本文關鍵詞：對視網(wǎng)膜色素上皮脂褐質新成分pdA2E及兩種重要色素成分A2E和ATR-dimer的化學生物學研究

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【摘要】：年齡相關性黃斑變性(age-related macular degenaration, AMD)是多種因素導致的一種慢性退行性眼病,其中視網(wǎng)膜長期慢性光損害被認為是引起黃斑區(qū)視網(wǎng)膜色素上皮及光感受器發(fā)生變性的重要基礎。而脂褐質中的類視色素二聚體可介導慢性光損傷的發(fā)生,因此,對類視色素二聚體的研究顯得尤其重要。本論文共分為以下兩部分工作：1.在人和牛的RPE (retinal pigment epithelium,視網(wǎng)膜色素上皮)中分離鑒定出一種新的熒光脂褐質成分。通過一維和二維-NMR(nuclear magnetic resonance,核磁共振)和MS (mass spectrum,質譜),我們確定了它的結構并將其命名為pdA2E (pentadien N-retinylidene-N-retinyl-ethanolamine,戊二烯N-亞視黃基-N-視黃基-乙醇胺)。該物質在492 nm和342 nm有最大吸收,在光催化下容易發(fā)生異構和氧化。Abca4-/-Rdh8-/-鼠是AMD和退行性Stargardt's的病理模型,在這些鼠的眼底提取物中也檢測到了這種熒光團。實驗表明,pdA2E在RPE細胞內的過量積聚能顯著影響細胞活性并引起細胞膜損傷。pdA2E由atRAL (all-trans-retinal,全反式視黃醛)和過量的EA (ethanolamine,乙醇胺)在無酸的反應條件下生成,該過程可能有三分子atRAL的參與,據(jù)此我們提出了該物質的生物合成通路。2.探究了脂褐質的體外仿生合成和提取定量體內脂褐質過程中常用的有機溶劑對A2E (N-retinylidene-N-retinyl-ethanolamine,N-亞視黃基-N-視黃基-乙醇胺)和ATR-dimer (all-trans-retinal dimer,全反式視黃醛二聚體)兩種研究較為廣泛的脂褐質的影響。1)用二甲基亞砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、四氫呋喃(THF)、氯仿(CHCl3)和環(huán)已烷(Cyclohexane)(其中Cyclohexane只孵育ATR-dimer)孵育A2E和ATR-dimer, HPLC檢測發(fā)生的變化。結果顯示,THF和CHCl3均能使A2E和ATR-dimer發(fā)生變化,但DMSO和MeOH卻使兩者保持穩(wěn)定。此外,Cyclohexane和EtOH均使ATR-dimer保持穩(wěn)定,而EtOH卻使A2E發(fā)生了變化。2)設計新方法提取和定量鼠眼底脂褐質成分。與已有的提取定量方法相較,新方法效率更高。一方面,我們的工作為脂褐質積聚對RPE施加負荷提供了新證據(jù),提示了視網(wǎng)膜內視黃醛異常代謝的新通路,從而拓寬了對未知脂褐質成分的認識,并為AMD的治療提供了可能的新靶點。另一方面,闡明了脂褐質體外研究過程中使用的有機溶劑的影響,并對已有的經(jīng)典研究方法提出了有效的改進,加深了對已知脂褐質成分性質的理解,為正確分析內源性脂褐質提供了依據(jù),促進了其合理的測量方法的建立。這些都為我們深化研究AMD的發(fā)病機制奠定了基礎。
【關鍵詞】：脂褐質 pdA2E 有機溶劑 A2E ATR-dimer
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-13
• 第一章 脂褐質新成分pdA2E的研究13-39
• 1.1 引言13-15
• 1.2 實驗材料15-16
• 1.2.1 實驗動物15
• 1.2.2 組織與細胞15
• 1.2.3 化學試劑15
• 1.2.4 實驗儀器15-16
• 1.3 實驗方法16-20
• 1.3.1 組織成分的HPLC(High Performance Liquid Choromatography,高效液相色譜)分析16
• 1.3.2 仿生反應16-17
• 1.3.3 制備17
• 1.3.4 UPLC-MS(ultra performance liquid choromatography-mass spectrum,超高液相色譜-質譜聯(lián)用分析)17-18
• 1.3.5 光異構化18
• 1.3.6 光氧化18
• 1.3.7 細胞分析18-20
• 1.4 實驗結果20-31
• 1.4.1 仿生反應混合物的產(chǎn)物分析20
• 1.4.2 組織成分中492/342-nm化合物的檢測20-22
• 1.4.3 492/342-nm色素的鑒定22-26
• 1.4.4 pdA2E的熒光檢測和光介導的效應26-28
• 1.4.5 細胞攝取和毒性28-31
• 1.5 討論31-34
• 1.6 小結34-35
• 參考文獻35-39
• 第二章 A2E和ATR-dimer溶劑效應的研究39-57
• 2.1 引言39-42
• 2.2 材料和方法42-44
• 2.2.1 動物42
• 2.2.2 A2E和ATR-dimer的制備42
• 2.2.3 色素在有機溶劑中的孵育42
• 2.2.4 HPLC定量42
• 2.2.5 色素提取和HPLC分析42-43
• 2.2.6 數(shù)據(jù)分析43-44
• 2.3 實驗結果44-51
• 2.3.1 有機溶劑對色素的影響44-46
• 2.3.2 有機溶劑中色素的定量46-49
• 2.3.3 鼠眼底色素的提取和定量49-51
• 2.4 討論51-52
• 2.5 小結52-53
• 參考文獻53-57
• 總結57-58
• 綜述58-70
• 參考文獻64-70
• 作者簡介70

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 靳秋霞;對視網(wǎng)膜色素上皮脂褐質新成分pdA2E及兩種重要色素成分A2E和ATR-dimer的化學生物學研究[D];浙江大學;2015年

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本文編號：673047