本文關(guān)鍵詞：LncRNA-RNCR2對(duì)糖尿病視神經(jīng)病變的調(diào)控作用研究

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【摘要】：目的：探究長(zhǎng)鏈非編碼RNA-RNCR2在糖尿病性視神經(jīng)病變過(guò)程中的調(diào)控作用及作用機(jī)制。方法：1、首先通過(guò)腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)構(gòu)建大鼠糖尿病模型,實(shí)驗(yàn)分為四組：正常SD大鼠、4 W STZ-SD大鼠、8 W STZ-SD大鼠和12 WSTZ-SD大鼠,qRT-PCR檢測(cè)各組視網(wǎng)膜中RNCR2的表達(dá)水平；構(gòu)建視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal ganglion cell, RGC)和Muller細(xì)胞的高糖損傷模型,實(shí)驗(yàn)分四組：正常濃度葡萄糖(5mmol/L)、高濃度葡萄糖(30mmol/L) 24h、高濃度葡萄糖(30mmol/L) 48 h和高濃度葡萄糖(30mmol/L) 72h, qRT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中RNCR2的表達(dá)水平。2、通過(guò)腹腔注射STZ構(gòu)建大鼠糖尿病模型,實(shí)驗(yàn)分為四組：正常SD大鼠、12 W STZ-SD大鼠、敲除RNCR2的12 W STZ-SD大鼠、敲除Scr-siRNA的12 WSTZ-SD大鼠,采用免疫熒光檢測(cè)各組大鼠視網(wǎng)膜中Muller細(xì)胞蛋白標(biāo)記物GFAP、GS,RGC蛋白標(biāo)記物Neun、TUBB3,雙極細(xì)胞：PKC-α、水平細(xì)胞：Calbindin和無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞：Calretinin的表達(dá)情況。3、利用高濃度葡萄糖(30mmol/L)構(gòu)建RGC、Muller細(xì)胞高糖模型,實(shí)驗(yàn)分四組：對(duì)照組、高糖刺激組、下調(diào)Scr-siRNA的高糖刺激組、下調(diào)RNCR2的高糖刺激組。利用200 μmol/L H2O2構(gòu)建RGC、Muller細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,實(shí)驗(yàn)分四組：對(duì)照組、H202刺激組、下調(diào)Scr-siRNA的H202刺激組、下調(diào)RNCR2的H2O2刺激組。采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的活力；采用Hoechst染色、JC-1染色和PI/Calcein-AM染色檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡和死亡情況；采用細(xì)胞免疫熒光染色Ki-67檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況。4、機(jī)制研究：通過(guò)Western blots技術(shù)檢測(cè)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和重組人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白-3(NT-3)在大鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)水平。結(jié)果：1、在大鼠視網(wǎng)膜組織、RGC細(xì)胞和Muller細(xì)胞中均有RNCR2表達(dá),且隨著STZ-SD大鼠、RGC細(xì)胞和Muller細(xì)胞在高糖環(huán)境下時(shí)間的延長(zhǎng),RNCR2的表達(dá)逐漸增加。2、糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中NeuN和TUBB3表達(dá)下降,GFAP和GS表達(dá)增加；下調(diào)RNCR2后NeuN、TUBB3表達(dá)進(jìn)一步下降,GFAP和GS表達(dá)下降；PKC-α、 Calbindin和Calretinin的表達(dá)無(wú)顯著變化。3、RGC和Muller細(xì)胞給予高糖或H202刺激后,細(xì)胞活力和增殖能力均下降,細(xì)胞死亡和凋亡數(shù)量增加；下調(diào)兩種細(xì)胞RNCR2的表達(dá)并給予高糖或H202刺激后,細(xì)胞活力和增殖能力進(jìn)一步下降,細(xì)胞死亡和凋亡數(shù)量進(jìn)一步增加。4、糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織中BDNF、NT-3和NGF表達(dá)增加,敲除RNCR2后BDNF、NT-3和NGF表達(dá)明顯下降。結(jié)論：糖尿病視神經(jīng)病變會(huì)誘導(dǎo)RNCR2的表達(dá),RNCR2表達(dá)上調(diào)通過(guò)促進(jìn)Muller細(xì)胞的膠質(zhì)化和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子分泌起到對(duì)糖尿病視神經(jīng)病變的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：LncRNA-RNCR2 糖尿病 視神經(jīng)病變 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 M(u|")ller細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-29
• (一) 實(shí)驗(yàn)對(duì)象12
• (二) 主要實(shí)驗(yàn)儀器12-13
• (三) 主要實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• (四) 主要試劑的配制14-17
• (五) 實(shí)驗(yàn)方法17-29
• 結(jié)果29-46
• (一) 高血糖處理誘導(dǎo)RNCR2表達(dá)的上調(diào)29-31
• (二) 下調(diào)RNCR2加重糖尿病對(duì)大鼠視網(wǎng)膜的損傷作用31-35
• (三) RNCR2下調(diào)對(duì)RGC和Muller細(xì)胞的功能影響35-44
• (四) 下調(diào)RNCR2,Muler細(xì)胞分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子減少44-46
• 討論46-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 文獻(xiàn)綜述53-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 附錄一 中英文縮略詞66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李維業(yè),劉熙樸,葉曉丹;Retinal　capilary　pericyte　apoptosis　in　early　human　diabetic　retinopathy[J];Chinese Medical Journal;1997年09期

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本文編號(hào)：569954