本文關(guān)鍵詞：玻璃體注射腺相關(guān)病毒2和慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠視網(wǎng)膜的比較

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【摘要】：目的通過玻璃體注射重組腺相關(guān)病毒2載體(r AAV2)和慢病毒載體(LV),比較兩者轉(zhuǎn)染成年大鼠視網(wǎng)膜的異同。方法實驗組大鼠60只,每組12只玻璃體內(nèi)分別注射重組腺相關(guān)病毒2載體-增強綠色熒光蛋白(r AAV2-EGFP)、重組腺相關(guān)病毒2載體-神經(jīng)突起素-增強綠色熒光蛋白(r AAV2-neuritin-EGFP)、慢病毒載體-紅色熒光蛋白(LV-RFP)和慢病毒載體-神經(jīng)突起素-紅色熒光蛋白(LV-neuritin-RFP),對照組注射等量的生理鹽水,4周后取材,采用免疫熒光和CTB-FITC檢測2種病毒載體在視網(wǎng)膜中轉(zhuǎn)染的細胞及轉(zhuǎn)染率,然后分別采用Real-time PCR和Western blotting檢測神經(jīng)突起素(neuritin)在視網(wǎng)膜中的表達變化。結(jié)果 r AAV2能夠轉(zhuǎn)染約70%視網(wǎng)膜節(jié)細胞(RGCs),LV主要轉(zhuǎn)染色素上皮細胞,RGCs轉(zhuǎn)染率僅為30%;r AAV2-neuritin-EGFP組神經(jīng)突起素mRNA表達約是r AAV2-EGFP組和對照組的16倍,蛋白表達約為3倍;LV-neuritin-RFP組神經(jīng)突起素mRNA表達約是LVRFP組和對照組的5.5倍,蛋白表達約為1.7倍。結(jié)論 r AAV2玻璃體注射后,轉(zhuǎn)染大部分RGCs且神經(jīng)突起素表達量高于LV,LV主要轉(zhuǎn)染色素上皮細胞,提示基因治療眼科疾病和損傷時,涉及到轉(zhuǎn)染RGCs時應(yīng)采用r AAV2載體,轉(zhuǎn)染色素上皮時宜采用LV載體。
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學基礎(chǔ)部解剖學教研室;
【關(guān)鍵詞】： 眼 腺相關(guān)病毒 慢病毒 視網(wǎng)膜 免疫印跡法 大鼠
【基金】：國家自然科學基金(31271282,31571239)
【分類號】：R77
【正文快照】： Acland[1]等通過重組腺相關(guān)病毒將視網(wǎng)膜色素上皮特異性蛋白65(RPE65)注射到患有Leber先天性黑蒙病狗的視網(wǎng)膜下腔,使其恢復視覺功能。美國和英國的3個研究小組率先開展了Leber先天性黑蒙患者基因治療的臨床實驗,部分患者的視功能得到恢復[2]。顯然,基因治療作為一種新型分子

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本文編號：806816