發(fā)布時(shí)間：2017-10-04 01:27

  本文關(guān)鍵詞：鼻咽癌細(xì)胞中14-3-3σ相關(guān)miRNAs差異表達(dá)譜研究

  更多相關(guān)文章： 鼻咽癌 miRNAs差異表達(dá)譜 14-3-3σ miR-675 生物信息學(xué)

【摘要】：[目的]通過(guò)mi RNA芯片技術(shù)獲得14-3-3σ(SFN)所調(diào)控的mi RNAs差異表達(dá)譜;通過(guò)RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片結(jié)果的可靠性;生物信息學(xué)分析獲得的mi RNAs差異表達(dá)譜所涉及的信號(hào)通路;闡明mi RNASFN之間的調(diào)控機(jī)制在鼻咽癌中的作用。[方法]構(gòu)建14-3-3σ高表達(dá)的重組細(xì)胞系5-8F-14-3-3σ(+)以及對(duì)照組細(xì)胞系5-8F-14-3-3σ(-)。經(jīng)過(guò)Western blot檢測(cè)兩組細(xì)胞中14-3-3σ蛋白表達(dá)水平,確定轉(zhuǎn)染成功。收集細(xì)胞,提取RNA,檢測(cè)總RNA純度,通過(guò)mi RNA芯片檢測(cè)SFN所調(diào)控的mi RNAs差異表達(dá)譜。mi Randa軟件分析了下調(diào)倍數(shù)最大的10個(gè)靶mi RNAs的熱動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性分值(mir SVR)和序列保守性分值(Phast Cons),確定SFN的靶mi RNAs。通過(guò)mi Rwalk在線軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析SFN的靶mi RNAs。結(jié)合基因芯片結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析,找出SFN的靶mi RNA。Target Scan在線軟件預(yù)測(cè)靶mi RNA和SFN的結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)SFN的靶mi RNA進(jìn)行q RT-PCR驗(yàn)證,與芯片結(jié)果進(jìn)行比較。生物信息學(xué)分析14-3-3σ相關(guān)mi RNAs表達(dá)譜涉及到的信號(hào)通路、生物學(xué)過(guò)程、分子功能及細(xì)胞組分,從中找出關(guān)鍵的信號(hào)通路。[結(jié)果]1.Western blot檢測(cè)5-8F-14-3-3σ(+)細(xì)胞中14-3-3σ蛋白的表達(dá)水平明顯高于5-8F-14-3-3σ(-)和5-8F細(xì)胞,而5-8F-14-3-3σ(-)和5-8F兩組間蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異。2.mi RNA芯片檢測(cè)5-8F-14-3-3σ(+)和5-8F-14-3-3σ(-)兩個(gè)細(xì)胞系之間的差異mi RNAs,獲得14-3-3σ調(diào)控的mi RNAs差異表達(dá)譜。mi RNA芯片顯示SFN高表達(dá)后有239個(gè)mi RNAs差異表達(dá),其中上調(diào)的mi RNAs有58個(gè),而下調(diào)的mi RNAs有181個(gè)。3.10個(gè)下調(diào)差異倍數(shù)最大的mi RNAs中,通過(guò)mi Randa軟件分析發(fā)現(xiàn)符合條件的mi RNAs(mir SVR≤-0.1,Phast Cons 0.4~0.7)有2個(gè)。因此,mi R-675,mi R-4253可能是SFN的靶mi RNA。4.SFN的靶mi RNAs通過(guò)mi Rwalk在線軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)和分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):10個(gè)軟件當(dāng)中有6個(gè)軟件同時(shí)預(yù)測(cè)到了mi R-145和mi R-220c可與SFN結(jié)合;有5個(gè)軟件同時(shí)預(yù)測(cè)到了mi R-597,mi R-129-3p,mi R-603,mi R-769-3p,mi R-431,mi R-608,mi R-766,mi R-31,mi R-532-3p,mi R-675,mi R-922,mi R-329,mi R-483-3p,mi R-554,mi R-642,mi R-886-5p,mi R-362-3p,mi R-486-3p等18個(gè)mi RNAs可與SFN結(jié)合。與基因芯片結(jié)果對(duì)比分析,發(fā)現(xiàn),mi R-675可能是SFN作用的靶mi RNA。5.Targetscan軟件預(yù)測(cè)mi R-675與SFN結(jié)合的位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)該結(jié)合位點(diǎn)位于SFN基因226-232堿基,其結(jié)合的序列是5'-CCGCACC-3'與mi R-675部分序列一致。mi RNA通過(guò)結(jié)合到SFN基因的3`-UTR,調(diào)控SFN的表達(dá),兩者的結(jié)合具有特異性,進(jìn)一步說(shuō)明SFN可能是mi R-675的可靠的作用靶基因。6.生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),差異mi RNAs調(diào)控的靶基因當(dāng)中,涉及到的信號(hào)通路主要包括WNT、MAPK、TGF-β。7.RT-PCR驗(yàn)證mi R-675和mi R-4253的表達(dá)水平,mi R-675和mi R-4253在5-8F-14-3-3σ(+)中表達(dá)量分別為對(duì)照組5-8F-14-3-3σ(-)的-3.458和-5.098倍,與基因芯片結(jié)果一致。表明基因芯片結(jié)果檢測(cè)可靠。[結(jié)論]1.獲得了14-3-3σ調(diào)控的mi RNAs表達(dá)譜,在鼻咽癌細(xì)胞中14-3-3σ表達(dá)增高后,上調(diào)的mi RNAs有58個(gè),下調(diào)的mi RNAs有181個(gè);2.生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,14-3-3σ相關(guān)mi RNAs表達(dá)譜涉及到的功能復(fù)雜,其中WNT、MAPK、TGF-β信號(hào)通路可能與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展有關(guān);3.mi R-675能與14-3-3σ結(jié)合,是14-3-3σ的靶mi RNA;SFN可能是mi R-675的基因,mi R-675-SFN相互調(diào)控在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 miRNAs差異表達(dá)譜 14-3-3σ miR-675 生物信息學(xué)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 主要縮略英文索引13-15
• 第1章 緒論15-21
• 1.1 鼻咽癌發(fā)病與診療現(xiàn)狀15-16
• 1.2 miRNA與腫瘤關(guān)系16-17
• 1.3 1433σ 研究進(jìn)展17-18
• 1.4 差異miRNA芯片在腫瘤研究中的應(yīng)用18-19
• 1.5 研究?jī)?nèi)容19-21
• 第2章 材料與方法21-33
• 2.1 材料21-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-33
• 第3章 結(jié)果33-57
• 3.1 重組細(xì)胞中 1433σ 蛋白表達(dá)水平33
• 3.2 細(xì)胞總RNA的抽提結(jié)果33-34
• 3.3 基因芯片檢測(cè)差異表達(dá)miRNAs34-40
• 3.4 靶基因與miRNAs之間的結(jié)合特異性及穩(wěn)定性預(yù)測(cè)40-41
• 3.5 生物信息學(xué)分析SFN的靶miRNAs41-42
• 3.6 預(yù)測(cè)miR-675和SFN的結(jié)合位點(diǎn)42-43
• 3.7 差異表達(dá)mi RNAs的生物信息學(xué)分析43-54
• 3.8 RT-PCR檢測(cè)miR-675，，mi R-4253表達(dá)水平54-57
• 第4章 討論57-67
• 4.1 mi RNA在鼻咽癌中的研究現(xiàn)狀57
• 4.2 1433σ 與腫瘤關(guān)系57-59
• 4.3 1433σ 的miRNAs差異芯片結(jié)果分析59
• 4.4 1433σ 調(diào)控的mi RNAs分析59-60
• 4.5 miR-675與腫瘤研究現(xiàn)狀60-61
• 4.6 1433σ 調(diào)控的mi RNAs的功能分析61-62
• 4.7 miRNAs涉及到的信號(hào)通路在鼻咽癌中的作用62-67
• 第5章 結(jié)論67-69
• 參考文獻(xiàn)69-81
• 文獻(xiàn)綜述81-91
• 參考文獻(xiàn)86-91
• 附錄91-101
• 攻讀學(xué)位期間的科研成果101-103
• 本研究基金資助項(xiàng)目103-105
• 致謝105-106

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李智,林素暇,梁英杰;巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子提高鼻咽癌細(xì)胞體外侵襲能力[J];中華病理學(xué)雜志;2004年01期

2 張蕾,王曉華,馬秀蘭,何安光;EB病毒基因BARF1在鼻咽癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)癌癥雜志;2004年01期

3 王安宇;鼻咽癌細(xì)胞生物節(jié)律基礎(chǔ)研究和臨床時(shí)辰治療現(xiàn)狀[J];廣西醫(yī)學(xué);2005年06期

4 吳敬波;崔艷慧;張建文;范娟;文慶蓮;;心肌細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)的體外抑制作用實(shí)驗(yàn)研究[J];四川腫瘤防治;2006年02期

5 姚輝璐;朱淼;王桂文;彭立新;何碧娟;何敏;黎永青;;單個(gè)鼻咽癌細(xì)胞的拉曼光譜分析的研究[J];光譜學(xué)與光譜分析;2007年09期

6 杜玲艷;黃丹;詹旭;;鼻咽癌細(xì)胞后向偏振散射光譜研究[J];四川理工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年03期

7 蘇欣;李仕晟;康競(jìng);謝yN;江靜;;靶向阻斷表皮生長(zhǎng)因子受體信號(hào)通路影響鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)的研究[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年18期

8 易翔;唐安洲;覃穎;溫文勝;謝瑩;;一氧化氮對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)作用[J];中國(guó)癌癥防治雜志;2009年03期

9 陳蔚;崔英;岳惠芬;梁新強(qiáng);;新城疫病毒抑制鼻咽癌細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];中華腫瘤防治雜志;2010年01期

10 何曉松;易世江;凌月福;;表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯通過(guò)下調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的凋亡[J];廣東醫(yī)學(xué);2010年14期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳陽(yáng);李永增;陳榮;;鼻咽癌細(xì)胞的拉曼光譜[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)激光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

2 焦偉;莫祥蘭;;腫瘤壞死因子聯(lián)合白介素2抗鼻咽癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

3 姚輝璐;王桂文;何敏;蔣玉艷;黎永青;;單細(xì)胞拉曼光譜分析鼻咽癌細(xì)胞的研究[A];第六屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

4 李步洪;林慧韞;謝樹(shù)森;;鼻咽癌細(xì)胞的熒光光譜特性[A];大珩先生九十華誕文集暨中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)2004年學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2004年

5 姚輝璐;王桂文;彭立新;黎永青;;單個(gè)鼻咽癌細(xì)胞的拉曼光譜分析的研究[A];中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

6 王瓊;伍鋼;;血管緊張素Ⅱ及其受體阻滯劑與放療聯(lián)合對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制的研究[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

7 高健赫;蔡紅星;張喜和;;鼻咽癌細(xì)胞分泌物的拉曼光譜研究[A];第十六屆全國(guó)光散射學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2011年

8 冼勵(lì)堅(jiān);孫健;曹棄元;葉燕麗;;鼻咽癌細(xì)胞DNA合成的時(shí)間節(jié)律研究[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

9 吳敬波;崔艷慧;張建文;范娟;文慶蓮;;心肌細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用體外實(shí)驗(yàn)研究[A];第九屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

10 張配;趙素容;宋樂(lè)樂(lè);浦龍健;蔣志文;劉浩;蔣琛琛;;低分子量肝素聯(lián)合紫杉醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響[A];促進(jìn)科技經(jīng)濟(jì)結(jié)合，服務(wù)創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)發(fā)展——蚌埠市科協(xié)2012年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 裴娜娜;Ang-(1-7)過(guò)表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞體內(nèi)外生長(zhǎng)的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李國(guó)萍;不同侵襲遷移能力鼻咽癌細(xì)胞蛋白組學(xué)及轉(zhuǎn)移相關(guān)基因功能研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

3 苗北平;辣根過(guò)氧化物酶/吲哚三醋酸酶前藥對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的殺傷作用[D];山東大學(xué);2008年

4 徐娟;EB病毒LMP1通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子EGFR調(diào)節(jié)酪氨酰蛋白硫酸轉(zhuǎn)移酶TPST-1介導(dǎo)趨化因子受體CXCR4活性的分子機(jī)制[D];中南大學(xué);2010年

5 吳平;ARC基因在鼻咽癌中的表達(dá)及與鼻咽癌細(xì)胞放化療敏感性的研究[D];中南大學(xué);2012年

6 張荔茗;鼻咽癌細(xì)胞中“c-Myc/miRNA/靶基因”交互作用分子網(wǎng)絡(luò)的初步構(gòu)建及功能研究[D];中南大學(xué);2009年

7 謝李;HSP70調(diào)控雷帕霉素對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用分子機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2010年

8 王瓊;放射線對(duì)小鼠組織線粒體基因和鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的初步研究[D];華中科技大學(xué);2010年

9 孫懿;應(yīng)用RNA干擾和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究鼻咽癌細(xì)胞中p53的功能[D];中南大學(xué);2007年

10 袁智勇;紫杉醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射增敏作用的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 夏玉對(duì);Garcinone抑制鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)及作用機(jī)制的體外研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳志;EBV-LMP2A誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞EMT和對(duì)其生物學(xué)特性的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王惠潔;間質(zhì)蛋白Periostin對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲遷移能力的影響[D];南華大學(xué);2015年

4 黃s

本文編號(hào)：967875