本文關(guān)鍵詞：Notch基因轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)控其增殖分化的研究

  更多相關(guān)文章： 角膜內(nèi)皮細(xì)胞 轉(zhuǎn)染 Notch 分化 增殖

【摘要】：本文旨在選出Notch家族成員中表達(dá)最強(qiáng)的基因,將該基因通過(guò)慢病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞中,研究轉(zhuǎn)基因的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞增殖及分化的轉(zhuǎn)變,探討運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)治療角膜內(nèi)皮細(xì)胞病的可能。通過(guò)撕取后彈力層法培養(yǎng)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞;逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增目的基因片段選出Notch家族各成員中表達(dá)最強(qiáng)的基因,構(gòu)建重組慢病毒載體轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞,運(yùn)用MTT法、免疫熒光、RT-PCR、倒置顯微鏡等方法觀察記錄兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖及分化情況.撕取后彈力層體法可獲得較純凈的單層兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞。Notch家族中的受體Notch2、Notch3及配體Delta1、Jagged1在兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞中有表達(dá),且Notch3表達(dá)最強(qiáng)。慢病毒載體在MOI=100時(shí),轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞72h后其轉(zhuǎn)染效率高達(dá)60%以上。Notch3基因的轉(zhuǎn)染使與內(nèi)皮細(xì)胞分化相關(guān)的a-SMA、增殖相關(guān)的Ki-67基因的表達(dá)增強(qiáng),細(xì)胞連接標(biāo)志基因ZO-1、N-cadherin的表達(dá)降低。慢病毒介導(dǎo)的Notch3基因可成功轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞中并穩(wěn)定表達(dá),Notch3基因的過(guò)表達(dá)提高了Notch信號(hào)通路對(duì)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和分化的調(diào)控能力,該過(guò)程可被γ-分泌酶抑制劑DAPT阻斷。為轉(zhuǎn)基因技術(shù)治療角膜內(nèi)皮細(xì)胞病提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：角膜內(nèi)皮細(xì)胞 轉(zhuǎn)染 Notch 分化 增殖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R772.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 第一章 緒論8-10
• 第二章 材料與方法10-16
• 1．實(shí)驗(yàn)材料10-12
• 2.實(shí)驗(yàn)方法12-15
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析15-16
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-22
• 1.Notch 家族成員在兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)情況16
• 2.慢病毒轉(zhuǎn)染效率16-17
• 3. 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察17-18
• 4．MTT 法檢測(cè)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)基因前后增殖能力18-19
• 5. 相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平的變化19-22
• 第四章 討論22-26
• 第五章 結(jié)論26-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 綜述32-42
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 發(fā)表論文42-44
• 致謝44

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本文編號(hào)：714875