本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎時(shí)自噬變化的影響及機(jī)制探討

  更多相關(guān)文章： 重癥急性胰腺炎 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬 PI3K-AKT-mTOR 信號(hào)通路

【摘要】：目的:建立大鼠重癥急性胰腺炎模型。觀察急性胰腺炎發(fā)生過程中自噬活性的變化,探討其病理意義。觀察同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)重癥急性胰腺炎自噬的影響,闡明MSCs治療重癥急性胰腺炎的分子機(jī)制。方法:將健康體重250±50克,5-6周齡的雌性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組,SAP模型組,SAP+MSCs移植組。每只大鼠尾靜脈注射自噬雙標(biāo)腺病毒(mRFP-GFP-LC3)2×109,在室溫22-28℃,相對(duì)濕度40-70%的動(dòng)物房?jī)?nèi)適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始造模,造模前12h起禁食不禁水。采用腹腔注射20%L-精氨酸的方法建立SAP大鼠模型,正常對(duì)照組給予等量生理鹽水腹腔注射。造模前一周取雄性健康SD大鼠做MSCs培養(yǎng),將培養(yǎng)好的同種異體SD大鼠第三代MSCs作為種子細(xì)胞,在SAP+MSCs移植組大鼠腹腔注射第一次精氨酸后即開始尾靜脈注射,注射量為5×106個(gè)/只,SAP模型組及正常對(duì)照組均予尾靜脈注射同體積0.9%NaCl溶液,所有大鼠均禁食不禁水。分別在開始造模6h、12h、24h、48h、72h,分別在三組動(dòng)物中抽取靜脈血,分離制作血清,-200C保存,檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)血淀粉酶、IL-6、TNF-α、以及胰蛋白酶原激活肽的含量。分別在以上5個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組分別處死5只動(dòng)物,打開腹腔,觀察胰腺周圍有無水腫及滲出。按上述固定的各時(shí)間點(diǎn)取胰腺、肺、腎組織標(biāo)本,石蠟包埋,切片,HE染色,采用盲法在光鏡下讀片,進(jìn)行胰腺組織病理學(xué)評(píng)分;同時(shí)做石蠟切片在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3等融合蛋白來示蹤自噬形成,免疫印跡法檢測(cè)大鼠胰腺組織LCⅡ,以及12h大鼠胰腺組織PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白表達(dá),用Image J軟件分析蛋白條帶進(jìn)行灰度值計(jì)算,得到目的蛋白的相對(duì)含量。全部數(shù)據(jù)使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以?x±s表示,兩樣本均數(shù)比較采取t檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果與正常對(duì)照組相比,SAP組胰腺組織充血水腫,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),部分胰腺結(jié)構(gòu)模糊甚至消失;胰腺組織病理學(xué)評(píng)分增加,血清淀粉酶、胰蛋白酶原激活肽、TNF-α和IL-6水平均升高(P0.05)。熒光顯微鏡下觀察SAP組大鼠胰腺組織自噬相關(guān)超微結(jié)構(gòu)明顯增多,免疫印跡法顯示與對(duì)照組相比,6h、12hSAP組自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ表達(dá)顯著增多(p0.05);與模型組相比,移植組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分下降,血清淀粉酶、胰蛋白酶原激活肽、TNF-α和IL-6水平均降低(P0.05),免疫印跡法顯示與SAP組相比,移植組大鼠自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ有所減少(p0.05);24h、48h、72h三組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05)。12h胰腺組織PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白的表達(dá)顯示,3組PI3K、mTOR蛋白表達(dá)無顯著性差異(P〉0.05),與對(duì)照組相比,模型組p-PI3K、p-mTOR蛋白表達(dá)明顯增加(p0.05);與模型組相比,移植組p-PI3K、p-mTOR蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05)。結(jié)論重癥急性胰腺炎可誘導(dǎo)增強(qiáng)自噬的發(fā)生,自噬促進(jìn)胰蛋白酶原的激活,并參與胰腺的損傷;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有可能通過PI3K-AKT-mTOR信號(hào)通路抑制自噬的發(fā)生,從而減輕胰腺炎以及胰腺炎相關(guān)的多臟器損傷。
【關(guān)鍵詞】：重癥急性胰腺炎 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自噬 PI3K-AKT-mTOR 信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R576
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-15
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定15-24
• 一、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)15
• 二、材料和方法15-19
• 三、結(jié)果19-20
• 四、討論20-23
• 參考文獻(xiàn)23-24
• 第二部分 重癥急性胰腺炎大鼠模型的建立24-38
• 一、材料和方法24-29
• 二、結(jié)果29-32
• 三、討論32-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 第三部分 自噬在急性胰腺炎中的變化及其意義38-52
• 一、材料與方法39-43
• 二、結(jié)果43-45
• 三、討論45-50
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 第四部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在急性重癥胰腺炎時(shí)對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞自噬的影響及機(jī)制探討52-67
• 一、材料和方法53-58
• 二、結(jié)果58-60
• 三、討論60-64
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 全文結(jié)論67-68
• 綜述 自噬與急性胰腺炎68-74
• 參考文獻(xiàn)72-74
• 縮略詞表74-75
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文75-76
• 致謝76-77

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本文編號(hào)：1059010