本文關(guān)鍵詞：對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮脂褐質(zhì)新成分pdA2E及兩種重要色素成分A2E和ATR-dimer的化學(xué)生物學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 脂褐質(zhì) pdA2E 有機(jī)溶劑 A2E ATR-dimer

【摘要】：年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degenaration, AMD)是多種因素導(dǎo)致的一種慢性退行性眼病,其中視網(wǎng)膜長(zhǎng)期慢性光損害被認(rèn)為是引起黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮及光感受器發(fā)生變性的重要基礎(chǔ)。而脂褐質(zhì)中的類(lèi)視色素二聚體可介導(dǎo)慢性光損傷的發(fā)生,因此,對(duì)類(lèi)視色素二聚體的研究顯得尤其重要。本論文共分為以下兩部分工作：1.在人和牛的RPE (retinal pigment epithelium,視網(wǎng)膜色素上皮)中分離鑒定出一種新的熒光脂褐質(zhì)成分。通過(guò)一維和二維-NMR(nuclear magnetic resonance,核磁共振)和MS (mass spectrum,質(zhì)譜),我們確定了它的結(jié)構(gòu)并將其命名為pdA2E (pentadien N-retinylidene-N-retinyl-ethanolamine,戊二烯N-亞視黃基-N-視黃基-乙醇胺)。該物質(zhì)在492 nm和342 nm有最大吸收,在光催化下容易發(fā)生異構(gòu)和氧化。Abca4-/-Rdh8-/-鼠是AMD和退行性Stargardt's的病理模型,在這些鼠的眼底提取物中也檢測(cè)到了這種熒光團(tuán)。實(shí)驗(yàn)表明,pdA2E在RPE細(xì)胞內(nèi)的過(guò)量積聚能顯著影響細(xì)胞活性并引起細(xì)胞膜損傷。pdA2E由atRAL (all-trans-retinal,全反式視黃醛)和過(guò)量的EA (ethanolamine,乙醇胺)在無(wú)酸的反應(yīng)條件下生成,該過(guò)程可能有三分子atRAL的參與,據(jù)此我們提出了該物質(zhì)的生物合成通路。2.探究了脂褐質(zhì)的體外仿生合成和提取定量體內(nèi)脂褐質(zhì)過(guò)程中常用的有機(jī)溶劑對(duì)A2E (N-retinylidene-N-retinyl-ethanolamine,N-亞視黃基-N-視黃基-乙醇胺)和ATR-dimer (all-trans-retinal dimer,全反式視黃醛二聚體)兩種研究較為廣泛的脂褐質(zhì)的影響。1)用二甲基亞砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、四氫呋喃(THF)、氯仿(CHCl3)和環(huán)已烷(Cyclohexane)(其中Cyclohexane只孵育ATR-dimer)孵育A2E和ATR-dimer, HPLC檢測(cè)發(fā)生的變化。結(jié)果顯示,THF和CHCl3均能使A2E和ATR-dimer發(fā)生變化,但DMSO和MeOH卻使兩者保持穩(wěn)定。此外,Cyclohexane和EtOH均使ATR-dimer保持穩(wěn)定,而EtOH卻使A2E發(fā)生了變化。2)設(shè)計(jì)新方法提取和定量鼠眼底脂褐質(zhì)成分。與已有的提取定量方法相較,新方法效率更高。一方面,我們的工作為脂褐質(zhì)積聚對(duì)RPE施加負(fù)荷提供了新證據(jù),提示了視網(wǎng)膜內(nèi)視黃醛異常代謝的新通路,從而拓寬了對(duì)未知脂褐質(zhì)成分的認(rèn)識(shí),并為AMD的治療提供了可能的新靶點(diǎn)。另一方面,闡明了脂褐質(zhì)體外研究過(guò)程中使用的有機(jī)溶劑的影響,并對(duì)已有的經(jīng)典研究方法提出了有效的改進(jìn),加深了對(duì)已知脂褐質(zhì)成分性質(zhì)的理解,為正確分析內(nèi)源性脂褐質(zhì)提供了依據(jù),促進(jìn)了其合理的測(cè)量方法的建立。這些都為我們深化研究AMD的發(fā)病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：脂褐質(zhì) pdA2E 有機(jī)溶劑 A2E ATR-dimer
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R774.1
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-13
• 第一章 脂褐質(zhì)新成分pdA2E的研究13-39
• 1.1 引言13-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.2.2 組織與細(xì)胞15
• 1.2.3 化學(xué)試劑15
• 1.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法16-20
• 1.3.1 組織成分的HPLC(High Performance Liquid Choromatography,高效液相色譜)分析16
• 1.3.2 仿生反應(yīng)16-17
• 1.3.3 制備17
• 1.3.4 UPLC-MS(ultra performance liquid choromatography-mass spectrum,超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析)17-18
• 1.3.5 光異構(gòu)化18
• 1.3.6 光氧化18
• 1.3.7 細(xì)胞分析18-20
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-31
• 1.4.1 仿生反應(yīng)混合物的產(chǎn)物分析20
• 1.4.2 組織成分中492/342-nm化合物的檢測(cè)20-22
• 1.4.3 492/342-nm色素的鑒定22-26
• 1.4.4 pdA2E的熒光檢測(cè)和光介導(dǎo)的效應(yīng)26-28
• 1.4.5 細(xì)胞攝取和毒性28-31
• 1.5 討論31-34
• 1.6 小結(jié)34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 第二章 A2E和ATR-dimer溶劑效應(yīng)的研究39-57
• 2.1 引言39-42
• 2.2 材料和方法42-44
• 2.2.1 動(dòng)物42
• 2.2.2 A2E和ATR-dimer的制備42
• 2.2.3 色素在有機(jī)溶劑中的孵育42
• 2.2.4 HPLC定量42
• 2.2.5 色素提取和HPLC分析42-43
• 2.2.6 數(shù)據(jù)分析43-44
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-51
• 2.3.1 有機(jī)溶劑對(duì)色素的影響44-46
• 2.3.2 有機(jī)溶劑中色素的定量46-49
• 2.3.3 鼠眼底色素的提取和定量49-51
• 2.4 討論51-52
• 2.5 小結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 總結(jié)57-58
• 綜述58-70
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 作者簡(jiǎn)介70

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 靳秋霞;對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮脂褐質(zhì)新成分pdA2E及兩種重要色素成分A2E和ATR-dimer的化學(xué)生物學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：673047