發(fā)布時間：2017-08-09 03:19

  本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定過表達XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R細(xì)胞株的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 鼻咽腫瘤 X連鎖凋亡抑制蛋白相關(guān)因子 慢病毒載體 鼻咽癌放射抗拒細(xì)胞 基因轉(zhuǎn)染 熒光效率

【摘要】：目的構(gòu)建穩(wěn)定過表達X連鎖凋亡抑制蛋白相關(guān)因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R細(xì)胞株。方法分別將攜帶XAF1基因感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)為50的慢病毒稀釋液、MOI為100的慢病毒原液和MOI為100的慢病毒原液加入終濃度為5μg/m L的聚凝胺(polybrene)轉(zhuǎn)染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R細(xì)胞株。通過倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)熒光數(shù)量及強度評判轉(zhuǎn)染效率,通過實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction,q RT-PCR)和蛋白免疫印記法(western blot)檢測XAF1基因m RNA和蛋白的表達。結(jié)果慢病毒稀釋液轉(zhuǎn)染,約60%的細(xì)胞可觀察到微弱熒光;慢病毒原液轉(zhuǎn)染,約70%的細(xì)胞觀察到較弱熒光;慢病毒原液加入5μg/m L polybrene的轉(zhuǎn)染效率較高,約90%的細(xì)胞觀察到較強熒光。嘌呤霉素篩選上述轉(zhuǎn)染效率最高的慢病毒原液加5μg/m L polybrene組細(xì)胞,其成功將攜帶XAF1基因的慢病毒轉(zhuǎn)入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R細(xì)胞株。q RT-PCR和western blot進一步證實細(xì)胞株穩(wěn)定過表達XAF1基因。結(jié)論慢病毒加polybrene轉(zhuǎn)染可成功構(gòu)建穩(wěn)定過表達XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R細(xì)胞株。
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院放療科;廣西醫(yī)科大學(xué)研究生院;
【關(guān)鍵詞】： 鼻咽腫瘤 X連鎖凋亡抑制蛋白相關(guān)因子 慢病毒載體 鼻咽癌放射抗拒細(xì)胞 基因轉(zhuǎn)染 熒光效率
【基金】：區(qū)域性高發(fā)腫瘤早期防治研究廣西重點實驗室研究資助項目(GK2015-ZZ07) 廣西醫(yī)科大學(xué)青年科學(xué)基金資助項目(GX-MUYSF201317)
【分類號】：R739.63;R730.55
【正文快照】： X連鎖凋亡抑制蛋白相關(guān)因子1(X-linked inhibitorof apoptosis associated factor 1,XAF1)是一種運用酵母雙雜交法發(fā)現(xiàn)的新的X連鎖凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitor of apoptosis protein,XIAP)的拮抗蛋白。XAF1基因定位于染色體17p13.2位點,通過拮抗XIAP的抗凋亡作用而發(fā)揮抗

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本文編號：643297