本文關(guān)鍵詞：atRA和RARβ對Dectin-1介導(dǎo)的角膜上皮細胞抗真菌固有免疫的影響

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【摘要】：目的：研究全反式維甲酸(atRA)及其受體RAR β對Dectin-1介導(dǎo)的角膜上皮細胞抗真菌固有免疫的影響,探討atRA抑制抗真菌固有免疫的機制。方法：煙曲霉菌菌絲刺激體外培養(yǎng)的永生化人角膜上皮細胞(HCECs) 4、8、12、16、32h之后應(yīng)用RT-qPCR及western blot技術(shù)檢測RAR β mRNA及蛋白的表達水平。煙曲霉菌刺激不同濃度外源性atRA預(yù)處理的HCECs, RT-qPCR, Western Blot及酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組細胞中Dectin-1,TNF-α和IL-6 mRNA及蛋白的表達。煙曲霉菌刺激未處理或RAR β抑制劑LE135 (10μg/ml)聯(lián)合atRA預(yù)處理的HCECs,以及RAR β激動劑CD2314 (1μg/ml)預(yù)處理細胞,刺激8h或16h后收取細胞,用RT-qPCR及Western Blot技術(shù)檢測Dectin-1 mRNA及蛋白的表達量。結(jié)果：真菌刺激HCECs后,RAR β mRNA和蛋白表達量較正常對照組均明顯升高,其中mRNA表達量在8h時到達最高,蛋白在16h表達量最多。與真菌刺激組比較,濃度為10-8M、10-7M、10-6M的atRA分別預(yù)處理HCECs 12h后給予相同濃度菌絲刺激,Dectin-1 mRNA和蛋白水平均有明顯的下降(P0.001),而且濃度為10-6M的atRA抑制作用最明顯(P0.001)。與菌絲刺激組比較,10-6 M atRA預(yù)處理HCECs組中IL-6, TNF-αmRNA及蛋白表達水平較煙曲霉菌刺激組顯著下降(P0.01)。與atRA和菌絲刺激組比較,LE135預(yù)處理HCECs組,Dectin-1 mRNA和蛋白表達水平較atRA抑制組升高(P0.01)。與菌絲刺激組比較,CD2314預(yù)處理HCECs組,Dectin-1 mRNA和蛋白表達量較菌絲刺激組下降(P0.001)。結(jié)論：RAR β在煙曲霉菌刺激后的人角膜上皮細胞中表達增加。atRA可抑制Dectin-1和促炎性細胞因子的表達,RAR β介導(dǎo)atRA對Dectin-1的免疫調(diào)節(jié)的作用。
【關(guān)鍵詞】：atRA Dectin-1 RARβ 角膜上皮細胞 抗真菌免疫
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R772.2
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 材料與方法8-18
• 1.1 實驗材料8-10
• 1.1.1 實驗細胞和菌種8
• 1.1.2 實驗主要試劑及耗材8-10
• 1.1.3 實驗所需儀器10
• 1.2 實驗方法10-16
• 1.2.1 人永生化角膜上皮細胞的體外培養(yǎng)10-11
• 1.2.2 煙曲霉菌培養(yǎng)及菌絲抗原刺激液的制備11
• 1.2.3 HCECs的預(yù)處理及菌絲刺激11-12
• 1.2.4 RT-qPCR實驗12-14
• 1.2.5 Western blot實驗14-16
• 1.2.6 ELISA實驗16
• 1.3 統(tǒng)計學處理16-18
• 第二章 結(jié)果18-22
• 2.1 體外培養(yǎng)人角膜上皮細胞（HCECs）的形態(tài)學觀察18
• 2.2 RAR β在煙曲霉菌感染的角膜上皮細胞的表達18
• 2.2.1 RAR β mRNA表達的變化18
• 2.2.2 RAR β蛋白濃度的變化18
• 2.3 atRA抑制人角膜上皮細胞Dectin-1表達的上調(diào)18-19
• 2.3.1 atRA抑制煙曲霉菌菌絲引起的Dectin-1mRNA表達的上調(diào)18-19
• 2.3.2 atRA抑制煙曲霉菌菌絲引起的Dectin-1蛋白表達的上調(diào)19
• 2.4 atRA通過RAR β調(diào)節(jié)真菌感染的角膜上皮細胞Dectin-1的表達19-20
• 2.4.1 RAR β和atRA共刺激真菌感染的角膜上皮細胞Dectin-1 mRNA的表達19-20
• 2.4.2 RAR β和atRA共刺激真菌感染的角膜上皮細胞Dectin-1蛋白的表達20
• 2.5 atRA抑制人角膜上皮細胞TNF-α、IL-6表達的上調(diào)20-22
• 2.5.1 atRA抑制煙曲霉菌菌絲引起的TNF-α、IL-6mRNA表達的上調(diào)20
• 2.5.2 atRA抑制煙曲霉菌菌絲引起的TNF-α、IL-6蛋白的表達20-22
• 第三章 討論22-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻26-28
• 綜述28-36
• 參考文獻34-36
• 攻讀學位期間的研究成果36-37
• 附錄37-43
• 致謝43-44

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