本文關(guān)鍵詞：職業(yè)性噪聲聾工人血清miRNAs的表達(dá)差異分析

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【摘要】：實驗?zāi)康?研究職業(yè)性噪聲聾工人與聽力正常工人之間血清中micro RNAs(mi RNAs)的表達(dá)差異。通過實驗篩選并驗證表達(dá)差異性mi RNAs,并對其進(jìn)行靶基因的預(yù)測和驗證,分析職業(yè)性噪聲聾致病機理,為后續(xù)的研究提供實驗數(shù)據(jù)的支持。實驗方法:1.從病人血樣標(biāo)本中分離出300-500μL的血清,并對其進(jìn)行編號、記錄和分裝,并在-80℃冰箱進(jìn)行長期保存。之后建立血液樣本信息數(shù)據(jù)庫,并從數(shù)據(jù)庫中篩選后續(xù)實驗所需的樣本。2.對血清樣本進(jìn)行mi RNAs的分離與純化。將提取出的總mi RNAs用分光光度計進(jìn)行質(zhì)量檢測,確定濃度和總量是否能夠進(jìn)行mi RNAs的芯片雜交實驗。3.進(jìn)行mi RNAs標(biāo)記反應(yīng)體系的準(zhǔn)備、10×Blocking Agent的配制、雜交樣品的準(zhǔn)備、雜交混合液的配制、芯片雜交、芯片洗滌、芯片掃描、芯片數(shù)據(jù)提取等操作流程,完成mi RNAs芯片實驗。并通過圖表對mi RNAs雜交實驗結(jié)果進(jìn)行評價。最終找出差異性mi RNAs。4.對芯片雜交實驗的結(jié)果進(jìn)行熒光定量PCR的驗證,分析結(jié)果的可信度。再將篩選出的mi RNAs進(jìn)行靶基因的預(yù)測,并驗證其對靶基因表達(dá)的影響。結(jié)果:1.所有血液樣本均已提取血清,并進(jìn)行記錄、編號及保存。建立血樣數(shù)據(jù)庫,在數(shù)據(jù)庫中篩選出需進(jìn)行后續(xù)實驗的血清樣本共6個,其中對照組3個,耳聾組3個。2.經(jīng)過對實驗所得mi RNAs進(jìn)行質(zhì)量檢測,耳聾組(編號1-3)和對照組(編號1-3)樣本的mi RNAs濃度及質(zhì)量達(dá)到芯片雜交實驗的標(biāo)準(zhǔn)。3.從6個樣本的質(zhì)量檢測結(jié)果來看樣本的完整性和純度均符合實驗要求。通過分析mi RNA芯片雜交實驗結(jié)果,共篩選出8個差異性mi RNAs,它們是hsa-mi R-1229-5p,hsa-mi R-3162-5p,hsa-mi R-4459,hsa-mi R-483-5p,hsa-mi R-6087,hsa-mi R-6088,hsa-mi R-638和hsa-mi R-4484。4.熒光定量PCR的驗證結(jié)果表明,在所選耳聾組樣本中hsa-mi R-1229-5p和hsa-mi R-483-5p這兩條mi RNAs的表達(dá)量均高于對照組。對它們的靶基因進(jìn)行預(yù)測,其中hsa-mi R-1229-5p可能的靶基因為ATG101,MAPK1,SLC12A6,SLC25A24,SLC30A8和SLC9C1,hsa-mi R-483-5p可能的靶基因為SRF和MAPK3。經(jīng)定量PCR結(jié)果驗證,hsa-mi R-1229-5p的靶基因為MAPK1,SLC12A6,SLC25A24和SLC30A8,hsa-mi R-483-5p的靶基因為SRF。結(jié)論:1.芯片雜交結(jié)果表明,從6個樣本中共篩選出8個差異性mi RNAs,它們是hsa-mi R-1229-5p,hsa-mi R-3162-5p,hsa-mi R-4459,hsa-mi R-483-5p,hsa-mi R-6087,hsa-mi R-6088,hsa-mi R-638,hsa-mi R-4484。2.經(jīng)過驗證發(fā)現(xiàn)職業(yè)性噪聲聾工人血清中hsa-mi R-1229-5p,和hsa-mi R-483-5p的表達(dá)量均高于對照組。靶基因的預(yù)測結(jié)果及驗證表明,hsa-mi R-1229-5p的靶基因為MAPK1,SLC12A6,SLC25A24和SLC30A8,hsa-mi R-483-5p的靶基因為SRF。
【關(guān)鍵詞】：microRNA 職業(yè)性噪聲聾 芯片雜交
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R764.43
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 血液樣本的處理與篩選13-17
• 1 實驗材料與儀器13
• 2 實驗方法與步驟13-14
• 2.1 注意事項13
• 2.2 血液樣本離心前的準(zhǔn)備13
• 2.3 血液樣本的離心13-14
• 2.4 血液樣本的保存14
• 3 血液樣本的篩選14-15
• 3.1 血液樣本數(shù)據(jù)庫的建立14-15
• 3.2 血液樣本的篩選15
• 4 結(jié)果15
• 5 討論15-16
• 6 結(jié)論16-17
• 第二部分 miRNAs的提取、純化和質(zhì)量分析17-22
• 1 實驗材料與儀器17
• 2 實驗方法與步驟17-20
• 2.1 miRNAs的提取與純化17-20
• 2.2 miRNAs產(chǎn)量與質(zhì)量分析20
• 3 結(jié)果20
• 4 討論20-21
• 5 結(jié)論21-22
• 第三部分 miRNAs芯片雜交實驗22-31
• 1 實驗材料與儀器22
• 2 實驗方法與步驟22-28
• 2.1 標(biāo)記反應(yīng)體系的準(zhǔn)備22-24
• 2.2 10×Blocking Agent的準(zhǔn)備24
• 2.3 雜交樣品的準(zhǔn)備24
• 2.4 雜交混合液的準(zhǔn)備24-25
• 2.5 芯片洗滌的操作流程25-26
• 2.6 芯片掃描的操作流程26
• 2.7 芯片數(shù)據(jù)提取的操作流程26-28
• 3 結(jié)果28-29
• 4 討論29
• 5 結(jié)論29-31
• 第四部分 miRNAs芯片雜交結(jié)果驗證與靶基因預(yù)測31-47
• 1 實驗材料與儀器31
• 1.1 實驗試劑及耗材31
• 1.2 實驗儀器31
• 2 試驗方法與步驟31-44
• 2.1 miRNAs的cDNAs逆轉(zhuǎn)錄合成31-32
• 2.2 cDNAs的定量32-33
• 2.3 miRNAs靶基因的預(yù)測33
• 2.4 miRNAs靶基因的驗證33-44
• 4 討論44-45
• 5 結(jié)論45-46
• 6 小結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 文獻(xiàn)綜述50-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 致謝59-60
• 作者簡介60-61
• 石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 潘劍英;沈俊;張榮凱;李智富;蔡道章;;基于線粒體PCR基因芯片的骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制[J];中國組織工程研究;2012年46期

2 丁宛瓊;鄭邦健;;某電解鋁企業(yè)綜合車間噪聲暴露作業(yè)人員連續(xù)3年聽力損傷調(diào)查[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志;2009年09期

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本文編號：769896