本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用研究

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【摘要】：目的:研究micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用。方法:1.建立小鼠穿透性角膜移植術(shù)(penetrating keratoplasty,PKP)模型;2.利用Real-time PCR分析mi R-122、CPEB1的表達(dá);3.過表達(dá)agomir/antagomir-122分析CPEB1的表達(dá)及細(xì)胞凋亡;4.體外培養(yǎng)角膜基質(zhì)細(xì)胞系,利用mi R-122結(jié)合位點(diǎn)野生型或突變型的CPEB1的慢病毒感染角膜基質(zhì)細(xì)胞,后用促炎細(xì)胞因子(cytokine,TNFα/IL-1β/TNFγ)刺激并檢測角膜基質(zhì)細(xì)胞的凋亡和NO產(chǎn)生。結(jié)果:1.穿透性角膜移植術(shù)后流式檢測:角膜移植術(shù)后未排斥組中免疫細(xì)胞較對照組的明顯增加(P0.05),而排斥組與對照組之間無明顯差別(P0.05)。2.Real-time PCR:mi R-122及CPEB1在角膜基質(zhì)層中的表達(dá)最高,與角膜上皮層、內(nèi)皮層差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.0001);而在免疫細(xì)胞(DC、BMM、T cell、B cell)中均未檢測到mi R-122的表達(dá),其靶基因CPEB1的表達(dá)量也較低。3.基質(zhì)細(xì)胞感染:利用mi R-122結(jié)合位點(diǎn)野生型或突變型的CPEB1的慢病毒感染角膜基質(zhì)細(xì)胞,48hr后感染率均達(dá)90%以上;4.過表達(dá)agomir/antagomir-122檢測:轉(zhuǎn)染agomir-122的基質(zhì)細(xì)胞中,CPEB1的表達(dá)低于對照組,角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),轉(zhuǎn)染antagomir-122組中CPEB1的表達(dá)高于對照組,角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5.細(xì)胞凋亡及NO檢測:過表達(dá)CPEB1促進(jìn)角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡和NO產(chǎn)生,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);不論是CPEB1-WT或是CPEB1-Mutated基質(zhì)細(xì)胞,應(yīng)用細(xì)胞因子處理48hr凋亡明顯增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);細(xì)胞因子處理組中,CPEB1-WT組中基質(zhì)細(xì)胞較CPEB1-MT組中凋亡明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而未處理組中,CPEB1-WT與CPEB1-MT無明顯差異(P0.05);不論有無細(xì)胞因子刺激,CPEB1-Mutated基質(zhì)細(xì)胞組中,NO的產(chǎn)生均高于CPEB1-WT組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:Micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜基質(zhì)細(xì)胞高表達(dá),而micro RNA-122在免疫細(xì)胞中不表達(dá);當(dāng)micro RNA-122表達(dá)下調(diào)時(角膜移植排斥組),CPEB1表達(dá)呈上升趨勢,導(dǎo)致角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡及NO產(chǎn)生增加,從而促進(jìn)角膜移植術(shù)后免疫排斥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：microRNA-122 胞質(zhì)多聚腺苷酸化結(jié)合蛋白1 細(xì)胞凋亡 移植免疫排斥 角膜基質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R779.65
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-4
• 主要縮略詞表4-7
• 引言7-10
• 第一章 材料與方法10-26
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料10-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法13-25
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析方法25-26
• 第二章 結(jié)果26-28
• 2.1 植片免疫排斥結(jié)果26
• 2.2 流式結(jié)果26
• 2.3 Real-time PCR結(jié)果26
• 2.4 Stromal cell及 293T轉(zhuǎn)染效率結(jié)果26
• 2.5 病毒感染結(jié)果26
• 2.6 Agomir/antagomir-122功能檢測結(jié)果26-27
• 2.7 細(xì)胞凋亡和NO檢測結(jié)果27-28
• 第三章 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 附圖35-40
• 綜述40-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果50-51
• 致謝51-52

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1 陳家祺,陳麗芳;治療性角膜移植的系列研究[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年02期

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3 閆啟昌;第四屆中日角膜捐獻(xiàn)角膜移植中心大會暨大連大會召開[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2002年10期

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6 張燕;;異種角膜移植的倫理考量[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(人文社會醫(yī)學(xué)版);2011年12期

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本文編號：730906