本文關(guān)鍵詞：喉癌相關(guān)miRNAs的篩選及其功能的初步研究

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【摘要】：[目的]運(yùn)用mi RNA基因芯片技術(shù)、Real-time PCR技術(shù)及mi RNA功能實(shí)驗(yàn),探討mi RNAs與喉癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。[方法]1.應(yīng)用分光光度計(jì)及瓊脂糖凝膠電泳法鑒定抽提RNA樣本的質(zhì)量;對(duì)抽提的RNA樣本進(jìn)行熒光標(biāo)記及雜交等處理,在4對(duì)喉癌組織及癌旁組織樣本中篩選喉癌相關(guān)差異表達(dá)的mi RNAs。2.在4對(duì)喉癌組織及癌旁組織中,應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)檢測mi R-99a-5p,mi R-195-5p,mi R-3195,mi R-101-3p,mi R-126-3p的表達(dá)情況驗(yàn)證基因芯片檢測結(jié)果的可靠性;在28對(duì)喉癌組織及癌旁組織的大樣本中,再次檢測mi R-99a-5p、mi R-195-5p、mi R-3195、mi R-101-3p、mi R-126-3p的表達(dá)。檢測采用ABI 7500 PCR儀,數(shù)據(jù)分析用CT分析法,內(nèi)參用Sn RNA U6,定量:采用??CT(Cycle threshold)法相對(duì)定量,計(jì)算公式參照:比率=2-??ct=2-[?Ct(樣品)-?Ct(標(biāo)準(zhǔn)品)],?Ct=Ct(目標(biāo)基因) Ct(內(nèi)參)。3.將合成的mi R-3195模擬物(mimic)及抑制物(inhibitor)分別轉(zhuǎn)染至喉癌Hep2細(xì)胞株中,應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)在各個(gè)實(shí)驗(yàn)組(mi R-3195 mimic組、mimic NC組、mi R-3195 inhibitor組、inhibitor NC組、未轉(zhuǎn)染組)中觀察mi R-3195表達(dá)上調(diào)或下調(diào)對(duì)喉癌Hep2細(xì)胞增殖情況的影響。4.將合成的mi R-3195模擬物(mimic)轉(zhuǎn)染至喉癌Hep2細(xì)胞株中。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在各個(gè)組(mi R-3195 mimic組、mimic NC組、未轉(zhuǎn)染組)中檢測mi R-3195表達(dá)上調(diào)對(duì)喉癌Hep2細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。[結(jié)果]1.RNA樣本的質(zhì)量鑒定結(jié)果顯示:抽提的每個(gè)RNA樣本的質(zhì)量均滿足條件,可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。經(jīng)過相關(guān)軟件分析,從基因芯片檢測結(jié)果中,篩選出了42個(gè)二倍以上差異表達(dá)的喉癌相關(guān)mi RNAs。mi R-21-5p、mi R-3651、mi R-222-3p、mi R-1246、mi R-181d,mi R-193b-3p等22個(gè)mi RNAs在4例喉癌組織中的表達(dá)均上調(diào)(Foldchange2,P0.05);mi R-99a-5p、mi R-195-5p、mi R-3195、mi R-101-3p、mi R-126-3p等20個(gè)mi RNAs在4例喉癌組織中的表達(dá)均下調(diào)(Foldchange0.5,P0.05)。2.Real-time PCR的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了mi R-99a-5p,mi R-195-5p,mi R-3195,mi R-101-3p,mi R-126-3p等5個(gè)mi RNAs在4例喉癌組織中均下調(diào),與基因芯片檢測結(jié)果一致,說明基因芯片結(jié)果是可靠的。在28例大樣本喉癌組織標(biāo)本中mi R-3195顯著下調(diào),且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染mi R-3195 mimic組喉癌Hep2細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)量明顯低于對(duì)照組(P0.05),mi R-3195表達(dá)上調(diào)顯著抑制細(xì)胞增殖能力;反之,轉(zhuǎn)染mi R-3195 inhibitor組喉癌Hep2細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)量明顯高于對(duì)照組(P0.05),mi R-3195表達(dá)下調(diào)顯著增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力。4.細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染mi R-3195 mimic組喉癌Hep2細(xì)胞的克隆形成數(shù)明顯低于對(duì)照組(P0.05),mi R-3195表達(dá)上調(diào)顯著抑制細(xì)胞增殖能力;轉(zhuǎn)染mi R-3195 inhibitor組喉癌Hep2細(xì)胞的形成克隆數(shù)明顯高于對(duì)照組(P0.05),mi R-3195表達(dá)下調(diào)顯著增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力。5.流式檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染mi R-3195 mimic組喉癌Hep2細(xì)胞的凋亡率明顯高于對(duì)照組(P0.05),mi R-3195表達(dá)上調(diào)細(xì)胞凋亡率顯著增加。轉(zhuǎn)染mi R-3195 mimic組喉癌Hep2細(xì)胞的細(xì)胞周期中,G1期的細(xì)胞明顯增多(P0.05),mi R-3195表達(dá)上調(diào)使得喉癌Hep2細(xì)胞阻滯于G1期,向S期轉(zhuǎn)變減少,從而抑制Hep2細(xì)胞的增殖。[結(jié)論]1.首次發(fā)現(xiàn)mi R-3195在喉癌組織中顯著下調(diào)。2.mi R-3195可作為抑癌基因抑制喉癌細(xì)胞的增殖能力及細(xì)胞周期進(jìn)展、促進(jìn)喉癌細(xì)胞的凋亡參與喉癌的調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：喉癌 mi RNAs mi R-3195
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 第1章 緒論13-17
• 第2章 喉癌相關(guān)mi RNAs的篩選17-37
• 2.1 材料17-19
• 2.2 方法19-23
• 2.3 結(jié)果23-30
• 2.4 討論30-37
• 第3章 miR-3195 抑制喉癌Hep2細(xì)胞株增殖的實(shí)驗(yàn)研究37-51
• 3.1 材料37-38
• 3.2 方法38-42
• 3.3 結(jié)果42-47
• 3.4 討論47-51
• 第4章 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 文獻(xiàn)綜述59-71
• 參考文獻(xiàn)65-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間科研成果71-73
• 資助科研的基金項(xiàng)目73-75
• 致謝75

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：680567