本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)順鉑誘導(dǎo)離體小鼠耳蝸細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)對(duì)順鉑(cisplatin,CDDP)誘導(dǎo)離體小鼠耳蝸細(xì)胞凋亡的影響,探討CDDP誘導(dǎo)耳蝸細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制,為臨床防護(hù)CDDP耳毒性聾提供新思路。方法將新生3~5天昆明小鼠耳蝸基底膜分離,置于含有1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基/F12(Dulbecco's Modified Eagle Media:Nutrient Mixture F/12,DMEM/F12)中培養(yǎng),24h后棄去原培養(yǎng)基。1.將基底膜隨機(jī)分成五組,對(duì)照組加入不含CDDP的新鮮培養(yǎng)基2m I,其余四組分別加入含有不同濃度CDDP(4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml和32μg/ml)的新鮮培養(yǎng)基2ml,繼續(xù)培養(yǎng)24h后終止實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽熒光染色方法觀察小鼠耳蝸毛細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,耳蝸毛細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)毛細(xì)胞缺失率;應(yīng)用異硫氰酸四甲基羅丹明(Tetramethylrhodamine isothiocyanate,TRITC)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽與Hoechst33258雙重?zé)晒馊旧椒ㄓ^察小鼠耳蝸毛細(xì)胞的凋亡,并檢測(cè)毛細(xì)胞凋亡率;應(yīng)用免疫印跡技術(shù)(Western blot)檢測(cè)ERS標(biāo)志蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein,GRP78)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,caspase-12)在小鼠耳蝸細(xì)胞中的表達(dá);同時(shí)應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)在小鼠耳蝸細(xì)胞中的表達(dá)。2.將基底膜隨機(jī)分成四組,對(duì)照組加入不含CDDP的新鮮培養(yǎng)基2ml,CDDP組加入含有16μg/ml順鉑的新鮮培養(yǎng)基2ml,牛磺熊去氧膽酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)組加入含有500μg/ml TUDCA的新鮮培養(yǎng)基2ml,CDDP+TUDCA組預(yù)先加入含有500μg/ml TUDCA的新鮮培養(yǎng)基2ml,15min后加入16μg/ml順鉑,與其它三組同時(shí)培養(yǎng)24h后終止實(shí)驗(yàn)。采用Western blot技術(shù)檢測(cè)GRP78和caspase-12在小鼠耳蝸細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果1.FITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色顯示為綠色熒光。對(duì)照組小鼠耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞(inner hair cell,IHC)和外毛細(xì)胞(outer hair cell,OHC)著色均勻,纖毛結(jié)構(gòu)完好、排列有序,耳蝸毛細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示IHC與OHC的缺失率均低于1%;CDDP組小鼠耳蝸毛細(xì)胞出現(xiàn)纖毛倒伏、缺失、排列紊亂等形態(tài)變化,當(dāng)CDDP濃度為4μg/ml時(shí),OHC缺失率明顯增大,與對(duì)照組比較差異顯著(P0.05),而IHC缺失率無明顯變化(P0.05);并且隨著CDDP濃度的逐漸增高,耳蝸IHC與OHC的缺失率均顯著增大,呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系(P0.05,P0.01)。2.Hoechst 33258染色結(jié)果顯示,對(duì)照組小鼠耳蝸毛細(xì)胞核呈淡藍(lán)色,核內(nèi)染色質(zhì)分布比較均勻,毛細(xì)胞凋亡率低于5%。CDDP組小鼠耳蝸毛細(xì)胞核因明顯固縮而呈亮藍(lán)色,核內(nèi)染色質(zhì)邊緣化、凝集成塊狀或呈不規(guī)則碎片狀;并且隨著CDDP濃度的逐漸增高,破碎的細(xì)胞核顯著增多,毛細(xì)胞凋亡率顯著增大,呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系(P0.01)。3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,對(duì)照組小鼠耳蝸GRP78和caspase-12的蛋白表達(dá)微弱,而CDDP組小鼠耳蝸上述蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照組明顯增高(P0.01),并且隨著CDDP濃度的逐漸增高而顯著增強(qiáng)(P0.01)。加入TUDCA后,小鼠耳蝸中GRP78和caspase-12的蛋白表達(dá)水平較CDDP組明顯降低(P0.01)。4.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,對(duì)照組小鼠耳蝸IRE1、JNK1、JNK2和Bax的蛋白表達(dá)微弱,而CDDP組小鼠耳蝸上述蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照組明顯增高(P0.01),并且隨著CDDP濃度的逐漸增高而顯著增強(qiáng)(P0.01)。結(jié)論ERS相關(guān)蛋白GRP78、IRE1、JNK和caspase-12在CDDP干預(yù)后離體小鼠耳蝸中的高表達(dá),提示ERS可能參與了CDDP誘導(dǎo)的小鼠耳蝸細(xì)胞凋亡,IRE1通路可能是ERS介導(dǎo)順鉑所致離體小鼠耳蝸細(xì)胞凋亡的途徑之一。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 順鉑 耳蝸 細(xì)胞凋亡 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 肌醇需求酶1
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R764.43
【目錄】：

• 中文論著摘要4-7
• 英文論著摘要7-11
• 英文縮略語表11-13
• 前言13-16
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法16-21
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 附錄39-53
• 綜述39-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 在學(xué)期間科研成績50-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡介52-53

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王東生,袁肇凱,郭志華;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2000年12期

2 萬曉艷,于蘇國,郭玉芹,何慶;細(xì)胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進(jìn)展[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞凋亡[J];中國臨床康復(fù);2004年27期

4 王會(huì)玲,景文莉,張小紅,高維娟;細(xì)胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

5 梁薇;細(xì)胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機(jī)制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細(xì)胞凋亡與細(xì)胞養(yǎng)生[J];中國科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細(xì)胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè));1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強(qiáng);細(xì)胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學(xué);1998年01期

9 ;美開發(fā)調(diào)控細(xì)胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽;細(xì)胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2000年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細(xì)胞位置的細(xì)胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細(xì)胞凋亡及其機(jī)理的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細(xì)胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細(xì)胞凋亡的機(jī)制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細(xì)胞凋亡的機(jī)制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細(xì)胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會(huì)論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運(yùn)動(dòng)中細(xì)胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2006年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場對(duì)細(xì)胞凋亡作用的初步探討[A];中國物理學(xué)會(huì)第九屆靜電學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2000年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 商?hào)|;“細(xì)胞凋亡”與臨床醫(yī)學(xué)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

2 張志軍;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

3 ;“細(xì)胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細(xì)胞凋亡療法[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

5 李明輝;“細(xì)胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2002年

6 洪敏;細(xì)胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

7 陶春祥;細(xì)胞凋亡對(duì)心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

8 本報(bào)實(shí)習(xí)記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開關(guān)”[N];北京科技報(bào);2010年

9 高書明;誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張浩;從分子、細(xì)胞和動(dòng)物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的效應(yīng)與機(jī)理[D];山東大學(xué);2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細(xì)胞凋亡的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡效應(yīng)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達(dá)而促腎近曲小管上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負(fù)調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對(duì)PC3細(xì)胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

7 徐林艷;腫瘤細(xì)胞凋亡過程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動(dòng)力學(xué)行為研究[D];上海大學(xué);2015年

9 王德選;WNK_3對(duì)鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)子的調(diào)節(jié)及在胚腎細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)對(duì)人胚腎細(xì)胞(HEK293)的毒理效應(yīng)及作用機(jī)制研究[D];中國科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所;2015年

2 張薇;蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡的研究[D];云南民族大學(xué);2015年

3 唐建國;視黃醇X受體出核抑制對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細(xì)胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡途徑探究[D];江南大學(xué);2015年

5 楊翔;Procaspase-8的異常表達(dá)抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[D];昆明理工大學(xué);2015年

6 張昌明;I3C通過調(diào)控p53泛素化對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡的影響[D];延邊大學(xué);2015年

7 彭涵;共軛亞油酸對(duì)仔豬脂肪細(xì)胞凋亡的影響[D];西南大學(xué);2015年

8 李立輝;ΔFosB通過MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

9 楊鑫鋮;Hedgehog信號(hào)通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 賈瓊瓊;MicroRNA-214對(duì)H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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