本文關(guān)鍵詞：β-catenin過表達鼻咽癌CNE2細胞模型的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建β-catenin真核表達載體pc DNA3.1(+)/β-catenin并轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE2細胞,檢測β-catenin在CNE2細胞中的表達。方法反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)綌U增反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)擴增目的基因β-catenin,膠回收純化后克隆至p GEM-T Easy載體,挑選陽性克隆,抽提質(zhì)粒進行kpn I/xba I雙酶切和PCR鑒定,用T4 DNA連接酶將目的基因β-catenin與真核表達載體pc DNA3.1/Hygro(+)連接,構(gòu)建重組的真核表達載體pc DNA3.1(+)/β-catenin,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞DH5α,再次抽提質(zhì)粒進行PCR、kpn I/xba I雙酶切和測序鑒定,然后用Fu GENE HD將純化的pc DNA3.1(+)/β-catenin轉(zhuǎn)染入鼻咽癌CNE2細胞,經(jīng)Hygromycin B篩選,采用實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)驗證轉(zhuǎn)染細胞CNE2/β-catenin中β-catenin的表達。結(jié)果 PCR、雙酶切及測序鑒定表明,成功構(gòu)建了真核表達載體pc DNA3.1(+)/β-catenin;實時熒光定量PCR和Western blot檢測表明,與未轉(zhuǎn)染細胞CNE2比較,被轉(zhuǎn)染的CNE2/β-catenin細胞能夠上調(diào)目的基因β-catenin的表達(P0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建真核表達載體pc DNA3.1(+)/β-catenin,并能在轉(zhuǎn)染的CNE2/β-catenin細胞上調(diào)目的基因β-catenin的表達。
【作者單位】： 福建省科技廳轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點實驗室福建醫(yī)科大學(xué)教學(xué)醫(yī)院福建省腫瘤醫(yī)院放射生物學(xué)及腫瘤放射治療學(xué)研究室;
【關(guān)鍵詞】： 鼻咽腫瘤 真核表達載體 β-catenin 細胞模型
【基金】：福建省自然科學(xué)基金資助項目(2014J01299) 福建省科技計劃重點項目(2014Y0014) 國家臨床重點專科建設(shè)項目[國衛(wèi)辦醫(yī)函(2013)554號]
【分類號】：R739.63
【正文快照】： 林可q4蘇穎何火聰鄒長h瓿魯，

本文編號：627482