本文關(guān)鍵詞：HBV相關(guān)性肝癌中HBV cccDNA突變位點(diǎn)的研究

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【摘要】：目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染導(dǎo)致的肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的表達(dá)水平及各區(qū)間位點(diǎn)的變異,探討HBV ccc DNA不同區(qū)域核苷酸位點(diǎn)突變與HCC疾病的關(guān)系�；诨虮磉_(dá)譜數(shù)據(jù)篩選HBV感染的HCC疾病關(guān)鍵基因因子,為基因靶向性預(yù)防和治療肝癌提供參考因子。方法:收集49例重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一和第二醫(yī)院HBV感染形成的HCC患者的血清及肝臟癌組織和配對(duì)的癌旁組織,首先檢測(cè)患者臨床病毒學(xué)指標(biāo),再用特異性熒光定量Tag Man探針方法檢測(cè)肝組織內(nèi)HBV ccc DNA和DNA在HCC癌組織及癌旁組織中的表達(dá)水平;然后利用滾環(huán)擴(kuò)增(Roling circle amplification,RCA)技術(shù)特異性擴(kuò)增癌組織及癌旁組織中肝臟內(nèi)的cccDNA。進(jìn)一步分析患者癌組織和癌旁組織HBV cccDNA和DNA表達(dá)水平的差異及ccc DNA在X區(qū)和前C/C區(qū)核苷酸突變位點(diǎn)及突變組合與HCC發(fā)生的關(guān)系;下載Gene Expression Ominibus(GEO)數(shù)據(jù)庫(kù)中5對(duì)HBV感染的HCC配對(duì)樣本基因表達(dá)譜數(shù)據(jù),通過生物信息學(xué)分析方法篩選與HCC直接關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵候選因子。結(jié)果:(1)在49對(duì)hcc病人中,共有35例配對(duì)的癌組織和癌旁組織的cccdna有效檢測(cè),cccdna在癌組織中總體表達(dá)水平顯著低于對(duì)應(yīng)的癌組織(5.20vs.9.35copiesy/cell,p=0.0033);配對(duì)的癌組織和癌旁組織的cccdna經(jīng)過rca擴(kuò)增后,在x和prec/c區(qū)分別有18對(duì)和16對(duì)能有效擴(kuò)增,cccdnax區(qū)域位點(diǎn)突變率在癌組織中顯著高于癌旁組織(28.63%和20.94%,p=0.0313);序列比對(duì)后發(fā)現(xiàn)x區(qū)t1721g位點(diǎn)和prec/c區(qū)域a1979g的突變?cè)趆cc癌組織中發(fā)生的個(gè)數(shù)顯著地高于癌旁組織(p=0.04075,or=10.1598;p=0.0155,or=13.7529);由t1727g突變形成的組合突變a1703g/t1727g、a1762t/g1764a/t1727g、a1703g/t1727g/a1762t/g1764a,a1979g突變形成的組合突變a1979g/a2189、a1979g/a2189c/t/c2288a、a1979g/a2189c/t/c2288a/a2075t在癌組織中發(fā)生的次數(shù)高于癌旁組織。(2)篩選得到的高風(fēng)險(xiǎn)肝癌模塊中(75%)過量表達(dá)基因egr1,fos,dusp1,且共同參與mapk信號(hào)通路和下游通路細(xì)胞周期調(diào)控。結(jié)論:既往文獻(xiàn)報(bào)道的hcc中的典型突變位點(diǎn)a1762t/g1764a、g1896a/g1899a等在本研究的樣本中cccdna的x區(qū)間和prec/c區(qū)間在癌組織和癌旁組織中均有突變,且無明顯差別;發(fā)現(xiàn)的t1721g和a1979g單核苷酸突變及組合位點(diǎn)突變更具有特征性,它們的突變可能與hbv感染的hcc疾病的發(fā)展關(guān)聯(lián)密切。篩選得到的egr1,fos,dusp1基因很可能成為早期識(shí)別hcc的生物標(biāo)志,同時(shí)也為基因靶向性治療HCC提供了候選因子。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 共價(jià)閉合環(huán)狀DNA 核苷酸突變 候選因子 靶向治療
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.62;R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 HBV相關(guān)的肝癌中HBV cccDNA核苷酸突變研究14-39
• 1 材料與儀器14-15
• 2.方法15-18
• 3.結(jié)果18-29
• 4 討論29-34
• 小結(jié)34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 第二部分 HBV相關(guān)性肝癌關(guān)鍵基因因子的篩選39-51
• 1 材料39
• 2.方法39-42
• 3.結(jié)果42-47
• 4 討論47-48
• 小結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-51
• 文獻(xiàn)綜述51-55
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 致謝55-56
• 攻讀學(xué)位期間撰寫和發(fā)表的論文56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Xin Zhang;Hui-Guo Ding;;Key role of hepatitis B virus mutation in chronic hepatitis B development to hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Hepatology;2015年09期

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本文編號(hào)：1015723