RORγt及組織中的RORγt表達(dá)在NAFLD中發(fā)揮治療作用。8 Res可能通過抑制α-SMA、TGF-β、IL-22及IL-17表達(dá)在NAFLD中發(fā)揮治療作用。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 肝纖維化 IL-17 白藜蘆醇 果糖
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-26
• 結(jié)果26-30
• 附圖30-48
• 附表48-50
• 討論50-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 綜述 肝纖維化相關(guān)免疫學(xué)機(jī)制研究進(jìn)展61-77
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 致謝77-78
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陸倫根;;肝纖維化臨床研究的現(xiàn)狀和展望[J];藥品評(píng)價(jià);2007年04期

2 王麗春,趙連三;肝纖維化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2004年04期

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本文編號(hào)：1066267