本文關(guān)鍵詞：β-catenin過表達(dá)鼻咽癌CNE2細(xì)胞模型的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： 鼻咽腫瘤 真核表達(dá)載體 β-catenin 細(xì)胞模型

【摘要】：目的構(gòu)建β-catenin真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/β-catenin并轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE2細(xì)胞,檢測β-catenin在CNE2細(xì)胞中的表達(dá)。方法反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)擴(kuò)增目的基因β-catenin,膠回收純化后克隆至p GEM-T Easy載體,挑選陽性克隆,抽提質(zhì)粒進(jìn)行kpn I/xba I雙酶切和PCR鑒定,用T4 DNA連接酶將目的基因β-catenin與真核表達(dá)載體pc DNA3.1/Hygro(+)連接,構(gòu)建重組的真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/β-catenin,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5α,再次抽提質(zhì)粒進(jìn)行PCR、kpn I/xba I雙酶切和測序鑒定,然后用Fu GENE HD將純化的pc DNA3.1(+)/β-catenin轉(zhuǎn)染入鼻咽癌CNE2細(xì)胞,經(jīng)Hygromycin B篩選,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染細(xì)胞CNE2/β-catenin中β-catenin的表達(dá)。結(jié)果 PCR、雙酶切及測序鑒定表明,成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/β-catenin;實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測表明,與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞CNE2比較,被轉(zhuǎn)染的CNE2/β-catenin細(xì)胞能夠上調(diào)目的基因β-catenin的表達(dá)(P0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建真核表達(dá)載體pc DNA3.1(+)/β-catenin,并能在轉(zhuǎn)染的CNE2/β-catenin細(xì)胞上調(diào)目的基因β-catenin的表達(dá)。
【作者單位】： 福建省科技廳轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建醫(yī)科大學(xué)教學(xué)醫(yī)院福建省腫瘤醫(yī)院放射生物學(xué)及腫瘤放射治療學(xué)研究室;
【關(guān)鍵詞】： 鼻咽腫瘤 真核表達(dá)載體 β-catenin 細(xì)胞模型
【基金】：福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2014J01299) 福建省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2014Y0014) 國家臨床重點(diǎn)�？平ㄔO(shè)項(xiàng)目[國衛(wèi)辦醫(yī)函(2013)554號(hào)]
【分類號(hào)】：R739.63
【正文快照】： 林可q4蘇穎何火聰鄒長h瓿魯，

本文編號(hào)：627482