本文關鍵詞：CLDN4在喉鱗狀細胞癌中表達的研究

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【摘要】：喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一,其中以鱗狀細胞癌最為多見。目前研究顯示,緊密連接蛋白CLDN4在多種上皮來源腫瘤中表達異常,研究發(fā)現,在胰腺癌、乳腺癌及胃癌中CLDN4表達明顯上調,而在膀胱癌、腎細胞癌中CLDN4的表達下調,因此推測其表達的改變在多種上皮源性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,但其在喉癌中的表達尚未見報道。據報道,DNA甲基化可以調節(jié)CLDNs的表達,甲基化的DNA可與Mecp-2結合,導致基因轉錄的抑制。CLDN4啟動子區(qū)域的甲基化可導致卵巢癌及膀胱癌中CLDN4基因沉默,但在喉癌中CLDN4的表達是否受到DNA甲基化的調節(jié)目前仍不清楚。目的:檢測CLDN4在喉癌組織中的表達,并且進一步探討其表達的調節(jié)機制及在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:采用免疫組化法檢測95例喉鱗狀細胞癌和95例癌旁組織中CLDN4及Mcep-2的表達,并進一步分析其與腫瘤分化程度的關系及二者之間的相關性;同時用10μM 5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-aza-dc)作用喉鱗癌細胞系hep-2細胞,通過RT-PCR和western blot法檢測5-aza-dc作用6h、12h及24h對CLDN4 mRNA和蛋白表達的影響,并通過劃痕實驗和transwell實驗檢測5-aza-dc作用12h對hep-2細胞遷移能力和侵襲能力的影響。結果:喉癌組織中CLDN4表達下調,且其表達與腫瘤的分化程度正相關;喉癌組織中Mecp-2表達上調,其表達與腫瘤的分化程度無明顯相關性;喉癌組織中CLDN4的表達與Mecp-2的表達相關;5-aza-dc作用hep-2細胞后可可以上調CLDN4的表達,并使hep-2細胞的遷移和侵襲能力下降。結論:1.CLDN4在喉癌組織中表達下調,并與Mecp-2的表達相關;2.5-aza-dC可以上調hep-2細胞中CLDN4的表達,從而抑制了細胞的遷移及侵襲能力。3.CLDN4表達下調可能與DNA甲基化有關,并可能促進了喉癌的發(fā)生發(fā)展。
【關鍵詞】：喉鱗狀細胞癌 CLDN4 DNA 甲基化
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-12
• 第一章 前言12-17
• 第二章 實驗材料和方法17-26
• 2.1 實驗材料17
• 2.2 主要試劑及來源17-18
• 2.3 主要儀器18-19
• 2.4 引物設計合成及一抗19
• 2.5 實驗方法19-26
• 2.5.1 免疫組化法分析CLDN4及mecp-2 在組織中的表達19-20
• 2.5.2 細胞培養(yǎng)20-21
• 2.5.3 RT-PCR方法檢測hep-2 細胞株中CLDN4的表達21-22
• 2.5.4 Western blot方法檢測hep-2 細胞株中CLDN4的表達22-23
• 2.5.5 使用 5-aza-dc對hep-2 細胞株進行去甲基化處理23
• 2.5.6 RT-PCR 方法檢測5-aza-dc處理后hep-2細胞株中CLDN4的表達23
• 2.5.7 Western blot 方法檢測5-aza-dc處理后hep-2細胞株中CLDN4的表達23
• 2.5.8 細胞劃痕實驗檢測5-aza-dc處理后hep-2細胞株的遷移能力23-24
• 2.5.9 transwell實驗檢測5-aza-dc處理后hep-2細胞株的侵襲能力24-25
• 2.5.10 統計學分析25-26
• 第三章 實驗結果26-34
• 3.1 CLDN4及Mecp-2 在組織中的表達結果26-29
• 1. CLDN4在喉癌組織中的表達26
• 2. CLDN4與腫瘤分化程度的相關性分析26-27
• 3. Mecp-2 在喉癌組織中的表達27-28
• 4. Mecp-2 與腫瘤分化程度相關性分析28-29
• 5. 喉癌組織中CLDN4表達與Mecp-2 表達的相關性分析29
• 3.2 5-aza-dc 對 hep-2 細胞 CLDN4 表達的影響29-31
• 3.2.1 RT-PCR 法檢測 5-aza-dc 對 hep-2 細胞 CLDN4 mRNA 表達的影響29-30
• 3.2.2 Western blot 法檢測 5-aza-dc 對 hep-2 細胞 CLDN4 蛋白表達的影響30-31
• 3.3 5-aza-dc上調CLDN4對hep-2細胞遷移及侵襲能力的影響31-34
• 3.3.1 5-aza-dc上調CLDN4對hep-2細胞遷移能力的影響31-32
• 3.3.2 5-aza-dc上調CLDN4對hep-2細胞侵襲能力的影響32-34
• 第四章 討論34-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-45
• 作者簡介及在學期間所發(fā)表的論文45-46
• 致謝46

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