發(fā)布時(shí)間：2017-10-06 14:48

  本文關(guān)鍵詞：敲低Sp1對(duì)CNE2細(xì)胞STGC3表達(dá)及惡性表型的影響

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【摘要】：目的:探明Sp1基因在鼻咽癌CNE2細(xì)胞中對(duì)STGC3基因表達(dá)的調(diào)控作用,研究敲低Sp1基因表達(dá)對(duì)CNE2細(xì)胞生長增殖、侵襲及遷移的影響。方法1.構(gòu)建慢病毒GTP-HIS-Sp1干擾載體,將干擾載體轉(zhuǎn)染于CNE2細(xì)胞,建立Sp1基因低表達(dá)的CNE2細(xì)胞系(GTP-HIS-Sp1-CNE2);通過qRT-PCR及Western Blotting方法,從mRNA及蛋白質(zhì)水平,檢測Spl基因的表達(dá)狀況,確定GTP-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞成功建立。2.實(shí)驗(yàn)分組為,實(shí)驗(yàn)組GTP-HIS-Sp1-CNE2,空載體組GTP-HIS-CNE2及對(duì)照組CNE2,采用q RT-PCR及Western Blotting方法,從mRNA及蛋白質(zhì)水平,檢測GTP-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞與對(duì)照組間STGC3基因的表達(dá)差異,分析Sp1對(duì)CNE2細(xì)胞中STGC3基因表達(dá)的調(diào)控作用;施用流式細(xì)胞儀、MTS、Transwell及細(xì)胞克隆形成方法,檢測敲低Sp1基因表達(dá)后,CNE2細(xì)胞生長增殖、侵襲、遷移及非停泊依賴性生長能力的變化。結(jié)果1.構(gòu)建載體經(jīng)DNA測序鑒定,證實(shí)GTP-HIS-Sp1慢病毒載體成功構(gòu)建;以病毒滴度為5.0×108 TU/mL,將GTP-HIS-Sp1感染CNE2細(xì)胞,qRT-PCR及Western Blotting方法,檢測結(jié)果顯示,感染后,CNE2細(xì)胞中Sp1的表達(dá)降低,Sp1基因被敲低,表明GTP-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞成功建立。2.qRT-PCR及Western Blotting檢測GTP-HIS-Sp1-CNE2細(xì)胞STGC3基因表達(dá),結(jié)果顯示,敲低Sp1基因表達(dá),在mRNA和蛋白質(zhì)水平,均顯示出STGC3表達(dá)被恢復(fù),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲低Sp1基因表達(dá),可上調(diào)STGC3的表達(dá),進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Sp1對(duì)STGC3基因起負(fù)調(diào)控作用。3.MTS實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn),結(jié)果均顯示,敲低Sp1基因表達(dá),CNE2細(xì)胞的生長增殖速度減慢,克隆形成能力降低;Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,敲低Sp1基因表達(dá),CNE2細(xì)胞遷移及侵襲能力明顯降低;流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,GTP-HIS-Sp1-CNE2組G1期細(xì)胞比例為78.31%,細(xì)胞凋亡率約為14.56%,空載體與未轉(zhuǎn)染CNE2組,G1期細(xì)胞比例分別為68.26%、67.33%,凋亡率分別約為9.9%和10.42%,實(shí)驗(yàn)證實(shí)Sp1基因表達(dá)下調(diào),導(dǎo)致CNE2細(xì)胞阻滯于G1期,細(xì)胞凋亡增加;上述研究證實(shí)敲低Sp1基因表達(dá),CNE2細(xì)胞STGC3表達(dá)被恢復(fù),部分惡性表型被逆轉(zhuǎn)。結(jié)論:1.敲低Sp1基因在CNE2細(xì)胞的表達(dá),STGC3基因表達(dá)被恢復(fù),證實(shí)Sp1對(duì)STGC3基因表達(dá)具有負(fù)性調(diào)控作用。2.敲低Sp1基因的表達(dá),可部分逆轉(zhuǎn)CNE2細(xì)胞的惡性表型。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 STGC3基因 Sp1基因 CNE2 惡性表型
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-30
• 2.1 材料12-14
• 2.2 方法14-30
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-46
• 3.1 GTP-HIS-Sp1慢病毒載體的構(gòu)建30-32
• 3.2 GTP-HIS-Sp1慢病毒感染CNE2細(xì)胞32-33
• 3.3 GTP-HIS-Sp1對(duì)Spl mRNA表達(dá)的抑制作用33-34
• 3.4 GTP-HIS-Sp1對(duì)Spl蛋白質(zhì)表達(dá)的抑制作用34-35
• 3.5 敲低Sp1后對(duì)STGC3基因mRNA表達(dá)水平的影響35-37
• 3.6 敲低Sp1后對(duì)STGC3基因蛋白表達(dá)水平的影響37-38
• 3.7 敲低Sp1后對(duì)CNE2細(xì)胞增殖的影響38-39
• 3.8 流式細(xì)胞術(shù)分析敲低Sp1后對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響39-41
• 3.9 敲低 Sp1 后對(duì) CNE2 細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響41-44
• 3.10 敲低Sp1后對(duì)細(xì)胞克隆形成能力的影響44-46
• 第4章 討論46-52
• 第5章 結(jié)論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-62
• 綜述 抗腫瘤藥物治療靶點(diǎn) Sp1 研究進(jìn)展62-72
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 附錄72-76
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文76-78
• 致謝78

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1 唐芬;敲低Sp1對(duì)CNE2細(xì)胞STGC3表達(dá)及惡性表型的影響[D];南華大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：983346