本文關(guān)鍵詞：Cyclophilin D在氧化應(yīng)激下人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中的表達(dá)

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【摘要】：目的檢測(cè)氧化應(yīng)激下人視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞內(nèi)Cyclophilin D的表達(dá),初步探索RPE細(xì)胞氧化損傷保護(hù)新靶點(diǎn)。方法培養(yǎng)細(xì)胞系A(chǔ)RPE19及人原代RPE細(xì)胞,相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡免疫熒光法鑒定細(xì)胞。不同濃度H_2O_2(0μmol·L~(-1)、100μmol·L~(-1)、500μmol·L~(-1)、1 mmol·L~(-1))處理細(xì)胞24 h后,應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)Cyclophilin D在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。隨后預(yù)先在部分細(xì)胞中加入3μmol·L~(-1)環(huán)孢素A(cyclosporin A,Cs A)處理30 min后再加入不同濃度H_2O_2(80μmol·L~(-1)、160μmol·L~(-1)、320μmo·L~(-1))2 h,即Cs A+H_2O_2組,應(yīng)用乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)法檢測(cè)細(xì)胞致死率,并與H_2O_2組的LDH釋放量相比較。結(jié)果培養(yǎng)的ARPE19和人原代RPE細(xì)胞均表達(dá)RPE細(xì)胞特異性抗體RPE65。100μmol·L~(-1)H_2O_2處理細(xì)胞24 h后Cyclophilin D表達(dá)量明顯升高,當(dāng)H_2O_2濃度增加到500μmol·L~(-1)時(shí),Cyclophilin D表達(dá)量降低,1 mmol·L~(-1)H_2O_2處理時(shí),Cyclophilin D表達(dá)水平未見增加。在各H_2O_2組組間,LDH的釋放量隨著H_2O_2濃度的升高而增加;與H_2O_2組相比,Cs A+H_2O_2組LDH的釋放水平明顯降低(P0.05)。結(jié)論氧化應(yīng)激下RPE細(xì)胞內(nèi)Cyclophilin D的表達(dá)升高,該蛋白表達(dá)的增加可能進(jìn)一步導(dǎo)致氧化應(yīng)激下細(xì)胞的死亡,Cs A可能成為RPE細(xì)胞保護(hù)的新策略。
【作者單位】： 西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院眼科;
【關(guān)鍵詞】： 氧化應(yīng)激 Cyclophilin D 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 環(huán)孢素A
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助(編號(hào):81100665) 陜西省科技廳科技新星基金資助(編號(hào):2013KJXX-31)~~
【分類號(hào)】：R774.1
【正文快照】： 目前氧化應(yīng)激被公認(rèn)為在老年性黃斑變性和糖尿病視網(wǎng)膜病變等脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用[1-2]。在生理性的視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞自我更新過程中,其細(xì)胞外節(jié)部分被氧化,從而激活視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞的吞噬功能,此過程中產(chǎn)生像過

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