本文關(guān)鍵詞：ERK抑制劑對間歇低氧早期大鼠神經(jīng)元凋亡及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 間歇低氧 ERK信號通路 神經(jīng)元凋亡 凋亡蛋白 海馬

【摘要】：目的通過構(gòu)建大鼠間歇性低氧模型,觀察早期間歇低氧后大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),注入ERK抑制劑(U0126)將ERK信號通路阻斷,探討ERK信號通路對早期間歇低氧大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。方法選取Wistar成年雄性大鼠135只,采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為正常對照組(UC組)、間歇低氧組(IH組)、ERK抑制劑組(U0126組),每組又分為1d、3d、7d、10d、14d五個時間亞組,每個亞組選取9只大鼠。ERK抑制劑組于每日晨起7:00尾靜脈注入U0126(0.2mg/kg),注射30min后與IH組大鼠一起放入低氧箱內(nèi),使低氧箱內(nèi)交替循環(huán)不同流速的壓縮空氣及氮?dú)?其中每個循環(huán)時間為120s,氧濃度波動在5%至21%之間,每日暴露時間為7h;UC組大鼠置于低氧箱內(nèi),持續(xù)給予21%氧濃度的空氣。每天各組大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,置于飼養(yǎng)條件及生活環(huán)境相同的普通飼養(yǎng)箱,給予充足的飼料及水源。在設(shè)計好的時間點(diǎn)處死大鼠,采用免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠海馬CA1區(qū)ERK1/2、P53、Bax、Bcl-2的表達(dá);蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測海馬CA1區(qū)ERK1/2、P53的表達(dá);應(yīng)用原位末端標(biāo)記法檢測大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。免疫組化結(jié)果采用Motic醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析,分析所得結(jié)果用積分光密度(IOD)值表示;采用Image J軟件分析系統(tǒng)分析Western Blot條帶的吸光度A值,選擇GAPDH作為內(nèi)參,每個樣本取3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,每個樣本的A值與其內(nèi)參A值相比所得值為最后結(jié)果;Tunel實(shí)驗(yàn)結(jié)果在顯微鏡40×10相同倍數(shù)下觀察,每張切片隨機(jī)選擇不同的視野5個,分別算出大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的總細(xì)胞數(shù)目及凋亡的細(xì)胞數(shù)目,凋亡細(xì)胞數(shù)目/總細(xì)胞數(shù)目×100%即為細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)。采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,分析實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示,多組間的相互比較采用的方法是單因素方差分析(Oneway ANOVA),其中以P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞凋亡的情況:光鏡下凋亡的神經(jīng)細(xì)胞形狀呈橢圓形或圓形,細(xì)胞胞核的大小各異、形態(tài)不規(guī)則,著染呈棕褐顏色或棕黃顏色,非凋亡的神經(jīng)細(xì)胞胞核與凋亡細(xì)胞相比較大,形態(tài)及大小較為均勻,經(jīng)蘇木素復(fù)染后呈藍(lán)色。組間比較:與UC組比較,IH組及ERK抑制劑組在第1d神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)無明顯差異性(P0.05),在第3d、7d、10d、14d的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高(P0.05);與IH組相比,ERK抑制劑組在第3d、7d、10d、14d的神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯下降(P0.05);組內(nèi)比較:UC組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)差異不顯著(P0.05);IH組及ERK抑制劑組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),隨低氧時間的延長神經(jīng)細(xì)胞凋亡指數(shù)呈增加趨勢。2大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞ERK1/2蛋白的表達(dá)結(jié)果:免疫組化及Western Blot結(jié)果均顯示,組間比較:與UC組比較,IH組海馬CAl區(qū)神經(jīng)細(xì)胞ERK1/2蛋白表達(dá)在1d、3d、7d、10d、14d五個時間點(diǎn)顯著升高(P0.05),而ERK抑制劑組ERK1/2蛋白表達(dá)在各個時間點(diǎn)無明顯差異(P0.05);與IH組相比,ERK抑制劑組ERK1/2蛋白在各個時間點(diǎn)的表達(dá)明顯降低(P0.05);組內(nèi)比較:UC組及ERK抑制劑組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較,ERK1/2蛋白的表達(dá)無顯著差異(P0.05);IH組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較,蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),呈先升高后下降的趨勢,在第10d表達(dá)較多。3大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞P53蛋白表達(dá)的結(jié)果:免疫組化及Western Blot結(jié)果均顯示,組間比較:與UC組比較,IH組及ERK抑制劑組海馬CAl區(qū)神經(jīng)細(xì)胞P53蛋白表達(dá)在1d、3d、7d、10d、14d五個時間點(diǎn)顯著升高(P0.05);與IH組相比,ERK抑制劑組P53蛋白在各個時間點(diǎn)的表達(dá)明顯降低(P0.05);組內(nèi)比較:UC組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較P53蛋白表達(dá)差異不顯著(P0.05);IH組及ERK抑制劑組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),呈先升高后下降的趨勢,在第10d表達(dá)較多。4大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)的結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,組間比較:與UC組比較,IH組及ERK抑制劑組海馬CAl區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)在1d、3d、7d、10d、14d五個時間點(diǎn)顯著升高(P0.05);與IH組相比,ERK抑制劑組Bax蛋白在各個時間點(diǎn)的表達(dá)明顯降低(P0.05);組內(nèi)比較:UC組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較Bax蛋白表達(dá)差異不顯著(P0.05);IH組及ERK抑制劑組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),呈先升高后下降的趨勢,于第10d蛋白表達(dá)較多。5大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)的結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示,組間比較:與UC組比較,IH組及ERK抑制劑組海馬CAl區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)在1d、3d、7d、10d、14d五個時間點(diǎn)顯著升高(P0.05);與IH組相比,ERK抑制劑組Bcl-2蛋白在各個時間點(diǎn)的表達(dá)明顯增高(P0.05);組內(nèi)比較:UC組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較Bcl-2蛋白表達(dá)差異不顯著(P0.05);IH組及ERK抑制劑組內(nèi)各時間點(diǎn)之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),呈先升高后下降的趨勢,于第10d蛋白表達(dá)較多。結(jié)論1間歇低氧早期可以引起海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的凋亡及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),同時激活ERK信號通路。2 ERK抑制劑U0126通過阻斷ERK信號通路降低了促凋亡基因P53的表達(dá),同時使Bcl-2與Bax的比值增加,從而減少間歇低氧早期神經(jīng)元的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：間歇低氧 ERK信號通路 神經(jīng)元凋亡 凋亡蛋白 海馬
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R766
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 引言13-15
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究15-43
• 1.1 材料與方法15-23
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物15
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備與試劑15-17
• 1.1.3 動物分組、處理及大鼠間歇低氧低氧模型制作17-19
• 1.1.4 標(biāo)本制作方法19-20
• 1.1.5 海馬神經(jīng)細(xì)胞ERK1/2、P53、Bax、Bcl-2 蛋白檢測及判定20-22
• 1.1.6 海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的檢測及判定（DNA末端原位標(biāo)記法）22-23
• 1.1.7 統(tǒng)計學(xué)處理23
• 1.2 結(jié)果23-34
• 1.2.1 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化23-25
• 1.2.2 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞ERK1/2 蛋白表達(dá)的變化25-28
• 1.2.3 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞P53蛋白表達(dá)的變化28-30
• 1.2.4 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)的變化30-32
• 1.2.5 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2 蛋白表達(dá)的變化32-34
• 1.2.6 各組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2 與Bax蛋白IOD值比值的變化34
• 1.3 討論34-39
• 1.3.1 間歇低氧與ERK信號通路34-35
• 1.3.2 間歇低氧ERK信號通路的激活與神經(jīng)細(xì)胞凋亡35-37
• 1.3.3 間歇低氧及U0126處理后海馬CA1區(qū)P53蛋白表達(dá)的變化37-38
• 1.3.4 間歇低氧及U0126處理后海馬CA1區(qū)Bax、Bcl-2 蛋白表達(dá)的變化38-39
• 1.4 本章小結(jié)39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 第2章 綜述43-51
• 2.1 細(xì)胞凋亡與間歇低氧神經(jīng)損傷43-44
• 2.2 ERK信號通路的抗凋亡作用44
• 2.3 ERK信號通路的促凋亡作用44-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 結(jié)論51-52
• 致謝52-53
• 導(dǎo)師簡介53-54
• 作者簡介54-55
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 齊晶;閔連秋;;低氧預(yù)處理對缺血腦組織p53表達(dá)的影響[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年01期

2 陳萬欣;高俊玲;;氧自由基及其激活的絲裂原活化蛋白激酶通路與顱腦創(chuàng)傷后細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年03期

3 李春;周國平;尹景春;;針灸抗腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的ERK機(jī)制探討[J];湖南中醫(yī)雜志;2014年02期

4 張紅明;曾子玲;李曉燕;;線粒體依賴的凋亡通路與缺血性腦卒中[J];中華老年心腦血管病雜志;2013年07期

5 李小娟;張智博;;MEK/ERK信號通路與腦缺血再灌注損傷[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年09期

6 戰(zhàn)京燕;陳懷永;吳琦;孫昕;馮靖;李雪;徐龍;包翠萍;;HIF-1α在間歇低氧合并肺氣腫大鼠肝細(xì)胞凋亡中的機(jī)制研究[J];天津醫(yī)藥;2014年02期

7 李強(qiáng);楊桂英;李峰;陳敏;唐美玲;劉紅敏;張春娣;楊立群;楊泰;何國平;;ERK信號通路在神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的雙重作用[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年22期

8 TASHIRO Shinichi,ONODERA Satoshi,IKEJIMA Takashi;Phosphorylated extracellular signal-regulated kinase up-regulated p53 expression in shikonin-induced HeLa cell apoptosis[J];Chinese Medical Journal;2005年08期

9 ;U0126 PREVENTS ERK PATHWAY PHOSPHORYLATION AND INTERLEUKIN-1β mRNA PRODUCTION AFTER CEREBRAL ISCHEMIA[J];Chinese Medical Sciences Journal;2004年04期

10 謝欣梅;龐曉斌;趙艷;王保全;陳若蕓;杜冠華;;消栓通絡(luò)有效成分組對氧糖剝奪損傷原代培養(yǎng)神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];藥學(xué)學(xué)報;2014年08期

，

本文編號：676415