本文關(guān)鍵詞：基于超高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用的不同HBV DNA載量的慢性乙型肝炎代謝組學(xué)分析

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【摘要】：目的:應(yīng)用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用平臺,研究不同HBV DNA載量的慢性乙型肝炎患者的小分子代謝化合物的差異,為慢性乙型肝炎的臨床診斷、療效監(jiān)測、預(yù)后評估和長期隨訪提供新的血清學(xué)指標(biāo),進一步探索這些差異與乙型肝炎發(fā)病機制的關(guān)系。材料和方法:所有研究對象均滿足2015年中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)和中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中該病的診斷標(biāo)準(zhǔn),并滿足本研究的其它納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)。利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)平臺的技術(shù),在正、負(fù)離子模式下檢測慢性乙型肝炎人群中HBV DNA陽性組(25例)和HBV DNA陰性組(10例)兩組血清的代謝化合物。質(zhì)譜采集的原始數(shù)據(jù)通過SIEVE V2.1軟件進行濾噪、重疊峰解析、峰對齊、峰匹配、標(biāo)準(zhǔn)化和歸一化等處理。分別輸出正、負(fù)離子峰表,保存為Excel表,采用80%規(guī)則,處理缺失值。將處理缺失值后的Excel數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA—P 13.0軟件中,采用偏最小二乘法—判別分析方法進行模式識別分析。觀察模型中樣本的分布情況及其可靠性和預(yù)測能力,計算偏最小二乘法模型中各變量的變量投射重要性值,同時結(jié)合得分圖、載荷圖和非參數(shù)檢驗,篩選出潛在的生物標(biāo)志物。再根據(jù)質(zhì)荷比和保留時間查找數(shù)據(jù)庫等進行比對和篩選,確認(rèn)該物質(zhì)。用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果:經(jīng)過兩獨立樣本t檢驗,結(jié)果表明HBV DNA陽性組和HBV DNA陰性組的年齡分布沒有統(tǒng)計學(xué)差異,P=0.942(39.64±11.09,43.60±11.49)。經(jīng)過Fisher,s Exact Test,P=0.258,我們可以認(rèn)為兩組的性別構(gòu)成比沒有差異。進一步比較2組患者的肝臟功能情況,結(jié)果顯示,在谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和γ-谷氨�；D(zhuǎn)移酶水平上,HBV DNA陽性組的值顯著高于HBV DNA陰性組(P=0.010,P=0.003和P=0.009);然而,在白蛋白、球蛋白、總膽紅素、堿性磷酸酶和膽堿酯酶的水平方面,兩組患者的值是相似的。通過超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)初步鑒定出336種小分子代謝化合物,其中在負(fù)離子模式下鑒定出151個代謝化合物,在正離子模式下鑒定出185個代謝化合物,最后只篩選出2種有差異的代謝化合物。本研究成功構(gòu)建了HBV DNA陽性組和HBV DNA陰性組偏最小二乘法代謝譜圖分析模型((R2=0.00,0.666),Q2=(0.00,-0.201)),在負(fù)離子模式條件下,篩選出了1種有差異的代謝化合物是異檸檬酸,該物質(zhì)在HBV DNA陰性組中的含量明顯高于HBV DNA陽性組的患者(P=0.019);在正離子模式條件下,篩選出了溶血磷脂酰乙醇胺(22:4),該物質(zhì)在HBV DNA陽性組中的含量明顯高于HBV DNA陰性組的患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.032)。結(jié)論:1.基于超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和偏最小二乘法一判別分析模型,可能為評估慢性乙型肝炎患者不同HBV DNA載量提供了一種的新方法。2.利用代謝組學(xué)的技術(shù)篩選出的差異性代謝物:異檸檬酸和溶血磷脂酰乙醇胺(22:4)可以作為區(qū)分HBV DNA陽性組和陰性組的潛在生物標(biāo)志物,并表明機體不同的病理生理狀態(tài)。3.三羧酸循環(huán)通路和磷脂代謝通路可能為乙肝的發(fā)病機制提供新的研究角度和視野。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎 HBV DNA 代謝組學(xué) 超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 偏最小二乘法-判別分析
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R512.62
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-15
• 1. 研究對象13
• 2. 儀器和試劑13-14
• 2.1 乙肝相關(guān)指標(biāo)的檢測儀器和試劑13-14
• 2.2 代謝組學(xué)技術(shù)的檢測儀器和試劑14
• 3.樣本的采集和處理14
• 3.1 樣本采集14
• 3.2 樣品預(yù)處理14
• 4.分析條件14-15
• 4.1 色譜條件14
• 4.2 洗脫梯度14
• 4.3 質(zhì)譜條件14-15
• 5. 數(shù)據(jù)處理15
• 6. 統(tǒng)計分析15
• 結(jié)果15-21
• 1. 實驗組和對照組基本情況的比較15-16
• 2. 乙型肝炎患者血清代謝組學(xué)分析16-17
• 3. 代謝輪廓對各研究對象的區(qū)別及模式識別分析17-20
• 4. 有差異代謝化合物的篩選和發(fā)現(xiàn)20-21
• 討論21-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻25-30
• 綜述30-54
• 參考文獻47-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況54-55
• 致謝55-56

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本文編號：1054661